半自動固相萃取裝置控制流速

1. 固相萃取儀裝置操作規程有哪些

您好，北京德世科技有限公司（www.cnpetjy.com）為您答疑解惑：
固相萃取儀裝置︰具有免溶劑、快速、萃取簡單、可現場攜帶采樣之儀器。可應用在非常多的領域;如葯物分析、食品分析、環境污染分析(VOC、PAH、PCB、有機氯、有機磷殺蟲劑)等等。

一、安裝程序

(A) 先將Holder下方黑色保護套管轉松拆開，再將不綉鋼金屬蓋轉松拆下。

注意:不綉鋼金屬蓋有時會已松離Holder而卡在黑色保護套管，此時請將黑色保護套管再套回Holder轉緊後再松開，不綉鋼金屬蓋會回卡在Holder外牙上，再將它拆下，離開Holder。

(B) 將Holder推桿推至下端，此時有黑色圓棒禿出來(內有牙紋) 。

(C) 取出要用之Fiber，以Fiber上頭外牙紋和Holder微禿出黑色圓棒內牙紋平順鎖上後，推桿小心拉回最上端，再將

剛拆下之不綉鋼金屬蓋及黑色保護套管依序小心套上鎖緊，即完成裝置。

(D) 小心試著將Holder推桿推至中端卡點處卡住，此時Coated Fiber已從保護針頭內禿出來，可上下調整黑色保護套

管及查看Holder上刻度，略估保護針頭加上Coated Fiber所伸出的長度，以配合實驗所需。

注意: Fiber裝好後，此時勿將推桿推至最下端，會壓壞Fiber之彈簧。

(E) SPME要插入樣品瓶(袋)之隔塞取樣或插入GC注射器之隔塞熱脫附時，先將保護針頭插入隔塞後，再將推桿推

至中端卡住，禿出Coated Fiber。

(F) SPME從樣品瓶(袋)隔塞取樣或從GC注射器之隔塞取出時，則先收回Coated Fiber至保護針頭，再取出保護針頭。

注意:因保護針頭是平頭針，所以新的隔塞片先以干凈細針插一下以便保護針頭較容易插入。GC Injection Liner(Sleeve)請改用SPME用Liner這樣Coated Fiber較不會碰斷。

(G) 若要從Holder拆下Fiber，先將Holder推桿拉回最上端，讓Coated Fiber收回至保護針頭內，把Holder下方黑色保護套

管轉松和不綉鋼金屬蓋拆下，再將Holder推桿推至下端，讓黑色圓棒禿出來，轉松Fiber上頭鎖牙即可。

固相微萃取裝置主要部分是一個手柄加一個固相微萃取頭即可進行工作，是最簡單的配置。最好還需要恆溫，磁力攪拌的裝置等。也可以使用全自動SPME進樣器，方便好用，就是價格太貴。

二、組成

SPME由手柄(Holder)和萃取頭(Fiber)兩部分構成，

壯似一支色譜注射器，萃取頭是一根塗不同色譜固定相或吸附劑的熔融石英纖維，接不銹鋼絲，外套細的不銹鋼針管(保護石英纖維不被折斷及進樣)，纖維頭可在針管內伸縮，手柄用於按裝萃取頭，可永久使用。

