電泳實驗裝置使用方法

A. 《微生物基礎技術》SDS-PAGE電泳技術詳細操作步驟和詳解

SDSPAGE電泳技術的詳細操作步驟和詳解如下：

一、詳細操作步驟

1. 檢漏：

   • 在組裝好電泳裝置後，需進行檢漏操作，確保裝置密封良好，無液體泄漏。

2. 制膠灌膠：

   • 根據所需分離的蛋白質分子量范圍，選擇合適的丙烯醯胺濃度制備凝膠。
   • 將凝膠溶液緩慢倒入玻璃板間，避免氣泡產生，並插入梳子等待凝膠凝固。

3. 處理樣品：

   • 將蛋白質樣品與上樣緩沖液混合，確保SDS與蛋白質充分結合。
   • 將混合後的樣品進行沸水浴處理，使蛋白質變性。

4. 配製緩沖液：

   • 配製電泳緩沖液，通常包含甘氨酸、Tris和SDS等成分。

5. 准確點樣：

   • 待凝膠凝固後，拔出梳子，用電泳緩沖液沖洗點樣孔。
   • 使用微量加樣器將處理好的蛋白質樣品准確點入點樣孔中。

6. 電泳：

   • 連接電泳裝置，設定合適的電壓和時間進行電泳。
   • 注意觀察電泳進度，避免電泳時間過長導致蛋白質擴散。

7. 割膠染色：

   • 電泳結束後，將凝膠從玻璃板中取出，進行割膠操作。
   • 使用考馬斯亮藍等染料對凝膠進行染色，使蛋白質條帶顯色。

8. 脫色和照膠分析：

   • 將染色後的凝膠進行脫色處理，去除多餘的染料。
   • 使用凝膠成像系統對凝膠進行拍照和分析，根據蛋白質條帶的位置和顏色深淺判斷蛋白質的分子量和純度。

二、詳解

• SDS的作用：SDS通過去垢和電荷掩蔽作用，消除蛋白質間的電荷差異，使蛋白質在電場中以相同的電荷/質量比移動，從而實現高效分離。
• 凝膠的選擇：丙烯醯胺凝膠的濃度對蛋白質的分離效果有重要影響。濃度較高的凝膠適用於分離分子量較小的蛋白質，而濃度較低的凝膠則適用於分離分子量較大的蛋白質。
• 電泳條件：電泳的電壓和時間需根據具體實驗需求進行調整。過高的電壓可能導致蛋白質條帶擴散，而過長的時間則可能導致蛋白質降解。
• 安全操作：在實驗過程中需佩戴防護設備，如手套、口罩和護目鏡等，以防止化學物質的傷害。同時，注意實驗廢棄物的妥善處理。

掌握SDSPAGE電泳技術對於蛋白質分子量測定、純度評估和多肽亞基分析等科研任務具有重要意義。因此，理解並熟練操作這項技術是十分必要的。

B. 在制備氫氧化鐵膠體時，通常可能含有氯化鐵，應如何除去

【准備】在200mL煮沸的蒸餾水裡滴入約12mL1.2％的氯化鐵溶液，冷卻到室溫。用玻璃紙作半透膜，用3000mL 蒸餾水滲析72小時，除去氯離子。最後加入8g尿素，以增大膠體的密度。

【操作】

（1）將製得的氫氧化鐵膠體注入洗凈的U形管（15×100mm）中，從管底到液面的高度約5cm。用長滴管吸取0.1％的硝酸鉀溶液，分別沿U形管兩口的管壁交替地緩慢滴入，不能攪動膠體，直到兩端硝酸鉀液面離膠體液面都是15mm左右為止 ，要求上下兩層之間有明顯的界限。（2）將石墨電極（可從1號干電池中得到）插入硝酸鉀溶液中，使電極離膠體液面約6mm，整個電泳實驗裝置見左圖。

（3）選用較高直流電壓（150～180V），接通電源，半分鍾後就能看到陰極區硝酸鉀下面的膠體顏色加深，陽極區膠體液面有明顯下降，2分鍾可降2Omm，3分鍾可降30mm左右。

【說明】

（1）氫氧化鐵膠體的電泳速度跟氫氧化鐵膠粒的帶電量有關，膠粒帶電量越大，電泳速度越大。滲析可以減少膠粒中的氯離子，增大膠粒的帶電量。

（2）氫氧化鐵膠體在U形管中的高度跟氫氧化鐵膠體的電泳速度呈反比，即膠體在U形管的高度越高，膠體的電泳速度越小。所以，膠體在U形管中的高度以50mm左右為宜，不能太高。