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設計簡易分光裝置

發布時間:2022-05-16 12:18:03

① 分光器、分纖器、分路器各是什麼,有什麼區別,哪位高手能解決一下

分光器是一進多出的光纜分線器,我見過的有1進16出或者是2進32出的使用時需要把局端的主線溶出一芯來接到IN口,這樣每一個OUT口都有信號了。和樓里的分光纜接到一起就可以了。(隨便接沒有順序的而且是雙向通信)
分光器的連接一般有兩種,一種是不帶適配器的用熱熔的方法連接;還有一種是帶適配器的,用光跳線和其它ODF跳接。不管哪種連接方式,不管是1分8、1分16還是1分32,都是用局端來的1芯,通過分光器分出很多芯去連接至各樓的光纜。看圖好像你沒有和局端的光纜熔接吧,每個分光器會有1芯的。
分光器顧名思義就是把一路光信號分為幾路,並且可以訂制光功率的分光比
連接很簡單啊,要是分光器有頭子就用法蘭接,沒頭子就用熔接機焊
看的有點似懂非懂
樓層1光纜--->跳線1--->分光器第1路---分光器進線<---跳線<---主纜
樓層2光纜--->跳線2--->分光器第2路---
樓層2光纜--->跳線3--->分光器第3路---
分線器原理

在我們使用的10/100M乙太網網路中,傳輸界質是五類雙絞線。它是有4對共8芯線組成。我們只用其中4根(2對)進行數據的傳輸,還有4根(2對)線剩餘。因此,我們可以利用剩餘的4根線同樣作為數據的傳輸。這樣就達到一根網路線同時供兩個用戶上網的目的了。我們一般不這樣使用。
了解了分線器的原理後,我們就應該明白,網路中心製作的分線器仍然是讓用戶單獨享用線路,它是把網路線中的8根線分成兩組線路傳輸數據,因此,並不會影響用戶上網的速度和帶寬。這個與一般外面買回來的分線接頭在傳輸上有著本質上的差別。所以,它也不會導致接在同一對分線器上用戶不能互相訪問。
分線器的組成

分線器是成對使用。一對分線器是由兩根分線器的組成。
一個分線器由兩個水晶頭,一個模塊組成,兩個水晶頭是通過雙絞線與模塊進行連接的。其中一個水晶頭的排法是,藍、藍白,棕白、棕4根線,分別在水晶頭的1,2,3,6槽內。另一個水晶頭的排法是,綠白、
分線器
綠、橙白、橙4根線,分別在水晶頭的1,2,3,6槽內。另一對分線器的做法是相同的。
分線器的使用

用戶端(宿舍)和交換機各需一個分線器。如果網路線兩頭都是水晶頭,就把兩邊的水晶頭分別接在兩個分線器的模塊上。一般比較長的一個分線器放在用戶端,較短的分線器放在交換機端。機房端分線器的兩個水晶頭分別插在交換機的兩個埠上,用戶端分線器的兩個水晶頭分別接給兩個用戶使用。
分線器使用的注意事項和好壞判斷

1、分線器應該在該段雙絞線沒有問題(8根芯線都沒有斷開)的情況下才能使用。
2、一對分線器相當於把一根雙絞線變成兩根直通線。因此,藍、藍白,棕白、棕排法的水晶頭對應於另一頭的藍、藍白,棕白、棕排法的水晶頭。在使用和檢測分線器好壞時要注意這個問題。
3、分線器的檢測與普通雙絞線的檢測方法相同。
分路器是用來使電話通道與數據通道分離的裝置。
熔融拉錐光纖分路器(Fused Fiber Splitter)
熔融拉錐技術是將兩根或多根光纖捆在一起,然後在拉錐機上熔融拉伸,並實時監控分光比的變化,分光比達到要求後結束熔融拉伸,其中一端保留一根光纖(其餘剪掉)作為輸入端,另一端則作多路輸出端。目前成熟拉錐工藝一次只能拉1×4以下。1×4以上器件,則用多個1×2連接在一起。再整體封裝在分路器盒中。
這種器件主要優點有(1)拉錐耦合器已有二十多年的歷史和經驗, 許多設備和工藝只需沿用而已, 開發經費只有PLC的幾十分之一甚至幾百分之一(2)原材料只有很容易獲得的石英基板, 光纖, 熱縮管, 不銹鋼管和少些膠, 總共也不超過一美元. 而機器和儀器的投資折舊費用更少,1×2、1×4等低通道分路器成本低。(3)分光比可以根據需要實時監控,可以製作不等分分路器。
主要缺點有(1)損耗對光波長敏感,一般要根據波長選用器件,這在三網合一使用過程是致命缺陷,因為在三網合一傳輸的光信號有1315nm、1490nm、1550nm等多種波長信號。

