㈠ 關於紫外分光光度計的原理的實驗報告
UV765紫外可見分光光度計操作規程一、開機開機前將樣品室內的乾燥劑取出，確認電源是否連接。打開儀器電源開關，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室。二、使用自檢結束後（7個項目均出現OK字樣），儀器進入主菜單，屏幕顯示如下七個功能項：1.光度測量；2.光譜測量；3.定量測量；4.動力學測量；5.數據處理；6.多波長測定；7.系統狀態設定。儀器經30min熱穩定後，就可以進入正常測量。1.光度測量 測定一定波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)在主菜單中選中[光度測量]項後，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 按[GOTO WL]鍵進入波長設置用數字鍵輸入你所需的波長值→ 按[ENTER]鍵確認→ 屏幕提示：請稍等……，儀器自動將波長移動到你所需測定的波長值→ 按[F1]鍵，選擇測定透光率（T％）或吸光度值(A) → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[AUTO ZERO]鍵，儀器自動對空白溶液調零。屏幕提示：請稍等…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[F4]鍵測量T％或A值 測量完成後1）列印輸出數據，按[START/STOP]鍵2）返回主菜單，按[MODE]鍵2. 光譜測量 波長掃描或光譜掃描，可直接測定一段波長范圍內的光譜圖和峰值谷值數據在主菜單中選中[光譜測量]項後，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 根據需要設定測量模式、掃描范圍、記錄范圍、掃描速度、采樣間隔、掃描次數、顯示模式各參數。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達設定行，進行參數的修改，並按[ENTER]鍵確認 → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[F1]鍵進行基線校正。屏幕提示：基線校正…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[START/STOP]鍵開始光譜掃描 → 屏幕顯示掃描圖譜掃描結束後1） 列印結果譜圖，按[F4]鍵2） 直接讀取峰谷值，按[F2]鍵，屏幕顯示「請輸入峰/谷檢測靈敏度」（默認值為3），按[ENTER]鍵確認3） 存儲圖譜，獲取整個波長范圍內的數據，按[F3]鍵，用[→]、[←]方向鍵選擇10個數字和26個字母組成文件名，按[ENTER]鍵確認，按[F4]存儲，按1－8數字鍵確定文件序列號4） 修改譜圖坐標范圍，按[F1]鍵。修改完畢後，按[START/STOP]鍵確認後，譜圖將按新設定坐標被刷新5） 返回上一級菜單，按[MODE]鍵3. 定量測定 建立濃度曲線，直接測定樣品的濃度主菜單中選中[定量測定]項後，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 根據需要設定測量波長、測量單位、測量方法各參數。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達設定行，進行參數的修改，並按[ENTER]鍵確認 3.1 K系數法 已知斜率k和截距b，測出樣品的吸光度值後待入公式就可算出濃度值在測量方法中選擇K系數法，並按[ENTER]鍵確認 → 按[F2]鍵，將k值和b值輸入，按[ENTER]鍵確認 → 打開樣品室蓋，在當前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調零 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進入數據測量界面→ 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處於光路中 → 按[START/STOP]鍵測量 3.2單點標定法 測量一個標准樣品的吸光度與坐標零點建立工作曲線，測定未知樣品濃度在測量方法中選擇單點標定法，並按[ENTER]鍵確認 → 按[F2]鍵修改單點 → 按數字鍵輸入標准樣品的濃度值 → 按[ENTER]鍵 → 打開樣品室蓋，在當前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調零 → 將空白樣品換成標准樣品→ 按[START/STOP]鍵測量標樣的吸光度並顯示 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進入樣品測量界面 → 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處於光路中 → 按[START/STOP]鍵測量 3.3多點標定法 測量已知濃度的一系列標准樣品吸光度，建立工作曲線來測定未知濃度在測量方法中選擇多點標定法，並按[ENTER]鍵確認 → 打開樣品室蓋，在當前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調零 → 按[F2]鍵重新標定 → 按數字鍵輸入標准樣品數 → 按[ENTER]鍵確認 → 將標准樣品依次放入比色皿架R、S1、S2位……關上樣品室蓋 → 按[F3]移動比色皿架R位到光路 → 按[ENTER]鍵確認 → 按數字鍵輸入標樣濃度值，按[ENTER]鍵確認 → 按[START/STOP]鍵測量標樣的吸光度→ 按[ENTER]鍵確認 → 按[F2]鍵移樣品位S1到光路，同樣的方法測量所有標樣的吸光度 → 按[F1]鍵生成方程曲線，顯示該曲線的斜率k、截距b、相關系數R → 按[MODE]鍵返回定量測量菜單 → 按[START/STOP]鍵進入數據測量菜單 → 放入樣品 →按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處於光路中 → 按[START/STOP]鍵測量 6.