薄層色譜實驗裝置

㈠ 如何建立薄層色譜法測定有關物質的方法

如何建立薄層色譜法測定有關物質的方法
有關物質是研究葯品中除主成分以外的雜質，它可能是原料葯合成過程中帶入的原料、中間體、試劑、降解物、副產物、聚合體、異構體以及不同晶型、旋光異構的物質，也可能是制劑過程中產生的降解物，或是在貯藏、運輸、使用過程中產生的降解物等。這些雜質的存在直接反映葯品的有效性和安全性，故要對其進行研究，特別是在葯品申報的質量研究資料中需建立其檢測方法，並根據生產、穩定性考核等實際情況考慮是否在質量標准中制訂該檢查項，規定其限度。目前，有關物質的常用測定方法有高效液相色譜法(HPLC法)和薄層色譜法(TLC法)。
1．測定方法類型
常用的方法有雜質對照品法（適用於已知雜質）和自身（稀釋）對照法（適用於一般雜質檢查，雜質成分少且尚不能取得雜質對照品）。目前國內由於難以獲得雜質對照品、故一般均採用自身對照法。
2．展開劑的確定（即專屬性試驗）
專屬性的研究是提供被分析物在雜質和輔料存在時能被區分的證明，該點是色譜條件建立的關鍵。通常採用在被分析物的對照品或精製品中加入一定量的雜質或輔料，證明色譜條件可將各雜質與被分析物分離[1]。這里的關鍵是：將多少量的雜質加入到多少量的主成分中。正確的作法是將1%(w/w)濃度量的各雜質加入到100%濃度的主成分中，配製這樣的溶液來
驗證系統適用性。之所以如此配製，目的是模仿樣品中有可能存在的狀態，即有少量（1%左右）雜質存在時是否能與主成分達到完全分離，只有這樣才能比較客觀、科學地反映樣品中實際存在情況的（見圖1）；而不應把該溶液配製成：主成分與中間體相同濃度的。因為一者實際檢測時樣品中不可能存在此種情況；二者該濃度不易確定，目前國內申報資料中一般的作法均是配製成較低的一致濃度，這樣各斑點當然易於完全分離了，但在實際測定時，由於主斑點急劇增大，很易將相鄰雜質包含於主成分斑點中。同樣，質量標准中的系統適用性試驗用溶液的配製方法亦如此。
3．檢出條件的確定

其基本出發點是：主成分與相關雜質均應在該條件下顯色，且在相同濃度下，斑點大小應基本一致。薄層板的類型根據被測物質的性質來選用，測定有紫外吸收的物質通常選用GF254或GF365板；測定無紫外吸收、需噴顯色劑的，常選用硅膠G板或H板，選用該類薄層板時，顯色方法根據被測物質的結構式選取，但當有多個顯色方法時，應分別進行試驗，選取靈敏度最高的顯色方法。如醋酸氫化可的松有關物質的測定，中國葯典2000年版採用鹼性四氮唑藍試液顯色，美國葯典26版採用硫酸-乙醇(10:90)溶液顯色，兩者均為激素類葯物的顯色方法。醋酸氫化可的松屬於激素類中的腎上腺皮質激素，四氮唑法是腎上腺皮質激素的重要顯色方法；而硫酸-乙醇顯色法則主要是針對激素類中的雌激素的顯色反應，對於屬於腎上腺皮質激素類的醋酸氫化可的松則反應活性不強，結果兩法的靈敏度相差10倍以上。因此，檢出條件的確定，一定要在查閱文獻的基礎上，並根據試驗結果進行綜合考慮。
4．供試品溶液濃度的確定（靈敏度試驗——最低檢出限的測定）
供試品溶液濃度的設定在有關物質檢測中是至關重要的，濃度越高、越能反映樣品中雜質存在的情況，但若設定得過高，則會產生主斑點嚴重拖尾、「斷腰」等超載現象的發生，產生錯誤結論；若設定太低，又將達不到檢測雜質的目的，觀測不到雜質量的變化。其設定是根據最低點樣量和最大點樣量來綜合考慮的。

最低檢出限雖然是個絕對值，但真正的意義卻是其相對值，即相對於供試品溶液的濃度多少而言，所以測定結果不僅要羅列出其絕對值又應列出其相對值，這樣最低檢出限才有意義！最大點樣量則是通過不斷加大供試品溶液濃度，直至主斑點嚴重拖尾、「斷腰」等情況出現時來得到的。然後根據最低檢出限，採用「上推法」來確定：如一般設定雜質斑點小於1.0%對照斑點，對照溶液的濃度至少應為最低檢出濃度（即最低檢出限）的20~50倍，則供試品溶液濃度是最低檢出濃度的2000~5000倍；反過來，最低檢出濃度應至少達到供試品溶液濃度的0.02%~0.05%。應注意的是：由於最低檢出量和最大點樣量因試驗環境、薄層板質量以及即時試驗時其他各因素的不同而改變（即耐受性因數），故供試品溶液的濃度在保證小於最大進樣量的情況下，可在此基礎上設定得再高一些，以保證該濃度可適用於各種條件下。。

㈡ 薄層色譜法實思考題及答案

色譜法是分離、提純和鑒定有機化合物的重要方法，有著極其廣泛的用途。

色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經該物質時進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。

流動的混合物溶液稱為流動相；固定的物質稱為固定相（可以是固體或液體）。根據組分在固定相中的作用原理不同，可分為吸附色譜、分配色譜等。

吸附色譜常用氧化鋁和硅膠作固定相；分配色譜中以硅膠、硅藻土和纖維素作為支持劑，以吸收較大量的液體作固定相，而支持劑本身不起分離作用。根據操作條件不同，可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜及高效液相色譜等類型。