② 分光光度計的校正原理

一、分光光度計:又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可採用不同的發光體作為儀器的光源。鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射後,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。


原理:

分光光度計採用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品後,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:

A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度;

I。為入射的單色光強度;

I 為透射的單色光強度;

T 為物質的透射率;

k 為摩爾吸收系數;

L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;

c 為物質的濃度;

物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數後可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身並沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色後再測定,故又稱比色分析。由於顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標准品或對照品同時操作。

③ 分光器和波分復用器的具體應用場景是什麼

具體應用場合為各種光端機、光通訊終端等。

波分復用器是把不同波長的光信號復合到一根光纖上進行傳輸,而分波器正好相反,是把復合到一起不同波長的光信號分開。

分光器相當於將一根光纖分成多跟光纖。傳輸到不同的地反,像前幾年比較流行的一款玩具,底部有一個裝電池的柄,上部有一個小燈泡,然後小燈泡前端是一把散開的燈芯,上面有帶有各種顏色的光,挺漂亮的。這個東西在燈芯下部燈泡上面裝的就是簡單的分光器。

(3)設計簡易分光裝置擴展閱讀:

分波器分出來的光信號是相同的,裡麵包含所有在這條光路上面傳輸的光信號,但對應到終端設備上來說他要拾取的信號為特定波長(如1310、1550)的光信號,不能把所有的光信號都接進來,所以在終端設備的光路入口位置要加波分復用裝置。

現在光通信設備應用已經非常廣范、遠距離通信都有用到。光端機、帶光口的交換機、中興、華為也還有專門提供光路集成通訊的業務,這些領域應用的多一些。

④ 自製陽光導入裝置:家裡客廳沒有光,能不能自製一套簡易、可行、經濟的裝置,將陽光引入

要自製太陽光導入器可能有些困難,尤其要達到實用的程度,可能要利用一些半成品
首先我們要理解,光是走直線的,所以要利用光的折射、反射原理才能達成。
簡單可分為三部分
1. 集光器: 利用光的折射、反射原理採集太陽光,面積越大光量越大,一般都會利用好幾個甚或數百個菲尼爾透鏡來提高採光量,如果要自製的話就可以用新型的汽車大燈殼來改造,但效果差很多;但如果要考慮早晚與四季的太陽直射角度就還要加裝太陽光跟蹤器,跟蹤器內部的控制系統,會自動計算出太陽光採集面與太陽光的角度,從而跟蹤太陽光,控制集光器接受太陽光照的角度,提高採光量。
2. 傳導管:目前有1.光導管,用反射率很高的材料製成的圓管,將光線反射到您想要的位置,通常圓管的截面積只比集光器小一些(看集光器的設計),體積很大很占空間,如果要自製的話,可用鏡子(只能做成潛艇潛望鏡的形式)或高亮度鋁箔紙等材料。2.光纖,優點,體積小,可任意彎曲,但缺點是需要許多專業光學設備來支持,自己DIY可買LED光纖照明線與銜接的介面設備來使用。
3. 散射器:將傳導進室內的光線散射出去,一般要增加散射角度,所以仍是半球體居多,自己DIY則可找高透光的霧面玻璃瓶罐,或利用高透光的霧面貼紙(像手機霧面的保護貼等)貼在可用的玻璃瓶罐上也行。
總之,要自己DIY達到堪用的程度很難,買一些半成品來組裝才有實用價值。

