柱色譜實驗裝置注意事項

㈠ 簡述吸附柱色譜中濕法裝柱的操作過程和注意事項

首先也是最關鍵的是勻漿，要根據你的填料比重找到合適的勻漿，如果是你買的填料的話一般都能要到勻漿方法。第二裝柱壓力，這個根據不同填料、不同內徑的柱子不同。
第三裝後的柱頭處理，很重要。
第四就裝的過程各個細節，如勻漿的氣泡處理、密封性等等
最後裝柱機的好壞、管道設計不同裝出來的柱子也不同

㈡ 吸附柱色譜思考題裝柱,加樣的操作中應注意什麼問題

硅膠一定要填結實；一定要用較多的溶劑走柱子，一定要到柱子的下端不再發燙，恢復到室溫後再撤去壓力。也有在硅膠的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。

如乙醚，二氯甲烷更為明顯。雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。

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吸附色譜在生物技術領域有比較廣泛的應用，主要體現在對生物小分子物質的分離。生物小分子物質相對分子質量小，結構和性質比較穩定，操作條件要求不太苛刻，其中生物鹼、萜類、苷類、色素等次生代謝小分子物質常採用吸附色譜或反相色譜進行分離。吸附色譜在天然葯物的分離制備中也佔有很大的比例 。

固體內部的分子所受的分子間作用力是對稱的，而固體表面的分子所受的力是不對稱的。向內的一面受內部分子的作用力較大，而向外的一面所受的作用力較小，因而當氣體分子或溶液中溶質分子在運動過程中碰到固體表面時就會被吸引而停留在固體表面上。

吸附劑與被吸附物分子之間的相互作用是由可逆的范德華力所引起的，故在一定的條件下，被吸附物可以離開吸附劑表面，這稱為解吸作用。吸附色譜就是通過連續的吸附和解吸附完成的。

㈢ 柱色譜中加混合樣品時應該注意哪些操作

柱色譜的使用注意事項很多，作為精密測試儀器，我們要盡可能多的考慮能夠引起各種誤差的操作。不僅僅是加註樣品時候哦。

2. 流動相：

• 在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生，當然一般情況下都是隨用隨配的，沒人懶到一下配好幾天用的。

• 流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。

• 流動相需脫氣後使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區別，應該使用過度分布的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

• 流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。

• 以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合於鹼性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束後立即用適合於色譜柱儲存並與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，並完全置換掉原來所使用的流動相。

• 流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。一旦造成這種情況，很難恢復。

• 色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。避免壓力突然上升或變化幅度過大，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。操作溫度不要超過60℃哦，

3. 樣品：

• 樣品應當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低。

• 樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。

• 樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

ps：題主認為以上啰嗦的太多麼？要知道這么精密的儀器，用起來的啰嗦事更多，否則也對不起那麼精準的數據不是？科學要嚴謹，操作多謹慎。

㈣ 薄層色譜和柱色譜實驗的原理，步驟和注意事項

(1)薄層色譜---自下而上,展開分離!
(2)柱色譜---自上而下,展開分離!
(3)選擇適當的展開劑!

㈤ 關於氣相色譜使用注意事項

為保證氣相色譜儀能夠正常運行，確保分析數據的准確性、及時性，需要對氣相色譜儀進行定期維護。

1、氣源檢查檢：查發生器或者氣體鋼瓶是否處於正常狀態；檢查脫水過濾器、活性炭以及脫氧過濾器，定期更換其中的填料。

2、管線泄漏：檢查定期檢查管線是否泄漏，可使用肥皂沫滴到介面處檢查。

3、氣化室的維護：氣化室包括：進樣室螺帽、隔墊吹掃出口、載氣入口、分流氣出口、進樣襯管。不同的部件有不同的維護方式：

1）進樣室螺帽、隔墊吹掃出口、載氣入口及分流氣出口4個部件需按廠家要求定期清洗：把這幾個部件從氣化室上拆卸下來，放在盛有丙酮溶液的燒杯中浸泡並超聲2小時，晾乾後使用；若有損壞應及時更換。

