1. 紙色譜法鑒定氨基酸怎麼操作謝謝!
紙色譜法是屬於分配色譜的一種,通常用特製的濾紙如新華一號濾紙作為固定相(水的支持劑),含有一定比例的水的有機溶劑(展開相)作流動相,應用於多官能團或高極性化合物如糖或氨基酸的分離、鑒定。
Rf比移值是一個特定常數。Rf值隨被分離化合物的結構、固定相與流動相的性質、溫度等因素不同而異。當溫度、濾紙等實驗條件固定時,它是一個常數。這也就是用紙色譜進行定性分析的依據。
用標准氨基酸作出紙色譜和Rf值,與在相同條件下作出的混合物的紙色譜和Rf相對照,以達到分離、鑒定氨基酸的目的。當然,在實際應用中,紙上層析的操作要復雜得多。尤其是Rf值相接近的氨基酸需要用兩向紙上層析才能達到分離鑒定的目的。
氨基酸經紙上層析後,常用茚三酮顯色劑顯色。必須注意!指印含有一定量的氨基酸,在實驗方法中足以檢出(可以檢出以微克計的痕跡量)。
2. 紙色譜法適於分離哪些種類的混合物
紙色譜法用於分離固體混合物。
紙色譜法(filter paper chromatography)指的是把一種溶劑固定在固體的支持物(固定相) 上,由於濾紙纖維對水有較強的親和力,一般能吸附其自身質量22%的水,其中,6%的水以氫鍵與纖維素牢固結合,這些水即稱為固定相。被水飽和的有機相(如正丁醇乙醚水系統) 為流動相。當流動相從含有氨基酸樣品的濾紙上流過時,氨基酸就在固定相與流動相之間連續進行分配。
如果分離液體混合物,則可以用分液漏斗。
分液漏斗,是一種玻璃實驗儀器,包括斗體,蓋在斗體上口的斗蓋。斗體的下口安裝一三通結構的活塞,活塞的兩通分別與兩下管連接。可使實驗操作過程利於控制,減少勞動強度,當需要分離的液體量大時,只需搬動活塞的三通便可將斗體內的兩種液體同時流至下管,無需更換容器便可一次完成。在初中階段分液漏斗的主要作用則是控制化學反應的速率。本裝置是科學研究、化學實驗中一種功能較好的實驗器皿。
3. 紙層析法分離氨基酸實驗中展層時間的長短對結果有什麼影響
氨基酸離鑒定——紙層析 ,實驗目 掌握氨基酸紙層析原理,析待 測品氨基酸. 二,實驗原理 紙層析濾紙惰性支持物配層析.濾紙纖維羥基具親水性,吸附層水作固定相,機溶劑流相.機相流經固定相,物質兩相間斷配離. 溶質濾紙移速度用Rf值表示: Rf=原點層析斑點距離/原點溶劑前沿距離 定條件某種物質Rf值數.Rf值與物質結構,性質,溶劑系統,層析濾紙質量層析溫度等素關.本實驗利用紙層析離氨基酸. 三,實驗器材 (1)燒杯(5000mL):1/組 (2)微量注射器(100 L):1/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養皿:1/組. (5)層析濾紙(22cm,寬14cm新華號濾紙):1張/組. (6)直尺,鉛筆:自備. (7)電吹風:1/組. (8)托盤,針,白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑料薄膜:公用. (11)燒杯:50mL,1/組. 四,實驗試劑 (1)擴展劑:4體積丁醇1體積冰醋酸放入液漏斗,與5體積水混合,充振盪,靜置層,棄層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 實驗試劑 五,實驗操作 檢查培養皿否乾燥,潔凈;若否,其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾. (1)平衡:剪塊塑料薄膜鋪桌面,層析缸或燒杯置於塑料薄膜,再盛約20mL展層溶液燒杯置於倒置層析缸或燒杯,用塑料薄膜密封起,平衡20min. (2)規劃:帶手套,取寬約14cm,高約22cm層析濾紙張.紙端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃條平行於底邊直線A,直線做4記號,記號間間隔2cm,原點位置.另距左邊緣1cm處畫條平行於左邊緣直線B,B線A,B兩線交點原點標明刻度(厘米單位),參見左圖. (3)點:用微量注射器別取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,免交叉污染),點四位置.擠滴點,同位置需點2~3,2~3mL/,每點完點,立刻用電吹風熱風吹乾再點,保證每點紙擴散直徑超3mm.每須點4,其3已知,1待測品. (4)層析:用針,線濾紙縫筒狀,紙兩側 邊緣能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿加入擴展劑,使其液面高度達1cm左右,點濾紙筒直立於培養皿(點端,擴展劑液面A線約1cm),罩燒杯,仍用塑料薄膜密封.擴展劑升A線始計,每隔定間測定擴展劑升高度,填入表3-1.升15~18cm,取濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾. (5)顯色:用噴霧器通風廚向濾紙均勻噴0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用熱風吹乾,即顯各層析斑點,參見左圖. (6)計算各種氨基酸Rf值,並判斷混合品都哪些氨基酸,各自實驗結貼實驗報告,見表3-2. (7)層析間橫坐標,擴展劑升高度縱坐標畫圖,求擴展劑升18cm所需要間. (8)微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用展層液平衡液,培養皿洗凈,整理桌面儀器試劑