⑤ 分光光度計的原理是什麼

在分光光度計中,將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與眾不同波長相對應的吸收強度.如以波長(λ)為橫坐標,吸收強度(A)為縱坐標,就可繪出該物質的吸收光譜曲線.利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法,稱為分光光度法,也稱為吸收光譜法.用紫外光源測定無色物質的方法,稱為紫外分光光度法;用可見光光源測定有色物質的方法,稱為可見光光度法.它們與比色法一樣,都以Beer-Lambert定律為基礎.
近年來,紫外及可見光分光光度分析已得到廣泛的應用,它不僅可以用於物質的鑒定及結構分析,而且還可以用於某些物質含量的測定.
分光光譜技術可用於:
通過測定某種物質吸收或發射光譜來確定該物質的組成.
通過測量適當波長的信號強度確定某種單獨存在或與其他物質混合存在的一種物質的含量.
通過測量某一種底物消失或產物出現的量同時間的關系,追蹤反應過程.
一、紫外及可見光分光光度法這是一種只在可見光及紫外光光譜應用范圍內測量物質吸收輻射線的技術,應用十分廣泛.其中分光光度計可用於精確測量特定波長的吸收值,而比色計則是一種較簡單的測量儀器,其原理是利用慮光片來測量較寬波段(如可見光中的綠光、紅光或藍光范圍)的吸收值.
光吸收法則:
溶液對光的吸收有兩個基本法則:
透過溶液的光的吸收值同吸收溶質的分子數目(即溶質濃度[C])呈指數相關.
透過溶液的光的吸收值同透過吸收溶液的路徑長度l成指數相關.
這兩條法則包括在比爾-朗伯關系式中.通常以入射光(Io)和出射光(I)的光密度來表示:
ε其中ε對於吸收物質及波長是一個常數,稱為吸光系數或吸收系數,[C]的單位為mol/L或g/L,l的單位為ml.這一公式非常有用,因為大多數分光光度計設計為直接測量log10(Io/I)的值(A)或消光值(E)(舊教材中可能使用以廢除的術語:光密度).對於遵循比爾-朗伯關系的物質,A與C呈線性關系.吸收值常用下標表示其波長,如A550表示550nm處的吸收值.透過溶液的光的比例稱為透光率(T),可由出射光和入射光的比值求得.
吸收值(A)(absorbance)--由公式得出:
透光率(T)(transmittance)--通常以百分數表示:T=(I/Io)×(一)比色計比色計用於測定顏色明顯,並且是溶液主要組分的待測物,如血液中的血紅細胞,也可以在待測物之中加入一種試劑,使其形成有色產物(一種生色團),如用茚三酮法測定氨基酸含量.定量分析某種物質要做標准曲線,標准曲線是在測定待測樣品的同時測定已知含量的物質來製成的,而不是使用比爾-朗伯關系.
光源通常為鎢絲燈泡,通過一個凸透鏡聚焦後產生一束平行光,平行光穿過裝有溶液的玻璃樣品或小池,然後透過一個有色濾光片到達光電管檢測儀,檢測儀產生一個同落在光電管上的光密度成正比的電勢,來自於光電管的信號被放大然後傳遞到電流計或數字讀數器.
比色計的使用:
①接通電源使儀器穩定,使用前至少要讓燈預熱5min;② 選擇一種同底物顏色互補的濾光器;③調零(用空白對照調零);④調整靈敏度;⑤分析樣品及標准溶液;⑥由於不同比色杯的吸光特性、杯壁厚度不同,因此為了提高精確度,同一試驗應用同一比色杯,且在比色槽中擺放的方位相同;⑦每次測樣前清洗比色杯;⑧經常重復測定同一溶液檢驗比色計的可重復性;⑨用標准溶液繪制標准曲線.
由於大多數過濾器過濾出來的光的波帶很寬,因而比色計既不能用於確定某種復合物,也無法分辨在混合液中吸收特性非常相近的兩種物質.比色計所用光電管的變化系數為0.5%左右,因而不適合要求具有高度精確性的工作.使用這種最簡單的儀器,由於儀表上對數測量刻度單位的隨意性,即使是把表上的靈敏度/刻度調節到零控點,在一個儀器上獲得的值不可直接同另一台儀器上測得的值相比較,同一儀器的不同設置之間也不可直接比較.比色計對於特定波長的量化工作是不合適的.
