蟾蜍腓腸肌實驗裝置

A. 關於蟾蜍實驗的問題。(急!!)(回答後追加100分)

雙毀髓-毀蛙的腦和脊髓

·毀髓針刺入部位必須准確；毀髓針垂直刺入枕骨後凹皮膚即可，不要刺得太深。
·毀腦髓時，針體與蛙顱頂平行刺入顱腔；毀脊髓時，針體與脊柱平行插入椎管。
·腦脊髓徹底毀壞的標志：四肢(尤其下肢)肌緊張消失，並常伴有尿失禁情況。如動物仍表現四肢肌肉緊張或活動狀態，則必須重新毀髓。

3、制備脊蛙

·待蛙蘇醒後再進行蛙體實驗。
·冬季應先將蛙放在30℃～40℃的溫水中浸浴若干分鍾，待其較活躍時再進行實驗；實驗過程中用溫水清洗蛙體上的殘余硫酸。

4、脊髓反射和反射時的測定
·每次酸刺激前，蛙體須處於安靜狀態。
·每次反射活動出現後，用清水洗去蛙體上殘余硫酸，再用紗布拭去蛙體上水滴。
·反射時的測定應重復三次實驗，取其平均值，即為其反射時；每次實驗的刺激強度(如：硫酸濃度、紙片大小)和部位應保持一致。

5、反射弧的分析

·用眼科剪在踝關節處剪一環形切口時候，勿損傷血管。
·右後肢最長趾的皮膚必須除干凈(為什麼)。
·每次刺激後用清水洗去蛙體上的殘余硫酸，再用紗布擦拭去蛙體上的水滴(為什麼)。

·坐骨神經下置麻葯棉球後，應立即記時並進行屈反射實驗。
·屈反射不再出現時，立即進行搔扒反射實驗。
·在屈反射(或搔扒反射)仍存在時，應每隔1min重復1次酸刺激。
·每次酸刺激後用水清洗蛙體時，勿使水浸到麻葯棉球。

6、蛙心搏起源的分析

·實驗過程中常用任氏液浸潤心臟，以保持心臟生理活性。
·用玻璃針撥動心尖，暴露心臟背面。
·不同溫度刺激心臟某一部位時，切勿觸及心臟其他部位，以免影響實驗結果。
·斯氏結扎部位必須准確。
·每次讀取數據時，重復3次，取平均值。

7、觀察腸系膜微循環

·麻醉蛙時，注射器針頭不要刺穿下頜部皮膚。
·將腸系膜展開過孔時，不可牽拉太緊，以免撕破血管或阻斷血流。
·經常用任氏液濕潤腸系膜，以免乾燥，影響血液循環。
·滴加葯物，血管及血流出現變化後，立即用任氏液潤洗腸系膜。

8、蛙類坐骨神經-腓腸肌標本的制備

在制備標本過程中：
·經常用任氏液浸潤標本。
·不能用金屬器皿觸碰神經干。
·不得讓動物的皮膚分泌物、血液等浸染神經和肌肉。
·用任氏液清洗手及解剖器具上的污物。

http://home.htu.cn/jingpinkecheng/dwslx/shiyanjiaochen/022.htm 蛙心灌流看這個

B. 以蟾蜍為材料的實驗

可以做很多實驗，最經典的一個實驗就是蛙腿腓腸肌標本的制備，可以看到很好的條件反射。
http://www.ccty.org/jpkc/HTML/56621.html
最簡單的實驗莫過於觀察蟾蜍抱對了，再不行就解剖蟾蜍卵。或者你安排一個蟾蜍心臟分離實驗
實驗目的就是分離蟾蜍心臟，步驟包括處死蟾蜍，蟾蜍解剖，和分離心臟，再剪下心臟，看到心臟並描述一下，實驗就算成功了。這個實驗可以看到蟾蜍心臟離體後仍然跳動一段時間，可以記錄一下蟾蜍心臟一共跳動了多長時間。

C. 蟾蜍腓腸肌的制備

鋅銅之間有電勢差，放在神經上等於給其一個電刺激
水分，電解質，溫度，ph，所以要用保護液羅

D. 肌肉的收縮特徵實驗

目的和原理] 目的：觀察肌肉收縮的形式及刺激頻率與肌肉收縮反應之間的關系。原理：當給神經肌肉標本一個閾上刺激時，肌肉即發生一次收縮反應。用記錄儀描記收縮過程，可得到一次單收縮曲線。每個單收縮曲線依次分為三個時期，即潛伏期、收縮期與舒張期。如相繼給兩個以上閾刺激，刺激之間的間隔超過一個單收縮的持續時間，則肌肉將出現一連串各自分離的單收縮；若刺激間隔時間比單收縮的持續時間短，則前一個收縮還未結束就開始後一個收縮，這樣兩次收縮就會重疊起來，這種現象稱復合收縮。如果後一個收縮是在前一個收縮的舒張期內發生，各自收縮復合的結果，會出現一持續的鋸齒狀的收縮曲線，這種收縮稱為不完全強直收縮。若刺激之間的間隔時間比單收縮的收縮期短，後一收縮就在前一收縮期內發生，結果會出現一持續的收縮曲線，完全看不到舒張期的形跡，這樣的持續收縮狀態稱為完全強直收縮。