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利用保留值定型在特定的色譜系統中，化合物的Rf值一定，比較未知物和標准物的Rf值，能夠作為鑒定未知物的依據。定性分析通過顯色等方法定位後，測出斑點的Rf值，與同塊板上的已知對照品斑點的Rf值對比，Rf值一致，即可初步定性該斑點與對照品為同一物質。

然後更換幾種展開系統，如Rf值仍然一致，則可得到較為肯定的定性結論。這種定性方法適用於已知范圍的未知物。由於Rf值重現性差，進行定性困難，因此也常採用相對比移值RS來定性。

板上化學反應定性主要有以下兩種方式：反應後生成特徵顏色的化合物，藉以鑒定反應物；反應後生成復雜的、無法鑒定組分的混合物，但可根據生成物的「指紋」特徵加以鑒定。

除以上兩種定性方法外，還有板上光譜定性、TLC與其他聯用技術間接聯用定性、薄層色譜－傅立葉變換紅外光譜聯用定性以及薄層色譜－質譜聯用定性。將分離後的區帶取下，洗脫後再用其他方法如紫外－可見分光光度法、紅外分光光度法進行進一步定性。

㈢ 薄層色譜的實驗步驟

薄層板的制備
點樣
展開
檢視

㈣ 有機實驗，薄層色譜和紙色譜實驗中，在混合物薄層色譜中，如何判定各組分在薄層上的位置

是的，薄層色譜又叫TLC，操作的方法是：在點樣板中放入原料（如果原料是固體回需要用合適答的溶劑溶解），在反應過程中，先用毛細管取原料，在薄板下方2毫米以上處點一下（點的水平位置視要點的式樣個數決定，平均分配），再取反應液同樣點在薄板上（上述的是同一塊板），每個點代表什麼式樣要記好，然後放入爬板的容器里（容器中應在底部墊一層棉花，再倒入洗脫劑，洗脫劑的配製方法是石油醚：乙酸乙酯=7：1，倒入洗脫劑的量以剛好與底部的棉花平齊為好，薄板放入爬板容器時應直立，點樣的位置朝下，大約幾分鍾後當液體上升到薄板的3/4或2/3時，拿出薄板，在紫外燈下可看到每個點樣位置都有「東西」向上「爬」，如果反應液的位置的「東西」向上「爬」的和原料的一樣高，則說明反應液中原料是剩餘的，沒有完全反應，重復此抄作，直至反應液的位置的「東西」不與原料一樣高時，反應則終止。取樣的時間視具體實驗而定，一般為15分鍾至一個小時不等。 很不錯哦，你可以試下
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㈤ 柱色譜法和薄層色譜法實驗報告的最後問題與討論怎麼寫

在實驗中復遇到什麼問題，如制何解決的？以及對實驗的一些思考
比如做薄層色譜時會想 為什麼要預飽和？出現峰拖尾嚴重該如何處理？ 不同極性的樣品對應的展開劑選擇？
柱色譜法：柱子裝好的重要性？ 注意隨時補充洗脫劑，防止走干。

㈥ 薄層色譜實驗為什麼要在密閉容器中進行

在密來閉容器中進行為了自防止溶劑揮發，使溶劑的蒸汽壓在密閉容器中迅速達到平衡，防止溶液跑樣不均勻。

薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層，待點樣、展開後，根據比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比；

用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法，薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，也用於跟蹤反應進程。

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薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析、薄層分配層析、薄層離子交換層析、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。

在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。

㈦ 薄層色譜法工作原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。

物質分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子(離子或原子)和固體內部分子所受的吸引力不相等。在固體內部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。

(7)薄層色譜實驗裝置擴展閱讀：

一、薄層色譜的特點：

靈敏度及解析度高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預處理簡單、設備簡單。

由於這些特點，薄層色譜在實際工作中的應用十分廣泛。由於通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最為重要的，因此對它進行略詳的介紹。

薄層掃描儀的基本結構及主要功能基本是相同的，每台儀器都包括光源、分光器、檢測器、數據處理及信號輸出幾個部分。

二、優點

它保持了操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20分鍾；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍。

它既適用於只有0．01μg的樣品分離，又能分離大於500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點是對生物高分子的分離效果不甚理想。

㈧ 薄層色譜法實驗步驟

薄層色譜法的實驗步驟包括薄層板的制備、點樣、樣品的展開和斑點定位.

㈨ 薄層色譜法的主要顯色定位方法有哪些

1、在日光下觀察，劃出有色物質的斑點位置。

2、在紫外燈（254nm或365nm）下觀察有無專暗斑或熒光斑屬點並記錄其顏色、位置及強弱。能發熒光的物質或少數有紫外吸收的物質可用此法檢出。

3、熒光薄層板檢測，熒光薄層板是在硅膠中摻入了少量熒光物質製成的板。在254nm紫外燈下，整個薄層板呈黃綠色熒光，被測物質由於熒光猝滅作用而呈現暗斑。

4、既無色又無紫外吸收的物質，可採用顯色劑顯色。

(9)薄層色譜實驗裝置擴展閱讀

薄層色譜方法要求硅膠粉末的粒度分布窄、平均粒徑約15微米，薄層厚度為250微米左右，支持物一般為玻璃板，也可採用其他適用的物質。

將欲分析的樣品溶液以點狀或線狀加至薄層板上。然後將它插到 一個動相的液體(展開劑)中，使動相向上移動達到色譜分離的目的。

通常把流動相極性小而固定相極性大的體系稱為正相薄層色譜法；反之，則把流動相極性大而固定相極性小的體系稱為反相薄層色譜法。

與其它色譜方法相比具備如下優點：

①展開時間短，一般只需十至幾十分鍾。

②操作簡單，所用儀器設備也簡單，分離效果好。

③顯色劑多樣化，選擇性鑒定能力強。