(二)紫外光/可見光分光光度計紫外光/可見光分光光度計基本裝置中採用高強度的鎢燈作為光源,能夠在可見光范圍(400~700nm)調節.氘燈用於紫外分光光度測量(200~400nm);使用氘燈時要用石英杯,因為紫外線不能透過玻璃.
分光光度計之所以優於比色計就在於使用了一個衍射光柵將光源的復色光轉換為單色平行光束.實際上從這種單色一種產生的光不是某個波長的光,而是一段窄的帶寬上的光,帶寬是分光光度計的一個重要特性,這是由於它決定了吸收測量中所用的波長--普通分光光度計的帶寬為5~10nm,用於研究的儀器的帶寬小於因為光柵夾縫的寬度影響著帶寬,帶寬隨光柵夾縫的寬度的減少而降低,要獲得特定波長下的精確數據,盡可能使用最小的縫寬度.然而,減少了縫寬也會減少到達監測器的光度,降低了信/噪比.縫寬可減少的程度取決於檢測/放大系統的靈敏度及穩定性於離散光的存在.
大多數UV/可見光分光光度計使用的比色杯的光穿過路徑為10nm.一次性塑料杯適合於對水和乙醇溶液在可見光范圍內的測量.玻璃比色杯的生產要求更加嚴格的標准,因而在精確研究中要使用玻璃比色杯,尤其當溶液的吸收值很低時(<0.1),即使盛對照液與待測樣品液的比色杯在光學性質上有稍許不同,也會導致結果偏差.玻璃和塑料會吸收UV光,因此在測波長小於300nm的吸收值時要使用石英杯.
進行測量之前,比色杯要保證干凈,無劃痕,外表面乾燥,盛液到適當高度,並放在了比色槽中的正確位置.生物樣品中蛋白質和核酸可能會在玻璃/石英杯的內表面沉積,因而要用棉球沾上丙酮擦去比色杯內的沉澱或用1mol/L硝酸浸泡過夜.腐蝕性及毒性溶液必須使用有蓋子的比色杯,以防止濺出,破壞儀器.
基本分光光度計使用的光電管類似於比色計中所使用的光電管.許多情況下,當波長高於和低於550~600nm時必須使用不同的光電管,這是因為它們在可見光波長內的靈敏度不同,更精彩的儀器中所使用的是具有比光電管更高的靈敏度和穩定性的檢測器.數字顯示由於不易產生視覺錯誤和誤讀范圍的錯誤,正逐漸代替指針讀數.一些儀器可以直接給出所測定物質的濃度.
.紫外光/可見光分光光度計的類型:
基本分光光度計只產生單束光.這種儀器首先用空白對照調到零吸收值,然後取出空白液,加入待測液,測定待測液的吸收值.也有一種雙束分光光度計,有單色光源產生的光束被分為兩束,一束穿過待測液,另一束穿過空白液.吸收值由一個電子線路通過對比透過待測液及空白液的出射光進行測定.雙光束分光光度計減少了由於光源輸出的不穩定或檢測系統靈敏度的變化而導致的測量錯誤,這時由於待測液與對照液是同時進行測量的.記錄式分光光度計是一種雙束測定儀,用於記錄已知波段下吸收值隨時間的變化(如用於酶分析).
.分光光度計的定量分析:
假如已知一種物質在某一波長下的吸光率(通常是該物質的最大吸收值,這時靈敏度最高),這種物質純溶液的濃度可用比爾-朗伯關系式算出.摩爾吸光系數是指物質在1mol/L的濃度下,比色杯厚度為1cm時的吸收值.該值可以從光譜數據表中查到,也可以用實驗方法通過測量一系列已知濃度的物質的吸收值來繪制一條標准曲線.這樣,在所要求的濃度范圍內,便可確定吸收值與濃度之間存在的線性關系,該直線的斜率即為摩爾吸光系數.
比吸光率是指物質質量溶液濃度為10g/L時,比色杯厚度為1cm時測定的吸光值.該值對於未知分子質量的物質如蛋白質核酸的測定很有用,這種情況下溶液中物質的含量以其質量表示而不用摩爾濃度表示.使用公式Log10(Io/I)=εl[C]時,比吸光率要除以10才可以得到一個以g/L為單位的濃度值.
這種簡單的方法不能用於測定混合樣品.在這種情況下,也許可以通過測量幾個波長下的吸光度來估算每種成分的含量,如可用此方法在核酸存在下進行蛋白質含量的估算.
分光光度計的使用方法:
(1)接通電源;(2)使用前預熱15min;(3)選擇波長;(4)選擇檢測器;(5)如果可能的話,選擇正確的縫寬;(6)插入適當的空白對照;(7)調解到0%的透過率;(8)將吸光值調到零;(9)分析樣品;(10)每測量10個樣品後,用空白對照校驗零刻度;(11)檢測儀器的可重復性.