多波長測定 同時測定幾個波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)主菜單中選中[多波長測定]項後，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 按[F3]鍵設定測量波長數目和樣品池個數，按[ENTER]鍵確定 → 按數字鍵輸入相應波長值 → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R、S1、S2位……，關上樣品室蓋 → 按[START/STOP]鍵開始測量 測量完成後1）列印輸出數據，按[F4]鍵2）返回主菜單，按[MODE]鍵三、關機將比色皿中的溶液倒盡，然後用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾乾。關電源將乾燥劑放入樣品室內，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認可方可離開。 注意事項：1.開機前將樣品室內的乾燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。2.比色皿內溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應保持比色皿清潔，池壁上液滴應用擦鏡紙擦乾，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。3.測定時，禁止將試劑或液體物質放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因將樣品槽弄臟，要盡可能及時清理干凈。4.實驗結束後將比色皿中的溶液倒盡，然後用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾乾。關電源將乾燥劑放入樣品室內，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認可方可離開。問題處理：1、如果儀器不能初始化，關機重啟；如不成功，請向管理老師反映。2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設置是否正確（重新調整波長，並重新調零）、測量時是否調零（如被誤操作，重新調零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時，要用石英比色皿）、樣品准備是否有誤（如有誤，重新准備樣品）。㈡ 用紫外可見分光光度法測定苯甲酸
目的與要求1、掌握吸收曲線的測定與繪制方法 2、掌握直接比較法定量的方法 3、熟悉紫外分光光度計的使用方法 原理樣品中的苯甲酸在酸性條件下可用水蒸氣蒸餾法提取，在鹼性條件下形成苯甲酸鹽。苯甲酸及其鹽對紫外光有選擇性吸收，其吸收光譜的最大吸收波長在225nm左右。 用紫外可見分光光度計可測定物質在紫外光區、可見光區的吸收光譜，並可定量測定。 儀器與試劑1、儀器 751型分光光度計；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二隻；刻度吸管5ml、10ml各一隻；滴管一隻。 2、試劑 苯甲酸標准儲備液（1ml相當於0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氫氧化鈉溶液。 操作步驟操作步驟1、苯甲酸吸收曲線的繪制 取苯甲酸儲備液4.00ml，置於50ml容量瓶中，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液定容，搖勻。此液1ml相當於8μg苯甲酸。 測定條件：氫燈，1cm石英比色皿，0.01mol/L氫氧化鈉為參比測定波長：從210nm-240nm每隔一定波長（2nm-5nm）測定一次吸光度，在225nm左右隔1nm測定一次吸光度。繪制苯甲酸的紫外吸收曲線，得最大吸收波長為測定波長。2、直接比較法測定樣品溶液中苯甲酸的含量取10.00ml樣品溶液，置於50ml容量瓶中，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液定容，搖勻後備用。 以0.01mol/L氫氧化鈉溶液為參比溶液，在完全相同的條件下測定苯甲酸標准溶液和稀釋好的樣品溶液的吸光度值。3、結果處理 按下式計算樣品溶液中苯甲酸的濃度： Cx (μg/ml) = 8×50×Ax /(10As) Cx:待測樣品液的濃度；Ax是待測樣品溶液的吸收值；As是苯甲酸標准液的吸收值。