① 幾種常用的缺氧動物模型的復制及中樞神經系統功能抑制和低溫對缺氧的影響的實驗報告
幾種常見的缺氧動物模型及中樞神經系統功能和低溫對缺氧的影響
目的 缺氧是多種疾病共有的病理過程。許多原因都能使機體發生缺氧。不同類型的缺氧，其機體的代償適應性反應和症狀表現有所不同。本實驗學習復制乏氧性缺氧和血液性缺氧的動物模型方法，觀察缺氧過程中呼吸的反應及血液色澤和全身一般情況的變化，並了解溫度和中樞神經系統機能狀態對缺氧耐受的影響以及對照實驗和控制實驗條件重要性；初步掌握計量資料的常用統計指標的應用。
材料 小白鼠；100、500ml廣口瓶和測耗氧裝置；1、2、10ml注射器；50g/L(5g/dl)亞硝酸鈉溶液、10g/L(1g/dl)美蘭溶液、2.5g/L(0.25g/dl)氯丙嗪溶液(新鮮配製)、生理鹽水；CO氣體（甲酸加濃硫酸製取）；冰浴、鈉石灰、彈簧夾、剪刀、鑷子。
方法和步驟
(一)中樞神經系統功能狀態和溫度對動物耐受缺氧的影響
用氯丙嗪和冰浴處理使動物中樞神經系統功能處於抑制，代謝率降低，為實驗組；以生理鹽水，室溫下處理為對照組。按以下操作步驟進行：
1.取性別相同，體重相近的小白鼠2隻，並准確稱取體重。按隨機分配的原則，將其中1隻鼠作為實驗組，另一隻作為對照組。向實驗組鼠按0.1ml/10g體重，腹腔內注射2.5g/L(0.25g/dl)氯丙嗪，(參見常用注射方法腹腔注射法節)安放在冰浴的沙布上10~15分鍾，使呼吸頻率降為70~80次/分；向對照組鼠腹腔注射生理鹽水(0.1ml/10g體重)，放置室溫10~15分鍾。
2.將2隻鼠分別放入100ml的廣口瓶內，按圖10-11-1和附錄連接測耗氧裝置。
3.待鼠死亡後，記錄存活時間，按附錄用測耗氧裝置測定總耗氧量。根據總耗氧量A（ml），存活時間T(min)，鼠體量W(g)三項指標，求出總耗氧率R(ml/g/min)。
公式：R(ml/g/min)=A(ml)÷W(g)÷T(min)
4.數據統計處理。在老師指導下，收集各組各項指標的原始數據，列表並進行統計處理：求出各項指標的均數(`x)及標准差(S)，並對實驗組和對照組的存活時間(T)和總耗氧率(R)的均數差異作顯著性測驗(t測驗)（參見統計分析簡介）。
(二)不同原因造成不同的缺氧類型
1.密閉瓶中呼吸
（1）取小鼠一隻，數正常呼吸頻率(次/10秒)，並注意深度。觀察活動一般情況及耳、尾、口唇的顏色。
圖10-11-1 缺氧瓶和測耗氧裝置
（2）將鼠放入含鈉石灰(約5g)的100ml廣口瓶內，待安靜後塞緊瓶塞，開始記錄時間，以每隔5分鍾間隔數呼吸頻率(次/10秒)一次，並觀察行為（如掙扎、痙攣等）和耳、尾、口唇的顏色變化，直至動物死亡，屍體留待打開腹腔觀察。
2.吸入CO
（1）取小鼠一隻，數正常呼吸頻率(次/10秒)，並注意深度。觀察活動一般情況及耳、尾、口唇的顏色。
（2）將鼠放入500ml廣口瓶內，塞緊瓶塞，用10ml針筒抽取CO氣體10ml，注入剛密閉的廣口瓶內，形成2%CO之空間環境，開始記錄時間，觀察方法與指標同1之（2）項。
3.輸入亞硝酸鹽
（1）取體重相近的鼠2隻，數呼吸頻率和觀察皮膚粘膜色澤。向腹腔內各注射50g/L(5g/dl)亞硝酸鈉0.2ml後，立即向其中一隻腹腔內再注射10g/L(1g/dl)美蘭溶液0.2ml，另一隻注射生理鹽水0.2ml。
（2）觀察方法與指標同1之(2)項，並觀察兩鼠表現及死亡時間有無差異。
將以上4隻死鼠的腹腔打開，取下小塊肝組織置濾紙片上一起進行血液或肝臟顏色比較。