⑥ 分光光度計如何測量樣品急急急急急急

分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液,不能有沉澱,如果有沉澱的話就要搖勻。之於為什麼這樣做和可以做哪些測量、如何測量,下面詳述:
分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區,(2)400~760nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式: 1 A=log — =ECL T 式中 A 為吸收度; T 為透光率; E 為吸收系數,採用的表示方法是(E1% 1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1%(g/ml),液層厚度為1cm的數值; C 為100ml溶液中所含被測物質的重量,g(按乾燥品或無水物計算); L 為液層厚度 ,cm。 物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數後,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身並沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色後再測定,故又稱比色分析。由於顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標准品或對照品同時操作。
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計的簡單原理
分光光度計計採用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品後,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD 的吸光值分別相當於50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試後的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾後測試空白液和樣品液。然而,實驗並非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。
事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的准確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的准確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大於0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。最後是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能採用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用於評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大於1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低於1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大於2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。
蛋白質的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然後直接測試蛋白質。由於緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的「背景」信息,設定此功能「開」。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大於0.1A,最佳的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發現讀數「漂移」。這是一個正常的現象。事實上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%,表明結果非常穩定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數,只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對於比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
Lowry 法:以最早期的Biuret 反應為基礎,並有所改進。蛋白質與Cu2 反應,產生藍色的反應物。但是與Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時間較長;容易受到非蛋白物質的影響;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物質的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在鹼性溶液里與Cu2 反應產生Cu ,後者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系極強,反應後形成的化合物非常穩定。相對於Lowry法,操作簡單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。
Bradford 法:這種方法的原理是蛋白質與考馬斯亮蘭結合反應,產生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特點是,敏感度好,是Lowry 和BCA 兩種測試方法的2 倍;操作更簡單,速度更快;只需要一種反應試劑;化合物可以穩定1小時,方便結果;而且與一系列干擾Lowry,BCA 反應的還原劑(如DTT,巰基乙醇)相容。但是對於去污劑依然是敏感的。最主要的缺點是不同的標准品會導致同一樣品的結果差異較大,無可比性。
某些初次接觸比色法測定的研究者可能為各種比色法測出的結果並不一致,感到迷惑,究竟該相信哪種方法?由於各種方法反應的基團以及顯色基團不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如:Keller等測試人奶中的蛋白,結果Lowry,BCA 測出的濃度明顯高於Bradford,差異顯著。即使是測定同一樣品,同一種比色法選擇的標准樣品不一致,測試後的濃度也不一致。如用Lowry測試細胞勻漿中的蛋白質,以BSA作標准品,濃度1.34mg/ml,以a球蛋白作標准品,濃度2.64mg/ml。因此,在選擇比色法之前,最好是參照要測試的樣本的化學構成,尋找化學構成類似的標准蛋白作標准品。另外,比色法定量蛋白質,經常出現的問題是樣品的吸光值太低,導致測出的樣品濃度與實際的濃度差距較大。關鍵問題是,反應後1011分光光度計的重要配件—— 比色杯的顏色是有一定的半衰期,所以每種比色法都列出了反應測試時間,所有的樣品(包括標准樣品),都必須在此時間內測試。時間過長,得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應溫度、溶液PH值等都是影響實驗的重要原因。此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材質的比色杯,因為反應後的顏色會讓石英或者玻璃著色,導致樣品吸光值不準確。
細菌細胞密度(OD 600)
實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要採用分光光度計准確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標准方法。以未加菌液的培養液作為空白液,之後定量培養後的含菌培養液。為了保證正確操作,必須針對每種微生物和每台儀器用顯微鏡進行細胞計數,做出校正曲線。實驗中偶爾會出現菌液的OD值出現負值,原因是採用了顯色的培養基,即細菌培養一段時間後,與培養基反應,發生變色反應。另外,需要注意的是,測試的樣品不能離心,保持細菌懸浮狀態。
分光光度計的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均採用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須採用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用於在紫外范圍內測試樣品。
由於另外測試的樣品量不同,所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。目前市場已經存在一種既可用於核酸、紫外蛋白質定量,亦可用於蛋白比色法測定的塑料杯,樣品用量僅需50μl,比色杯單個無菌包裝,可以回收樣品。如Eppendorf UVette®塑料比色杯,是目前比色杯市場上一個革新。隨著生命科學以及相關學科發展,對此類科學的實驗研究提出更高的要求,分光光度計將是分子生物學實驗室不可缺少的儀器,也成為微生物、食品、制葯等相關實驗室的必備設備之一。
隨著科技的發展,現在比色杯已經不是使用分光光度計時的必備物品。目前國外Nanodrop公司(現已被Thermo Fisher公司收購)生產的ND1000分光光度計與舊式分光光度計相比,已經可以做到無需稀釋樣品,無需使用比色杯,每次測量僅需1-2μl樣品即可完成測量。

