⑴ 紙電泳的儀器裝置
紙電泳的儀器裝置包括電泳槽及電泳儀兩大部分。 電泳槽是進行電泳的裝置,其中包括鉑電極(直徑0.5~0.8cm)、緩沖液槽、電泳介質的支架和一個透明的罩。常見的電泳槽有水平式和懸架式等。電泳儀是提供直流電源的裝置,它能控制電壓和電流的輸出。電泳槽內的鉑電極經隔離導線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連,電源為具有穩壓器的直流電源。紙電泳可分為低壓電泳和高壓電泳兩類。低壓電泳的電壓一般在100~500V,電流為 0~150 mA,高壓電泳的電壓一般在500~10 000V,50~400 mA。
⑵ 凝膠電泳的應用
凝膠電泳被廣泛用於分子生物學、遺傳學和生物化學:
⒈大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳(agarose gel electrophoresis)分離,也可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)。
⒉蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯醯胺凝膠中進行(SDS-PAGE),或者非變性凝膠電泳,或二維電泳。3.毛細管電泳
⒋酶譜法(zymography)
⒌變性梯度膠凝電泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)
瓊脂糖和聚丙烯醯胺可以製成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恆定的電場下電泳。聚丙烯醯胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯醯胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯醯胺凝膠採用垂直裝置進行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進行DNA電泳。
⑶ 電泳儀一般在哪些實驗中使用
在核酸實驗中經常用到,比如DNA、RNA等電泳實驗.在蛋白質實驗中用到,比如Western blot 實驗,雙向電泳實驗等. 再深入一些,大些的綜合性實驗中都會用到的,比如染色質免疫沉澱實驗等.
⑷ 凝膠電泳的實驗原理
凝膠電泳(英語:Gel electrophoresis)或稱膠體電泳 是一大類技術,被科學工作者用於分離不同物理性質(如大小、形狀、等電點等)的分子。凝膠電泳通常用於分析用途,但也可以作為制備技術,在採用某些方法(如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡)檢測之前部分提純分子。 該技術操作簡便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心法)所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳後的凝膠中回收特定的DNA條帶,用於以後的克隆技術操作。
凝膠電泳被廣泛用於分子生物學、遺傳學和生物化學:
1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳(agarose gel electrophoresis)分離,也可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)。
2.蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯醯胺凝膠中進行(SDS-PAGE),或者非變性凝膠電泳,或二維電泳。
3.毛細管電泳
4.酶譜法(zymography)
5.變性梯度膠凝電泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)
瓊脂糖和聚丙烯醯胺可以製成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恆定的電場下電泳。聚丙烯醯胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯醯胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯醯胺凝膠採用垂直裝置進行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進行DNA電泳。
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:
1、 DNA的分子大小:
線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難於在凝膠孔隙中蠕行,因而遷移得越慢。
2、 瓊脂糖濃度
一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。分離小於0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大於10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間於兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
3、 DNA分子的構象
DNA分子處於不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而開環雙鏈DNA移動最慢。如在電泳鑒定質粒純度時發現凝膠上有數條DNA帶難以確定是質粒DNA不同構象引起還是因為含有其他DNA引起時,可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個回收,用同一種限制性內切酶分別水解,然後電泳,如在凝膠上出現相同的DNA圖譜,則為同一種DNA。
4、 電源電壓
在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大於2kb的DNA片段姆直媛蝕鐧階畲?所加電壓不得超過5V/cm。
5、嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用於檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的鹼基對之間並拉長線狀和帶缺口的環狀DNA,使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15%。
6、 離子強度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配製凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高並明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。
對於天然的雙鏈DNA,常用的幾種電泳緩沖液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配製成濃縮母液,儲於室溫。
⑸ 電泳儀的主要用途是什麼主要可以分析什麼
電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。
電泳一般分為版自由界面電泳權和區帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。
所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質由於所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據這一特徵,應用電泳法便可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或實驗研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基於上述原理設計製造的。
⑹ 電泳處理是什麼
電泳的基本原理
電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質、核苷酸、核酸等都具有可電離基團,它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電,在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術就是利用在電場的作用下,由於待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異,使帶電分子產生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術。
電泳過程必須在一種支持介質中進行。Tiselius等在1937年進行的自由界面電泳沒有固定支持介質,所以擴散和對流都比較強,影響分離效果。於是出現了固定支持介質的電泳,樣品在固定的介質中進行電泳過程,減少了擴散和對流等干擾作用。最初的支持介質是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質在實驗室已經應用得較少。在很長一段時間里,小分子物質如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質的電泳進行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術如HPLC等來進行分析。這些介質適合於分離小分子物質,操作簡單、方便。但對於復雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質的引入大大促進了電泳技術的發展,使電泳技術成為分析蛋白質、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝膠是澱粉凝膠,但目前使用得最多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯醯胺凝膠。蛋白質電泳主要使用聚丙烯醯胺凝膠。
電泳裝置主要包括兩個部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產生電場,驅動帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用於聚丙烯醯胺凝膠電泳中蛋白質的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm ´ 14 cm,厚度為1mm~2 mm,近年來新研製的電泳槽,膠面更小、更薄,以節省試劑和縮短電泳時間。制膠時在凝膠溶液中放一個塑料梳子,在膠聚合後移去,形成上樣品的凹槽。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,或將凝膠直接浸入緩沖液中。由於pH值的改變會引起帶電分子電荷的改變,進而影響其電泳遷移的速度,所以電泳過程應在適當的緩沖液中進行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質的穩定。
⑺ 電泳裝置
那要根據你產品的大小、產量來決定,首先確定你的電泳槽,然後根據電泳槽,配置其他相關設備。小的一兩萬,多則幾百萬都有。你應該詳細說明一下。
給你一個網站,你可以先看看,電泳有那些設備,然後根據自己的產品的大小或產量,你自己估算大概的價位。http://www.haocoat.com