注意點
1.缺氧瓶和測耗氧量裝置必須完全密閉不漏氣。
2.小鼠腹腔注射部位應稍靠左下腹，勿損及肝臟。還應避免將葯液注入腸腔或膀胱。
3.實驗組鼠應在氯丙嗪注射後稍平靜時放在冰浴的紗布上，放留時間的長短，以呼吸頻率降為70－80次/分為宜。隨時觀察鼠，以防溺水死亡。
結果 記錄各項實驗結果的數據，原始數據列表，進行統計處理，主觀指標用文字記錄。分析和探討各處理因素的作用及機制。
思考題
1.密閉瓶內鼠，一氧化碳中毒鼠及亞硝酸鈉中毒鼠各屬何種類型缺氧？其發生機制有何不同？
2.不同類型缺氧對呼吸和血液顏色的改變是否相同？為什麼？
3.低溫和抑制中樞神經系統功能為何能增強對缺氧的耐受？
4.為什麼要在缺氧瓶內放入鈉石灰？這對缺氧機制的分析有何意義？
5.為什麼不能只憑實驗組和對照組的T、R均數差異來得出缺氧耐受改變的結論？應作何統計處理？
附錄 測定小白鼠總耗氧量的測耗氧裝置
原理 小白鼠在密閉的缺氧瓶中，不斷消耗氧氣，而產生的CO2 又被鈉石灰吸收，瓶內氧分壓逐漸降低而產生負壓，當缺氧瓶與測耗氧裝置相連時，裝置的移液管內液面因瓶內負壓而上升，量筒內液面下降的毫升數即為消耗氧的總量。
方法與步驟
1.向量筒內充水至刻度，然後將玻璃管接頭與缺氧瓶塞上的一個橡皮管相連。
2.待鼠死後從量筒上讀出液面下降的毫升數，即為小白鼠的總耗氧量(A)。
② 小白鼠缺氧實驗報告
乏氧性缺氧
又稱低張性缺氧，是指以動脈血氧分壓降低為基本特徵的缺氧。低張性缺氧時，動脈血和靜脈血中氧合血紅蛋白含量降低，而脫氧血紅蛋白增多，而當毛細血管血液中脫氧血紅蛋白的平均濃度超過5g/dl時，皮膚和黏膜呈青紫色，即發紺。本組小鼠存活時間為90min，而各組記錄數據均有差別，與小鼠個體差異、缺氧瓶的密閉性、鈉石灰等有關。較小的小白鼠因個體發育不完全而大腦對呼吸中樞更不敏感，故其缺氧能力常大於較大的小白鼠，即存活時間更長;缺氧瓶的密閉性越好，進入其中的氧就越少，小白鼠存活時間就越短，反之亦然。鈉石灰用於吸於甁中CO2以排除CO2的干擾，影響呼吸作用的因素有CO2濃度、H+、低氧，高濃度CO2（PCO2>80mmHg）可抑制呼吸,而低濃度CO2（PCO2<80mmHg）可促進呼吸。由於鈉石灰不能有效地吸收CO2而使甁中存有低濃度CO2，即可促進呼吸，故本班各組乏氧性缺氧的小白鼠的存活時間均比前幾個班各組的更長。低張性缺氧時小白鼠先發生代償性反應，PaO2於60—100mmHg時，肺通氣量無變化。PaO2低於60mmHg可刺激勁動脈體和主動脈體的外周化學感受器，沖動經竇神經和迷走神經傳入延髓，反射性地引起呼吸加深加快。肺通氣量增加是急性低張性缺氧的最重要代償反應。隨著缺氧的時間增加，小白鼠即出現呼吸逐漸減弱直至停止死亡。
3.2
CO中毒性缺氧
屬血液性缺氧（等張性缺氧），即由於血紅蛋白數量減少或性質改變，以致血液攜帶氧的能力降低或血紅蛋白結合的氧不易釋出所引起的缺氧。CO是含碳物質未完全燃燒而產生的一種窒息性氣體，可與血紅蛋白結合成為碳氧血紅蛋白而使血紅蛋白失去攜帶氧的能力，抑制紅細胞的糖酵解，增加與氧的親和力，致使小白鼠皮膚黏膜呈現櫻桃紅色。CO中毒性缺氧屬等張性缺氧，呼吸系統的代償不明顯，故觀察到小白鼠的呼吸逐漸減弱直至停止死亡。CO為有毒性氣體，在實驗過程中注意通風，須注意濃硫酸與HCOOH小心吸取以防傷及自己及其它物品，加熱時不能過猛，以免CO產生過多、過快，使小白鼠迅速死亡，來不及觀察。本組小白鼠沒有搶救及時以致小白鼠最後死亡。
3.3
亞硝酸鈉中毒性缺氧