[實驗動物] 蟾蜍

[實驗器材與葯品] 肌槽、萬能支台、蛙板、蛙類手術器械、肌肉張力換能器、RM6240多道生理信號採集處理系統、任氏液。

[實驗步驟]

（一）製作坐骨神經腓腸肌標本

1、破壞腦和脊髓：取蟾蜍一隻，左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持探針從枕骨大孔垂直刺入（圖4-1A），然後向前刺入顱腔，左右攪動搗毀腦組織；將探針抽出再由枕骨大孔向後刺入脊椎管搗毀脊髓，此時如蟾蜍的四肢松軟，表示腦脊髓已完全破壞，否則應按上法再進行搗毀。

2、剪除軀幹上部及內臟：在骶髂關節水平以上0.5~1 cm處剪斷脊柱（圖4-1B），左手握蟾蜍後肢，用拇指壓住骶骨，蟾蜍頭與內臟自然上垂，右手持大剪刀沿兩側除內臟及頭胸部（圖4-1C），僅留下後肢、髖骨、脊柱及由它發出的坐骨神經。

3、剝皮：左手提脊柱斷端，右手捏住其上的皮膚邊緣（圖4-1D），向下剝掉全部後肢皮膚將標本放在盛有任氏液的培養皿中。

圖4-1 蛙類手術操作示意圖

4、將手及用過的剪刀、鑷子等全部手術器械洗凈，再進行下述步驟。

5、分離兩腿：用鑷子從背位夾住脊柱，將標本提起，剪去向上突出的尾干骨，然後沿正中線用剪刀將脊柱分為兩半，並從恥骨聯合中央剪開兩側大腿，這樣兩腿即完全分離。將兩條腿浸於盛有任氏液的培養皿中。

6．製作坐骨神經腓腸肌標本

取一腿放於蛙板上。

（1）游離坐骨神經：用玻璃鉤沿脊柱側游離坐骨神經，將標本背側向上放置，把梨狀肌及其附近的結締組織剪斷，再循坐骨神經溝找出坐骨神經之大腿部分（圖4-2），用玻璃鉤小心剝離，然後從脊柱根部將坐骨神經輕輕提起，剪斷坐骨神經的所有分支，將坐骨神經一直游離至腘窩為止。

（2）完成坐骨神經小腿標本：將游離干凈的坐骨神經搭於腓腸肌上，在膝關節周圍剪掉大腿肌肉並用剪刀將股骨刮干凈，然後在股骨中部剪去上段股骨，製成坐骨神經小腿標本。

（3）完成坐骨神經腓腸肌標本：將上述坐骨神經小腿標本在跟腱處穿線結扎後剪斷跟腱。游離腓腸肌至膝關節處，然後齊膝關節將小腿其餘部分全部剪斷。這樣就製得具有附著在股骨上的腓腸肌並帶有支配腓腸肌的坐骨神經的標本（圖4-3）。

用任氏液粘濕的銅鋅弓迅速接觸坐骨神經，如腓腸肌發生明顯的收縮，則表示標本的興奮性良好，即可將標本放在盛有任氏液的培養皿中，以備實驗之用。

（二）記錄裝置的准備

1、根據標本收縮力的大小，選擇適當的肌肉張力換能器，將換能器插入相應通道的輸入插座。

2、開機與啟動RM6240多道生理信號採集處理系統

3、將已制備好的標本用絲線系於張力換能器的受力片上，調節換能器的水平位置，拉緊絲線給標本以一定量的前負荷，可由基線上升高度得出。

4、將刺激器插頭插入刺激輸出埠，另一端與肌槽上電極相連。

5、根據標本收縮活動的形式、速度、頻率、力的大小適當調整增益與掃描速度，使信號波形完整清晰地顯示在屏幕中。

6、標本功能狀態正常穩定後即可開始實驗，進入「記錄狀態」。

圖4-2 分離坐骨神經（下肢背面） 圖4-3 坐骨神經腓腸肌標本制備

1.坐骨神經 2.腓腸肌 1.坐骨神經 2.腓腸肌 3.股骨 4.脊柱

3.股二頭肌 4.半膜肌

[觀察項目]

