紙色譜實驗裝置圖

A. 看圖回答下列有關問題．（1）如圖1表示紙層析法分離葉綠體中色素的結果，條帶2表示______（填色素名稱）

（1）分析圖1，條帶2表示葉黃素，色素分布在葉綠體的類囊體上．
（2）照光與不照光部分的生理過程中差別是光合作用是否進行，但同時它們都進行呼吸作用，b=葉片原重量+總光合作用-呼吸消耗，a=葉片原重量-呼吸消耗，因此b-a=總光合作用．
（3）圖中15℃植物的呼吸速率為10；該植物在15℃、3千勒克斯的光照條件下，凈光合作用產生的氧氣量為20，則總光合作用量是 30mg，此時葉肉細胞中合成ATP的生理反應是呼吸作用和光合作用，場所有細胞質基質、線粒體、葉綠體．要測植物呼吸強度應將實驗裝置放在黑暗條件下操作，防止光合作用對實驗結果的影響．
故答案為：
（1）葉黃素 類囊體
（2）12小時內右側截取部分光合作用製造的有機物總量
（3）30 細胞質基質、線粒體、葉綠體 黑暗

B. 為什麼展開容器必須盡量密封

因為紙色譜很多時候是使用類似石油醚之類的揮發性物質作為展開劑，如果不密閉，展開劑揮發掉，同時液面低了，爬板速度也會受影響，不容易展開。

提取分離時，用來分離極性不同的兩種物質的溶劑叫作展開劑，選擇適當的展開劑是首要任務。一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油醚<己烷<苯<乙醚。

紙色譜實驗原理：

紙色譜實驗又叫做紙層析法。紙層析法依據極性相似相溶原理，是以濾紙纖維的結合水為固定相，而以有機溶劑作為流動相。由於樣品中各物質分配系數不同，因而擴散速度不同，從而達到分離的目的。

C. 紙層析法原理

紙層析法又稱紙色譜法。以紙為載體的色譜法。固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機溶劑；也可使紙吸留其他物質作為固定相，如緩沖液，甲醯胺等。
紙層析法依據極性相似相溶原理，利用混合物各組分在流動相和固定相兩種不同溶劑中的分配系數差異，將它們分離。
紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，紙層析所用展層溶劑大多由有機溶劑和水組成。其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機溶溶劑是流動相。因為濾紙纖維與水的親和力強，與有機溶劑的親和力弱，因此在展層時，水是固定相，有機溶劑是流動相。
試樣經層析後可用比移值（Rf）表示各組成成分的位置，其中，比移值就是原點中心至色譜斑點中心的距離與原點中心至流動相前沿的距離之比。
由於影響比移值的因素較多，因此一般採用在相同實驗條件下對照物質對比以確定其異同。作為單體鑒別時，試樣所顯主色譜斑點的顏色（或熒光）與供置，應與對照（標准）樣所顯主色的譜斑點或供試品-對照品（1∶1）混合所顯的主色譜斑點相同。作為質量指標（純度）檢查時，可取一定量的試樣，經展開後，按各單體的規定，檢視其所顯雜質色譜斑點的個數或呈色（或熒光）的強度。作為含量測定時，可將色譜斑點剪下洗脫後，再用適宜的方法測定，也可用色譜掃描儀測定。

D. 紙色譜圖的介紹

paper chromatogram指以濾紙作為載體進行色譜展開並顯色所得到的有色斑點的排列。

E. 紙色譜分離-半微量化學分析法

20～50mg試樣用NH₄I使錫揮發，重量法測定錫。試樣再用HF溶解，經紙色譜分離後分別測定Nb₂O₅、Ta₂O₅、MnO、TFe₂O₃等12個組分，其分析流程見圖70.6。

圖70.6 鈮(鉭)鐵(錳)礦紙色譜分離-半微量分析流程圖

試劑

色層紙新華層析濾紙中速1號，30cm×20cm，其2/3塗以50g/LNH₄NO₃溶液，晾乾。

展開劑甲基異丁基酮-氫氟酸-硝酸(88+8+4)。

氧化劑混合溶液將200mLH₂SO₄倒入100mL(1+2)H₃PO₄中，加8gKI，溶解後混勻。

二苯醯基甲烷溶液稱取2g二苯醯基甲烷、13gEDTA，置於1000mL燒杯中，加入510mL無色吡啶，再加35mL氨水、470mL水，混勻。用時現配。

六次甲基四胺-鹽酸緩沖溶液(pH5.5)300g/L六次甲基四胺與!(HCl)=0.8%等體積混合。

分析步驟

(1)二氧化錫的測定

稱取20～50mg(精確至0.01mg)試樣，置於鉑坩堝中，在950℃灼燒至恆量。加入0.5gNH₄I，攪勻，表面再覆蓋一層，置於高溫爐中，在425～475℃灼燒至棕色氣體完全消失(灼燒溫度達500℃時會引起鐵的損失)。取出，冷卻，加1mLHNO₃，低溫蒸干，再放入高溫爐中，逐漸升溫至950℃灼燒至恆量。失去的量為二氧化錫量。