也屬血液性缺氧（等張性缺氧）。亞硝酸鹽可使大量血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，而高鐵血紅蛋白呈棕褐色，故甲鼠的皮膚黏膜呈咖啡色;乙鼠注入美蘭，美蘭是一種還原劑，可將Fe3+還原為Fe2+，具有解毒作用，可使亞硝酸鈉中毒的小白鼠解救且皮膚黏膜顏色逐漸接近正常，而本組乙鼠30min後死亡，可能因為給葯不及時搶救速度過慢，且注入的美蘭流出小鼠體外而不能起到解毒作用導致小鼠死亡。亞硝酸鈉中毒性缺氧屬等張性缺氧，但本組可能合並了PaO2降低而觀察到小白鼠呼吸系統的代償性反應，即先出現呼吸加深加快。本實驗過程中腹腔內注射應稍靠左下腹，勿傷及肝臟，也應避免將葯液注入腸腔或膀胱。一氧化碳、亞硝酸鈉中毒事故每年都有發生，奪去了多少人的生命。加強預防和改進臨床治療辦法是造福於社會的大事，應當高度重視。通過本次實驗我們了解了上述幾種常見缺氧疾病的基本致病機理和應對辦法，這對於我們今後從事這方面疾病的研究和治療有著重要的意義。
③ 小鼠實驗性缺氧實驗的分析怎麼寫
如下：
小鼠跳台實驗：跳台實驗屬一次性刺激迴避反應實驗.跳台法的實驗裝置一般為一長方形反射箱,其長徑被黑色塑料板隔為若干區間,底部鋪以間距為5mm的銅柵,可通適當的電流.每個小的區間有一個高和直徑均為4.5cm的小平台.實驗時,首先將小鼠放在銅柵上,當銅柵通電時,跳在銅柵上的小鼠受到電擊,其正常反應是躲避電擊跳上平台,大多鼠有可能再次或多次跳下平台受到電擊,受到電擊時又會迅速跳回平台.如此訓練5min,並記錄每隻鼠受到電擊的次數（錯誤次數）,以此為學習成績.24h後重新測驗,此次測驗時,首先將鼠放在跳台上,記錄第一次跳下的時間（潛伏期）、受電擊的動物數和3min內的錯誤次數,以此反映記憶保持情況.
該方法的優點為：操作簡便易行,一次可同時觀察多隻動物,能較客觀地反映動物經過一次刺激後記憶獲得的情況,尤其適用於葯物篩選實驗.因為不同的葯物引起記憶障礙的機制不同,因而通過觀察益智葯物對這些模型的葯效可分析益智葯物的作用機制.缺點：動物的躲避性反應的個體差異較大.
④ 甲醛中毒小鼠呼吸頻率
病理生理學實驗;【實驗目的】; 1．實驗動物及器材 小鼠、缺氧瓶(250 ml帶塞錐形瓶或廣口瓶)、一氧化碳發生裝置一套、膠頭滴管，1ml注射器、酒精燈、手術剪、眼科鑷 2．試劑和葯品 甲酸、濃硫酸、1％亞硝酸鈉溶液、40%甲醛; 1．動物一般狀態、活動情況等 2．呼吸頻率(次/10s)、深度。 3．皮膚(口唇)和血液、肝顏色 4．存活時間。;小鼠的捉持;腹腔注射 ;【實驗步驟】;乏氧性缺氧
（1）取小鼠一隻放入缺氧瓶內。觀察動物的一般情況、呼吸、皮膚（口唇）顏色???然後塞緊瓶塞，記錄時間。以後每3min重復觀察上述指標一次（如有其它變化則隨時記錄）
（2）待動物死亡後，打開胸腹腔，觀察其肝臟顏色並與其他類型的缺氧小鼠比較。;血液性缺氧
一氧化碳中毒性缺氧; 亞硝酸鹽中毒性缺氧
（1）取小鼠1隻，觀察動物的一般情況、呼吸、皮膚與口唇顏色
（2）由腹腔注入2％亞硝酸鈉溶液0.8ml, 觀察上述指標。觀察其顏色。待動物死亡後，打開胸腹腔，觀察其肝臟顏色，並與其他類型的缺氧小鼠比較。; 甲醛中毒性缺氧
（1）取小鼠1隻，觀察動物的一般情況、呼吸、皮膚與口唇顏色。
（2）由腹腔注入40％甲醛溶液0.5ml,後開始計時，並觀察上述指標 。待動物死亡後，打開胸腹腔，觀察其內臟顏色，並與其他類型的缺氧小鼠比較。;正常對照組;【實驗結果】;【注意事項】;實驗報告要求