三、SPME操作步驟

樣品萃取

1. 將SPME針管穿透樣品瓶隔墊，插入瓶中。

2. 推手柄桿使纖維頭伸出針管，纖維頭可以浸入水溶液中(浸入方式)或置於樣品上部空間(頂空方式)，萃取時間大約2-30分鍾。

3. 縮回纖維頭，然後將針管退出樣品瓶

GC分析

1.將SPME針管插入GC儀進樣口。

2.推手柄桿，伸出纖維頭，熱脫附樣品進色譜柱。

3.縮回纖維頭，移去針管。

原理：

固相微萃取(Solid Phase Micro-Extraction,
SPME)是用一根表層塗有特異性塗層，如聚二甲基硅氧烷(Polydimethylsiloxane
)的石英纖維來吸附植物或昆蟲頂空中的揮發性化合物。可以根據要提取的揮發物的性質選擇不同的塗層。在提取過程中，石英纖維被手柄推出保護針套，處於擇發物之中，揮發物被吸附到纖維塗層上，然後將石英纖維直接注入氣相色譜的進樣口，吸附在其表層的揮發物在瞬時高溫條件下快速解吸附，進入色譜柱分離。SPME可以在自然或半自然狀態下對活體生物進行連續取樣，是目前分析鑒定少量揮發性化合物最精確的方法。此方法最大優點是只需少量的樣品材料，並且不需要凈化的中間步驟，因而無溶劑干擾。同時該法能基本反映昆蟲在田間尋食過程中利用的信息化合物種類和濃度。缺點是收集的信息化合物量少，只能用於化學分析，不足以用來進行生物測定。

2. 如何選擇購買合適的固相萃取裝置

看你是做什麼抄樣品，如果是十幾毫升的小體積樣品，如食品、農產品，應該選用柱式的SPE（固相萃取儀）；如果你是1L以上做大體積樣品，如水樣，就需要盤式SPE，因為盤式的SPE流速比柱式的快10倍左右，這樣才能不至於做樣品過長，影響效率

3. 哪些因素會影響固相萃取

固相萃取（SolidPhaseExtraction，SPE）技術基於液相色譜原理，可近似看作一個簡單的色譜過程。原理是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然後再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集目標化合物的目的[7]。固相萃取可分為在線萃取和離線萃取。前者萃取與色譜分析同步完成，而後者萃取與色譜分析分步完成，兩者在原理上是一致的。
固相萃取的影響因素如下：
1、吸附劑：目前常用的吸附劑有正、反相吸附劑、離子交換吸附劑和抗體鍵合吸附劑等，試驗時盡量選擇與目標化合物極性相似的吸附劑，其用量大小與目標物性質（極性、揮發性）及其在水樣中的濃度直接相關。
2、洗脫溶劑：在SPE中，洗脫溶劑的選擇與目標物性質及使用的吸附劑有關，應根據常見有機溶劑的極性和洗脫強度，試驗過程中可根劇被測物的物理、化學性質選用。洗脫劑體積應以淋洗完全為前提，體積最小的為最佳，可通過多次洗脫法（小體積），根據回收率的變化曲線找到最佳的洗脫液體積，顯然，洗脫體積越小富集倍數越高。
3、保留體積：在加樣過程中，保留體積是SPE技術的關鍵因素之一，它代表了進行痕量富集時能有效處理的水樣體積。根據色譜分析儀的最小檢出量和水樣中有機物的濃度，可以估算出欲富集的最小水樣體積。另外，樣液的pH值也影響樣品的吸附效率。
4、流速：流速的控制對SPE至關重要，流速過大將引起SPE柱的穿漏，流速太小則處理速度太慢。柱預處理過程中流速適中，保證溶液充分濕潤吸附劑即可，上樣和洗脫過程則要求流速盡量慢些，以使分析物盡量保留在柱內或達到完全洗脫，否則會導致分析物流失，影響回收率的大小。尤其離子交換過程，進行比較緩慢，應採用較低的流速（0.5~2.0mL/min）。