(2)鈮和鉭的測定

於測定錫後的鉑坩堝中，加入1mLHNO₃、5mLHF，加蓋，加熱至試樣完全分解。蒸發至接近干後，加5mLHF，再蒸發至近干。取下，加2mLHF並蒸發至0.5～1mL。冷卻後，塗在距色層紙下端4～5cm處，用少許HF洗坩堝2次，亦塗在色層紙上，再用甲基異丁基酮洗3次，塗於色層紙上。晾乾後，放入盛有展開劑的色譜箱中，層析至有機溶劑擴散到17～18cm處，取出。晾乾後，放入氨氣箱中，10min後取出。待色層紙干後，噴上20g/L單寧溶液，此時顯出黃色的鉭帶、橙色的鈮帶，其他元素留在原點。鈮、鉭的R_f值分別為0.65、0.97，其他元素為0。待色層紙干後，剪下鉭、鈮帶，分別放入已恆量的鉑坩堝中，低溫灰化後，在800～850℃灼燒至恆量。同時作空白測定，按色層紙的面積扣除空白值。必要時色層紙可先經氫氟酸-鹽酸浸洗後再用，以降低空白值。

(3)系統分析溶液的制備

將剪去鈮、鉭帶後剩餘的雜質色帶剪下，置於瓷坩堝中灰化，在750～800℃灼燒15min。取出，冷卻後，加入0.5gK₂S₂O₇熔融，冷後，再加5滴H₂SO₄反復處理兩次，將坩堝放入100mL燒杯中，用50mL(5+95)H₂SO₄加熱浸取。冷後，移入100mL容量瓶中，用(5+95)H₂SO₄稀釋至刻度，搖勻。所得溶液供測定錳、鐵、鈦、鈣、鎂、鎢、鋁、鋯(鉿)、鈾和稀土總量之用。

(4)氧化錳的測定

移取5.0mL試液，置於100mL燒杯中，加35mL水及7.5mL氧化劑混合溶液，混勻。加熱煮沸10min，取下，冷後移入50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用2cm比色皿，於波長520nm處測量吸光度。

校準曲線0～400μgMnO。

(5)全鐵的測定

移取5.0mL試液，置於50mL容量瓶中，用水稀釋至10mL，用磺基水楊酸光度法測定。

校準曲線0～140μgFe₂O₃。

(6)二氧化鈦的測定

移取10.0mL試液，置於50mL容量瓶中，用二安替比林甲烷光度法測定。

校準曲線0～100μgTiO₂。

(7)氧化鈣、氧化鎂的測定

移取20.0mL試液，置於25mL容量瓶中，加入鑭鹽溶液，用原子吸光光譜法測定。

(8)三氧化鎢的測定

移取5.0～10.0mL試液，置於50mL比色管中，用(5+95)H₂SO₄稀釋至10mL。加2mL250g/LKSCN溶液，搖勻，加13mLHCl，冷卻。加1mL新配製的10g/L次亞磷酸鈉溶液、4滴200g/LSnCl₂，搖勻後，滴加TiCl₃溶液至紫色。放置20min後，加10.0mL(3+7)乙酸乙酯-苯萃取1min。待分層後吸取有機相放入1cm比色皿中，於波長410nm處測量吸光度。

校準曲線0～12μgWO₃。

(9)三氧化二鋁的測定

移取5.0mL試液，置於5mL燒杯中，加熱至三氧化硫冒盡。取下，冷卻，用2滴鹽酸及少量水溫熱溶解，移入25mL容量瓶中。用鉻天青S光度法測定。

(10)氧化鋯(鉿)的測定

移取10.0mL試液，置於25mL燒杯中，蒸至近干後，取下。加12.5mL2mol/LHCl，用水稀釋至40mL。加數滴10g/L抗壞血酸溶液、2mL2g/L苦胺酸R溶液，置於水浴上，在50～60℃加熱15min。冷卻後，移入50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用2cm比色皿，於波長560nm處測量吸光度。

校準曲線0～60μgZrO₂。

(11)八氧化三鈾的測定

移取5.0mL試液，置於50mL具塞比色管中，加1mL500g/L酒石酸溶液、18mL二苯醯基甲烷顯色劑溶液(此時溶液pH應≥7)及5.0mL乙酸異戊酯，輕輕搖動10次，放置1h，用1cm比色皿，於波長410nm處測量吸光度。