2）進樣襯管必須定期進行清洗，先用洗液清洗，然後用丙酮溶液浸泡，再用電吹風吹乾備用，及時添加石英棉。

4、若有損壞應及時更換。

5、檢測器的維護：檢測器的收集器、檢測器接收塔、火焰噴嘴、檢測器基部、色譜柱螺帽等處，須用丙酮溶液清洗，一般超聲2小時，至清洗干凈，清洗後用電吹風吹乾備用。

6、柱溫箱的維護：柱溫箱的外殼、容積區間，可用脫脂棉蘸乙醇擦洗。

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一、使用方法

氣相色譜儀的一般分析流程：載氣由高壓鋼瓶中流出，經減壓閥降到所需壓力後，通過凈化乾燥管使載氣凈化，再經穩壓閥和轉子流量計後，以穩定的壓力、恆定的速度流經氣化室與氣化的樣品混合，將樣品氣體代入色譜柱中進行分離。

分離後的各組分隨著載氣先後流入檢測器，然後載氣放空。檢測器將物質的濃度或質量的變化轉變為一定的電信號，經放大後在記錄儀上記錄下來，就得到色譜流出曲線。根據色譜流出曲線上得到的每個峰的保留時間，可以進行定性分析，根據峰面積或峰高的大小，可以進行定量分析

二、應用領域

氣相色譜法是以氣體為流動相的色譜分析方法，主要用於分離分析易揮發的物質。氣相色譜法已成為極為重要的分離分析方法之一，在醫葯衛生、石油化工、環境監測、生物化學等領域得到廣泛的應用。

通常採用的檢測器有：熱導檢測器，火焰離子化檢測器，氦離子化檢測器，超聲波檢測器，光離子化檢測器，電子捕獲檢測器，火焰光度檢測器，電化學檢測器，質譜檢測器等。

㈥ 柱色譜法在洗脫和分離過程中應注意什麼

沿色譜柱壁加樣或加洗脫液，防止吸附劑濺起；洗脫過程中不能讓液體流干。

㈦ 用濕法硅膠柱色譜裝柱分離大黃酚與大黃素甲醚的操作程序和注意事項有哪些如何檢查分離的效果

（1）色譜柱的材料
可用於製作色譜柱的材料很多，一般有不銹鋼、玻璃、銅、鋁、鎳、聚四氟乙烯或塑料等。選擇柱材料的依據是柱管內壁的表面特性，另外，也應考慮來源方便，製作容易，安裝使用簡便等。目前用於氣相色譜的柱材料主要是不銹鋼和玻璃。值得提出的是彈性石英和金屬鎳在製作柱上的優點已被人們所重視，可能成為未來製作色譜柱的主要材料。
①不銹鋼柱管：優點是質地堅固，能承受較高的溫度，製作使用方便，不易損壞，且有一般的惰性表面，使用范圍較寬。但對某些樣品如酸類，含鹵素的化合物及腐蝕性物質等則易發生反應。極性化合物、醫葯、生物樣品和水等不易在不銹鋼上分析。因這些化合物易被吸附或在高溫金屬表面催化分解。如在使用之前，用有機溶劑和稀硝酸等處理，可使特性得到一定的改善。
②聚四氟乙烯柱：這種柱最大的優點是製作方便，易加工成任何形狀。並有優良的耐腐蝕性。特別適合用來分析SO2，硫化氫，硫醇等以及腐蝕性、活性強的無機鹵化物如COS，HF，H2S，F2等。
（2）柱管的清洗
常用的不銹鋼柱在填充固定相前應進行清洗，除去內部的油污與銹垢。方法是用10%熱鹽酸或和5～10%熱鹼液抽洗，然後用蒸餾水沖洗至中性，烘乾備用。如果柱內壁比較干凈，可注入洗液或丙酮等溶劑清洗幾次，然後用蒸餾水沖洗干凈並烘乾備用。
（3）填充
通常採用真空泵的抽空填充法，即將空柱的一端塞上玻璃棉後接上真空源；另一端裝上漏斗，把乾燥的固定相慢慢喂入其中，並輕輕敲擊柱壁，直至裝滿，頭上稍留一點空間塞上玻璃棉抵住物。填充操作總的要求是：填料顆粒不破碎，但又填得均勻，松緊適度，不留任何間隙。還要注意柱頭抵柱物（玻璃棉的潔凈，用量宜越少越好）。

