『壹』 細胞培養需要的實驗耗材有哪些
1、培養瓶：如果你們是悶帶實驗室小規模一般灶罩閉選50ML 100ML 250ML。
2、玻璃吸管：長25-30CM 玻璃器皿總是摔斷 所以稍稍長一點比較好。
3、玻璃瓶：培養基可以隱裂買 胰酶的配置需要的成本很低 所以准備兩三個150ML的瓶 子自己配就行了。配置胰酶需要購買一種過濾器 。
4、EP管： 4ML的塑料管 凍存管 這些塑料的管子是必須的。
5、移液槍：（各種型號都要一把吧） 這個不算是耗材 但是槍頭是耗材。
6、細胞培養板（我們自己常用的有96空、24孔、6孔，當然還有其他的規格，可以根據需要選擇）。
7、培養基：如果自己配置的話要買一些藍蓋的瓶子，一般規格會有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要買一些裝血清的血清瓶，10ml的玻璃試管也要買一些
脫脂棉、紗布、酒精燈、鑷子，一次性橡膠手套、口罩、帽子、鞋套也需要准備
稍稍說下實驗的硬體：培養箱（記得買二氧化碳鋼瓶） 倒置顯微鏡 低速離心機 冰箱 液氮罐
有這些東西 基本就可以進行實驗了 根據實驗的需要再考慮買其他物品
『貳』 有哪位高手能詳細指導一下用transwell板做細胞趨化實驗的具體方法和步驟嗎
1
材料與方法
1.
1
Matrigel：Becton
Dickinson
Compary,
-
20
℃保存；
Tanswell
plate：Costar
,USA
,
#
3422
,聚碳酯膜微孔直徑為8μm；
蘇木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。
1.
2
趨化因子的制備
取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無血清培養基輕柔漂洗兩次;
加入無血清培養基,37℃,5
%CO2
培養24
h～48h，收集細胞培養上清；4
℃,12
000rpm
離心,10
min
,取上清；0.22
μm
濾膜過濾除菌；分裝,在-
20
℃保存。
1.
3
transwell
培養板准備
所有操作均需無菌操作。-20℃保存的Matrigel
在冰上保2℃～8℃過夜融化。在冰上用預冷的槍頭吸取100μl
Matrigel
加入冰預冷的300μl
無血清培養基中,充分混均。取上述稀釋的Matrigel
25
μl
加入transwell
板上室,覆蓋整個聚碳酯膜,37
℃,30
min
,使Matrigel
聚合成膠。已鋪好Matrigel的transwell
培養板置於37℃可保存2
周。
1.
4
Matrigel
侵襲實驗(Matrigel
Invasion
Assay)刺激後的各組細胞用PBS
漂洗3
次。以常規方法用無血清培養基制備單細胞懸液,5
×105個細胞/
ml
,每組細胞各分為兩部分。胎盤蘭拒染實驗,細胞活力需大於95
%。Transwell
培養板上室加入100μl
細胞懸液(
5
×104
個)
並加入無血清培養基200
ul
。Transwell
培養板下室加入500μl
趨化因子,37℃,5
%CO2
培養24
h。用濕棉簽輕輕擦去Matrigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞。小心取出上室,用線拴住,並做好標記,用冰預冷的甲醇固定30
min。蘇木素染色1
min。梯度乙醇脫水(80
%
,95
%
,100
%)
,二甲苯透明。小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片。附著於聚碳酯膜下表面的細胞在高倍鏡下(
×400)
隨機取6
個視野[1
]
計數,取平均數。重復實驗兩次。
注意
2.
1
NIH3T3
細胞制備的趨化因子與胎牛血清
趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2
]
。目前利用NIH3T3
細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810
膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發現用胎牛血清和用NIH3T3
細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的,兩組遷移的細胞數很接近。在實驗時間上，用NIH3
T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為1
周,而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為2
d
,實驗時間節省了很多。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3
細胞制備的趨化因子。
2.
2
細胞的准備
所需細胞應處在對數生長期,細胞活力需大於95
%。如果細胞活力小,就會造成細胞穿透能力下降,影響實驗結果。
2.
3
擦去Matrigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞
先用干棉簽將上室內液體吸去,再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat
rigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞,如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞,在細胞計數時就會將沒擦掉的細胞也計進來。尤其是細胞為圓形的時候,就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞,對於長梭形細胞來說,穿過去的細胞為長梭形,沒穿過去的細胞多為圓形。
2.
4
蘇木素染色
上室浸泡在新蘇木素中的時間為1
min
,用過多次的蘇木素為2
min。在研究粉防己鹼對HUVEC
人類臍靜脈內皮細胞遷移能力的抑製作用沒有將多餘蘇木素洗去,直接脫水、透明,造成細胞圖片背景模糊,細胞不清楚(見圖1)
。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810
膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗時我們將其置於盛有自來水的燒杯中,反復漂洗幾次,將多餘蘇木素洗去再行脫水、透明;這樣做出的細胞圖片背景干凈,細胞清楚(見圖2)
。
『叄』 分析下面實驗裝置並回答問題：（1）該實驗裝置的實驗目的是______．（2）裝置細玻璃管的目的是______．（
（1）根據題干可知：甲乙兩裝置唯一不同的變數培養液中是否含有磷元素，因此該實驗裝置的實驗目的是：探究磷元素對植物生長的影響．
（2）水稻幼苗的根部細胞正常進行呼吸作用需要吸收空氣中的氧氣．因此裝置細玻璃管的目的是向培養液內通入空氣，以保證水稻幼苗的根部細胞能正常進行呼吸作用，即保持瓶內外氣壓平衡．
（3）實驗必須在光下進行，以保證番茄幼苗能正常進行光合作用，番茄幼苗才能正常生長；此外，還需要每天向培養液內泵入空氣，以保證番茄幼苗的根部細胞能正常進行呼吸作用．
（4）對照實驗中對實驗變數進行處理的，就是實驗組，沒有處理是的就是對照組．因此實驗裝置中，起對照作用的是甲．
故答案為：
（1）探究磷元素對植物生長的影響
（2）保持瓶內外氣壓平衡
（3）甲