1、找出閾刺激

先給標本單個弱刺激，然後逐漸增大刺激強度，直到剛能描記出收縮曲線為止，此時的強度為閾強度。記錄該刺激強度。低於閾強度的刺激為閾下刺激。

刺激輸出方式：正電壓。

刺激模式：單刺激。

刺激參數：波寬為6 ms，延時為3 ms，刺激強度從0.01 V開始遞增。

掃描速度：10 s/div

2、找出最適刺激強度

在閾刺激的基礎上，繼續增加刺激強度，肌肉收縮曲線的幅度也逐漸增大，但當達到一定的刺激強度時，肌肉收縮曲線的幅度便不再隨著刺激強度的增大而增高。剛剛能引起最大收縮反應的刺激強度為最適刺激強度。記錄該刺激強度。

3、描記單收縮曲線

選用最適刺激強度，刺激模式設為單刺激，掃描速度設為1.0 s/div，描記單收縮曲線。

4、描記復合收縮曲線

選用最適刺激強度，刺激模式設為連續單刺激，刺激頻率從0.5 Hz開始，依次為0.5 Hz、1 Hz、2 Hz、4 Hz、8 Hz、16 Hz、32 Hz······，掃描速度設為1.0 s/div。

增加刺激頻率，可描記出呈鋸齒狀的不完全強直收縮曲線。

繼續增加刺激頻率，可描記出平滑的完全強直收縮曲線。

附：RM6240多道生理信號採集處理系統使用方法

打開RM6240外置設備電源、打開計算機主機及顯示器電源→雙擊屏幕上「RM6240並口2.0 h」圖標。

一、開始示波操作

1、實驗→肌肉神經→刺激頻率對骨骼肌收縮的影響→常規實驗

2、調節刺激器（1）模式 （2）波寬6 ms，延時3 ms （3）開始刺激

3、開始示波→工具→快速歸零→點擊右側「快速歸零」圖標

4、調節右側控制參數區：張力、掃描速度、靈敏度

5、工具→坐標滾動→將基線調至中央

二、開始記錄

開始記錄 →暫停記錄 →在標記框內標記字元標記

三、停止示波

1、實驗結束→停止示波

2、點擊「文件」→另存為→本地磁碟E→文件名

四、結果處理

圖形處理與列印，按照第一章介紹的基本操作進行。

[思考題]

1、如何判斷制備的神經肌肉標本的興奮性?

2、剝皮後的神經肌肉標本能用自來水沖洗嗎？為什麼?

3、引起肌肉收縮的閾刺激，最適刺激含義是什麼?

4、肌肉的收縮形式有幾種?各有何特點?

E. 實驗——坐骨神經-腓腸肌標本制備

刺激頻率與肌肉收縮的關系

【實驗目的及原理】學習坐骨神經-腓腸肌標本的製作方法，觀察不同刺激強度和刺激頻率對骨骼肌收縮的影響。肌肉的興奮外在表現是收縮，引起肌肉組織發生興奮的刺激，必須具備 一定的刺激強度 、 刺激持續 時間 和 刺激強度對時間的變化率 。

給肌肉一個短暫的有效刺激，肌肉將發生一次收縮，稱為 單收縮 （包括 潛伏期、收縮期和舒張期 ）。當給肌肉一串有效刺激時，可因刺激頻率不同，肌肉呈現不同的收縮形式，如果刺激頻率很低，即相繼兩個刺激的間隔大於單收縮的總時程，肌肉出現一連串的在收縮波形上彼此分開的單收縮。若逐漸增大刺激頻率，使相繼兩個刺激的間隔小於單收縮的總時程，而大於其收縮期，肌肉則呈現鋸齒性收縮波形，此稱為 不完全強直收縮 ，再增大刺激頻率，使相繼兩個刺激的間隔小於單收縮的收縮期，肌肉將出現完全的持續收縮狀態，此稱為 完全強直收縮 。

【實驗對象及器材】蛙或蟾蜍。蛙手術器械一套、蛙板一塊、燒杯、滴管、鐵架台、雙凹夾、肌動器、張力換能器、BL-410生物機能實驗系統、任氏液。

【實驗步驟】

（一)制備坐骨神經-腓腸肌標本

1.按常規損毀蟾蜍腦和脊髓，剪去蟾蜍的前半身、內臟，剝去皮膚、分離兩後肢。

2.取一側標本，腹面向上，分離脊柱段坐骨神經。

3.將標本背面向上，分離大腿段坐骨神經，游離坐骨神經至膝關節，膝關節以上僅保留坐背神經和1/3股骨斷端。

4.結扎跟腱，結扎線遠端剪斷跟腱，分離腓腸肌至膝關節，膝關節以下僅保留游離的腓腸肌。

5.用 浸有任氏液的鋅銅弓 迅速接觸坐骨神經， 檢驗標本興奮性 。

（二）固定神經-肌肉標本

將坐骨神經置於肌動器的刺激電極上，刺激電極與BL-410生物機能實驗系統的刺激輸出孔相連，股骨斷端固定在肌動器上，提起結扎跟腱的結扎線，將其與張力感測器前方簧片相連，張力感測器接BL-410生物機能實驗系統CH1通道；肌動器與張力感測器均固定於鐵架台上。