注意事項
（1）由於色譜柱屬於吸附性物質，所以長時間不用要通一段時間氣進行老化後再使用，否則容易造成基線不穩或噪音大、靈敏度低等現象。
（2）在做試驗時要防止污染。
（3）如果色譜柱受到污染，它表現出的明顯現象是峰分離變差，靈敏度變低並且峰形托尾，所以解決這種污染柱的根本方法是更換色譜柱。

色譜柱的分離效果
色譜柱的分離效果常用分離度、解析度等指標來評價。
（1）分離度（θ） 相鄰的兩個色譜峰中，小峰峰高（hi）和兩峰交點（m）的高度（hm）之差與小峰峰高（hi）之比值，稱為分離度。
θ值常用於描繪未全分離色譜峰的分離程度。在色譜分析中，一般要求θ值大於0.5。（2）解析度（R） 又稱分辨度，R等於相鄰兩組分色譜峰保留值之差與此兩峰峰底寬度總和之半的比值。如圖3-6 所示：
式中 tR2、tR1 — 分別為相鄰兩組分的保留值；
Wl、W2 — 分別為相鄰兩組分的峰底寬。
組分的保留值與峰底寬採用同一的計量單位時，如R＝1.0，兩組分色譜峰稍有重迭；如R＝1.5時，則兩組分色譜峰基本上可以全分離。
在應用上，可通過上述柱效能的幾項指標，估算色譜柱具有良好分離效能時所需的柱長度。

㈧ 有機柱色譜實驗中，色譜柱中若留有空氣或填裝不均勻，對分離效果有何影響如何避免

會影響滲透速率和顯色的均勻
避免
1，裝柱過程中應不斷敲打色譜柱。
2，過程中，柱內洗脫劑的液面高度始終不能低於吸附劑最上端。

㈨ 柱層析的注意事項有哪些

1 裝柱。 柱子下面的活塞一定不要塗潤滑劑，會被淋洗劑帶到產品中的，可以採用四氟節門的。 干法和濕法裝柱覺得沒什麼區別，只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應該要適度的緊 密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側斜著下來）。書中寫 的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就 全下來了。當然假如你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是 開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚至作廢！ 2 加樣。 用少量的溶劑溶樣品加樣，加完後將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時，再 加少量的低極性溶劑，然後俅蚩釗緔肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧恕? 加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了） ，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。 3 淋洗劑的選擇。 感覺上要使所需點在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開，過 柱子就用那種極性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不輕易在柱子上分開，因為柱子是一 個多次爬板的狀態，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。 4 樣品的收集。 用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比 較強的話，就不輕易流出。這樣就會發生，後面的點先出，而前面的點後出。這時可以 採用氧化鋁作固定相。 另外，收集的試管大小要以樣品量而定，非凡是小量樣品，假如用大試管，可能一根就 收到了三個樣品，wuwu。假如都用小試管那工作量又太大。 5 最後的處理。 柱分後的產品，由於使用了大量的溶劑，其中的雜質也會累積到產品中，所以假如想送 分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質是溶在溶劑里的，一洗基本就沒 了，必要時進行重結晶。 另外，再過柱的時候，有時會出現氣泡，一是 和使用的溶劑有關，假如是易揮發的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在 室溫稍高的情況下，很輕易出現這種現象，因此，在室溫高的時候， 可以選擇沸點較高，揮發相對小的溶劑。還有，使用混合溶劑時，使用 的兩種溶劑的沸點應該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而 乙醚卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的， 在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有 空氣！過柱子需要耐心，不要著急。

㈩ 柱色譜在洗脫和分離的過程中要注意些什麼

一般的色譜分離中，如果柱子流干或者進入空氣會使得樣品峰流動的時候不均勻，造成峰變寬，理論塔板數降低，分離效果變差。