校準曲線0～35μgU₃O₈。

(12)稀土總量的測定

移取5.0～10.0mL試液，置於小燒杯中，蒸干，加3mL!(HCl)=0.8%，溫熱浸取，冷卻，移入分液漏斗中。加1mL250g/L磺基水楊酸溶液、少許抗壞血酸、1滴2g/L溴甲酚綠指示劑，用300g/L六次甲基四胺溶液中和至黃綠色，加3mL六次甲基四胺-鹽酸緩沖溶液、10mL0.04mol/LPMBP-苯溶液，萃取1min。分層後，棄去水相，有機相用pH>5的水洗滌一次，棄去水相。立即加入10mL!(CHOOH)=0.3%反萃取1min，分層後，將水相放入10mL乾燥具塞比色管中，用!(CHOOH)=0.3%稀釋至刻度。加1mL10g/L抗壞血酸溶液、2mL0.5g/L偶氮胂Ⅲ溶液，混勻。用2cm比色皿，於波長650nm處測量吸光度。

校準曲線0～10μgRE₂O₃。

(13)氧化亞鐵的測定

稱取2～5mg(精確至0.01mg)試樣，放入乾燥的40mL聚乙烯瓶中，加50mg二氧化硅粉末。在另一塑料瓶中小心混合等體積的氫氟酸和硫酸，發熱幾秒鍾後，趁熱用塑料吸管吸2mL混合酸，加入盛試樣的塑料瓶中，待大量氣體冒出後，立即用塑料塞塞緊，將瓶子浸在沸水中加熱10～15min(1h內無影響)。取下，快速冷卻，加10mL500g/L硫酸鈹溶液，迅速轉入預先盛有25mL500g/L乙酸銨溶液、10mL100g/L檸檬酸鈉溶液和5mL1g/L1，10-鄰二氮菲溶液的100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。10min後，用1cm比色皿，於波長510nm處測量吸光度。同時繪制校準曲線。最好用已知氧化亞鐵含量的標准物質按同樣方法處理作為標准。

F. 紙色譜法基本原理是什麼 呵呵

紙色譜法基本原理：

紙纖維為載體，吸著在其上的水為固定相，屬於正相分配色譜，依據分配系數的不同而達到分離，極性或親水性強的組分，K大，Rf值小，極性弱或親脂性強的組分，K小，Rf值大。

紙色譜法指的是把一種溶劑固定在固體的支持物上，由於濾紙纖維對水有較強的親和力，一般能吸附其自身質量22%的水，其中，6%的水以氫鍵與纖維素牢固結合，這些水即稱為固定相。

被水飽和的有機相 為流動相。當流動相從含有氨基酸樣品的濾紙上流過時，氨基酸就在固定相與流動相之間連續進行分配。

(6)紙色譜實驗裝置圖擴展閱讀：

紙色譜法系以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質為固定相，用展開劑進行展開的分配色譜。供試品經展開後，可用比移值(R<[f]>)表示其各組成成分的位置（比移值＝原點中心至斑點中心的距離／原點中心至展開劑前沿的距離）。

但由於影響比移值的因素較多，因而一般採用在相同實驗條件下與對照物質對比以確定其異同。作為葯品的鑒別時，供試品在色譜中所顯主斑點的位置與顏色（或熒光），應與對照品在色譜中所
顯的主斑點相同。

作為葯品的純度檢查時，可取一定量的供試品，經展開後，按各葯品項下的規定，檢視其所顯雜質斑點的個數或呈色（或熒光）的強度。作為葯品的含量測定時，將主色譜斑點剪下洗脫後，再用適宜的方法測定。

G. 紙色譜發法實驗中怎樣才能得到好的色譜圖，在操作上應注意哪些問題

濾紙：剪層析濾紙，點樣等過程中要注意盡量不用手接觸樣品要經過的地方；因為紙層析比較靈敏，手上的一些物質也可能會顯示，干擾結果。
點樣：不要損傷點樣處的濾紙，不要讓原點直徑大於5mm，樣品含量不能超過濾紙承載量；否則會出現層析點太大不能分開或拖尾嚴重。
展層過程：層析液不能沒過原線，濾紙要放平，不能和層析缸壁及其他濾紙（如果有）貼在一起，注意保持溶劑前沿，不要讓層析液超過了濾紙最上邊（大多數情況要求）。
其他：注意用鉛筆在濾紙上角做記號，別搞得分不清左右；完成後顯色後，注意標記（鉛筆）前沿和層析點。