4. 蜂蜜中磺胺類葯物的檢測-高效液相色譜法

轉載：《分析測試網路網》樓主可以參考一下。
5種磺胺類葯物殘留的高效液相色譜法

5種磺胺類葯物殘留的高效液相色譜法

點擊次數：89 發布時間：2010-10-26 8:56:32

(1)試劑和材料 除特別註明外，所用試劑均為分析純；水為超純水。
①磺胺類葯物對照晶(SMM、SDM、SMz、SMZ和SQ)
②甲醇 色譜純
③乙腈 色譜純
④正己烷
⑤正丙醇
⑥無水硫酸鈉
⑦鹼性氧化鋁SPE柱 每根柱填料量為28
⑧磺胺類葯物貯備液(1mg／mi) 分別取上述磺胺類葯物對照晶各約50mg，精密稱定，置同一50ml量瓶，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期3個月。
⑨磺胺類葯物工作液(5Ps／mi) 精密量取磺胺類葯物貯備液o．5ml，置100ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期1個月。
⑩磺胺類葯物對照溶液 取磺胺類葯物工作液用流動相稀釋成濃度為o．02gg／ml、0．05Pe／mI、0．1P8／ml、0．2Pg／m1、0．5Pz／ml、1．0鵬／ml的系列對照溶液。置2—8~C冰箱中保存，有效期I周。
(2)儀器和設備
①高效液相色譜儀
②離心機
③固相萃取裝置(配考克閥
④分析天平 精度0．0001g
⑤天平 精度0.0lg
⑥旋轉蒸發儀
⑦振盪器
⑧勻漿機
⑨渦動混合器
⑩分液漏斗 50ml
@梨形瓶 lOOml
⑩離心管50ml
⑩微孔濾膜 0．45um
(3)測定步驟
① 提取和凈化 稱取組織樣品5g(精確到0．1g)，加入乙腈25ml，無水硫酸鈉4g，以10000r／min以上的速度均質lmin後，以3000r／ITIIB的速度離心5min。分離後的殘渣再用25ml乙腈處理，振盪10min後，以3000r／min的速度離心5min。合並兩次的上清液，加入正己烷 30ml，振盪l0min，靜置分層後，取下層液體，加10mi正丙醇；500c下減壓乾燥，殘留物用95％乙腈共4m1分兩次溶解，過Sep—Pek氧化鋁B柱。用95％乙腈5ml過柱，不收集，真空抽干(整個過程式控制制鹼性氧化鋁SPE柱流速在l～2ml／min)。再用70％乙腈l0ml洗脫後，洗脫液中加入5ml正丙醇，500c下減壓乾燥後，殘留物用2．0mi流動相溶解，用o．45um濾膜過濾，轉移至進樣小瓶中，待測。
②測定
a色譜條件
色譜柱：Cis柱，g50mmX4．6mm(內徑)，粒徑5um或相當者
流動相：乙腈—甲醇—水—乙酸(2+2+9+0．2)
流速；lml／mill
檢測波長：270nm
進樣量：20uL
b．測定 根據樣液中磺胺類葯物含量情況，選定峰面積相近的標准溶液。溶液及試樣溶液中磺胺類葯物的響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內，試樣溶液測定過程中應參插注入對照溶液，以便准確定量。
③空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
(4)靈敏度和回收率
本方法的檢測限為50ug／kg。
在100ug／kg添加濃度水平上，回收率范圍為50％一110％

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5. 苯並(a)芘的高效液相色譜法測定

方法提要

利用正己烷-液-液萃取、固相萃取C₁₈柱-二氯甲烷淋洗等提取水樣中苯並［a］芘，提取液經硅膠柱凈化、濃縮、定容後，高效液相色譜-紫外-熒光檢測器串聯分離檢測，外標法定量。

方法適用於地下水、地表水、飲用水及污水等水樣中苯並［a］芘的分析，其中固相萃取適用於潔凈水分析。方法檢出限隨儀器靈敏度和樣品基質而定。當取樣量為1.0L潔凈水時，本方法檢出限為0.50ng/L。

儀器與裝置

高效液相色譜儀帶紫外檢測器和熒光檢測器。

固相萃取裝置。

旋轉蒸發儀。

恆溫水浴氮吹儀。

振盪器。

帶聚四氟乙烯活塞的1L分液漏斗。

固相萃取C₁₈柱1000mg，6mL。

硅膠凈化柱1000mg，6mL。

分析柱WastersPAHsC₁₈液相色譜專用柱，250mm×4.6mm，粒徑5μm;或性質相似的液相色譜柱，250mm×4.6mm，粒徑5μm。

離心機。

試劑與材料

無水硫酸鈉、氯化鈉優級純，在600℃高溫爐中灼燒4h放置在乾燥器中備用。

正己烷、二氯甲烷、丙酮等均為農殘級。

甲醇HPLC級。

替代物標准p-三聯苯稱取固體三聯苯替代物標准，以甲醇溶液溶解、定容，並用甲醇逐級稀釋為10.0μg/mL儲備液。替代物標准1-氟萘100.0μg/mL，有證標准物質。替代物標准均在-18℃下保存備用。