（三）調用「刺激頻率與反應的關系」實驗模塊。

（四） 注意每次刺激之後必須讓標本休息30s，並給標本滴加任氏液。

【實驗重點及難點】

1坐骨神經-腓腸肌標本的製作方法。

2相關器械的使用

刺蛙針 :垂直刺入枕骨大孔，破壞兩棲動物的腦和脊髓

蛙板 :兩棲動物手術台

粗剪刀 :剪斷骨骼

手術剪 :剪斷正常組織

眼科剪 :剪血管，神經

玻璃分針 :分離神經組織的手術器械

鋅銅弓 :測試神經肌肉標本的興奮性是否良好

注意事項

1、避免過度牽拉神經或用金屬器械接觸神經組織。

2、標本製成後需放在任氏液中浸泡數分鍾，刺激過程隨時給神經組織滴加任氏液，保持活性。

3、剝皮後須將手及用過的器械洗凈，再進行下一步。

4、每次刺激後應使肌肉休息30秒，每次刺激不得超過5秒。

F. 以蛙的活的脊髓—腓腸肌為材料驗證ATP是直接能源物質步驟

實驗步驟：
(1)剝取蛙的腓腸肌，制備如圖所示的兩套實驗裝置，編號為甲、乙。
(2)向甲、乙不斷施加電刺激,直至指針不再偏轉為止。向裝置甲的腓腸肌上滴加適量的適宜濃度的ATP溶液，直到不再吸收為止。立即對坐骨神經施加適宜強度的電刺激。乙收縮，指針偏轉。

(3)向裝置甲的腓腸肌上滴加適量的適宜濃度的葡萄糖溶液，直到不再吸收為止。立即對坐骨神經施加適宜強度的電刺激。甲沒反應，指針不動。
實驗結論：蛙的腓腸肌收縮所需的直接能源物質是ATP，而不是葡萄糖。

G. 蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本可以進行哪些實驗研究，設計實驗思路

坐骨神經我肯定好的能寫

成

H. 蟾蜍坐骨神經腓腸肌實驗分析怎麼寫

坐骨神經叢中的一支神經支配著腓腸肌的活動，所以一刺激坐骨神經，腓腸肌就會收縮。

I. 此圖中的肌肉是感受器還是效應器

神經---肌肉標本 蟾蜍和青蛙是兩棲動物，兩棲動物一些基本生命活動和生理機能與溫血動物近似，而其離體組織、器官保持活性所需的生活條件比較簡單，易於控制和掌握，所以生理實驗中常選用蟾蜍或青蛙的離體組織或器官作為實驗標本。坐骨神經和腓腸肌屬於可興奮組織，給坐骨神經一個適宜的刺激可產生一可傳導的動作電位，引起其所支配肌肉（腓腸肌）的收縮。將蟾蜍或青蛙的坐骨神經腓腸肌標本置於任氏液中，其活性可以在幾小時內保持不變。故制備蟾蜍或蛙的坐骨神經腓腸肌標本，可用於研究觀察組織的興奮與興奮性、傳導性以及刺激與肌肉收縮等基本生理現象和過程。 下圖是青蛙離體的神經—肌肉標本，BC段和CD段的距離相等。下列關於興奮傳導的說法正確的是（） < xmlnamespace prefix ="v" ns ="urn:schemas-microsoft-com:vml" />< xmlnamespace prefix ="o" ns ="urn:schemas-microsoft-com:office:office" /> A．如果在肌肉某處用電刺激，興奮在BC段上的傳導與在CD段上的傳遞所用的時間相同 B．若刺激點改在D處，則在A、B、C三處都可以檢測到膜內外電位的變化 C．一般情況下，肌肉在反射弧的組成中屬於效應器的一部分D．興奮以電信號形式在神經元之間傳遞，方向是單向的

J. 蟾蜍的腓腸肌在哪裡

樣制備蟾蜍坐骨神經-腓腸肌標本:[2]步驟,這個基本實驗的步驟到底是什麼呢?讓我們一起來看一下!