⑦ 分光光度計的工作原理

分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。該儀器是食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認證的必備檢驗設備。 QS認證專用指定分光光度計 而分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區,(2)400~760nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式: A=-log(I/I。)=-lgT=kLc 式中:A 為吸收度; I。為入射的單色光強度; I 為透射的單色光強度; T 為物質的透射比; k 為吸收系數; L 為被分析物質的光程 c 為物質的濃度 物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數後,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身並沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色後再測定,故又稱比色分析。由於顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標准品或對照品同時操作。 分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。 分光光度計的簡單原理 分光光度計計採用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品後,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

⑧ 分光的介紹

分光,利用色散現象可以將波長范圍很寬的復合光分散開來,成為許多波長范圍狹小的「單色光」,這種作用稱為「分光」spectrometer 。分光的裝置即成為分光計。

⑨ 如何設計原子吸收分光光度計的實驗室

氣瓶室和原吸室要分開最好是在兩個房間,氣瓶都要有專用的壓力表
原吸室與其他分析儀器要隔離,要在原吸上放加個排氣裝置
原吸室里裝個空調和除濕機(南方)或者增濕機(北方)保持溫濕度的恆定
要有穩定的電源保障,尤其是對石墨爐用電的保障
還要有空壓機保證助燃氣。 分析測試網路網樂意為你解答實驗中碰到的各種問題,基本上問題都能得到解答,有問題可去那提問,網路上搜下就有。

我也沒接觸過設計,只是把看到的寫了下,希望有用。

還要加個報警器。

⑩ 分光光度計的工作原理

分光光度計的基本工作原理是基於物質對光(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質都有各自的吸收光帶。

所以,當光色散後的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下,溶液中物質的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關系,即符合比爾定律。

T = I/Io lg(Io/I)=εcb

式中,T為透過率,Io為入射光強度,I為透射光強度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數,b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當入射光、吸收系數和溶液厚度一定時,透光率是根據溶液的濃度而變化的。

分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

注意事項:

1、該儀器應放在乾燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的工作台上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲發亮不穩定。

2、使用本儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對儀器的安全性能進行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然後再按通電源開關。

3、在儀器尚未接通電源時,電表指針必須於「0」刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進行調節。

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