標准儲備溶液苯並［a］芘，-18℃下避光保存，購自國家標准物質中心。

1L棕色樣品瓶。

針頭過濾器及注射器針頭過濾器型號孔徑0.45μm，直徑4mm，聚四氟乙烯濾膜。

樣品採集與保存

采樣前不能用水樣預洗采樣瓶，採集時樣品要充滿整個樣品瓶，不留氣泡。樣品采滿後迅速放置在低溫冷藏箱中並盡快送實驗室檢測，到達實驗室後樣品應盡快轉移至4℃冷藏設備中保存。7d天內完成樣品提取、40d內完成檢測。苯並(a)芘對光敏感。在樣品採集、運輸、儲存以及分析全過程應盡可能避光操作，防止光解。

分析步驟

1)試樣提取。

a.液-液萃取。將1.0L水樣倒入預先加有30gNaCl的1L分液漏斗中，待NaCl溶解後加入50mL正己烷、5μL10.0μg/mL的p-三聯苯替代物標准溶液;並用20mL丙酮淋洗樣品瓶，淋洗液轉入分液漏斗，振盪5min。靜置10～20min，將水相轉移至原樣品瓶，正己烷相轉入150mL平底燒瓶中。原樣品再進行第二次萃取，萃取方法同第一次，正己烷量減少為30mL。合並正己烷相，並加入3g無水硫酸鈉，稍稍搖動，觀察有無結塊現象，如有結塊，需補加無水硫酸鈉至沙狀，繼續放置20min，之後過濾至另一150mL平底燒瓶中，濾液旋轉蒸發濃縮至約3mL。如果是潔凈地下水，樣品可以不凈化，直接轉移至KD濃縮瓶中，氮氣吹掃至0.3mL，加入甲醇0.5mL，氮氣吹掃至0.3mL，再加甲醇0.50mL，氮氣吹掃至0.3mL，最後甲醇定容1.0mL，0.45μm濾膜過濾，HPLC測定。如污染較重，則需凈化。凈化方法見2)樣品凈化。

b.固相萃取(適用於潔凈水樣)。將固相萃取C₁₈柱(1000mg，6mL)，安放在固相萃取裝置上，用10mL二氯甲烷淋洗C₁₈柱，再用10mL甲醇分兩次淋洗C₁₈柱(第二次甲醇浸泡5min)，最後用10mL空白水分兩次淋洗，等待上樣。在活化過程中不要讓柱子流干。在要富集的1.0L水樣中加入5g氯化鈉、40ng替代物標准p-三聯苯、30mL甲醇等混勻後樣品以5mL/min的流速流過已活化的C₁₈柱。樣品流完後真空乾燥3min後取下C₁₈柱，以3000r/min離心10min除水。除水後的C₁₈柱安裝回固相萃取裝置，用5mL二氯甲烷浸泡C₁₈柱5min後自然流下，收集洗脫液。用4mL二氯甲烷洗滌樣品瓶並與樣品洗脫液合並。洗脫液中加入1g無水Na₂SO₄，振搖後放置15min，用滴管將洗脫液轉移至25mLKD濃縮瓶中，用2mL二氯甲烷洗滌Na₂SO₄相後並入KD濃縮瓶，加入0.5mL甲醇，氮氣吹掃至0.5mL，再入甲醇1.0mL，氮氣吹掃到0.5mL，最後甲醇定容至1.0mL，過濾HPLC測定。

2)試樣凈化。凈化硅膠柱預先用10mL10%丙酮-正己烷溶液、10mL正己烷活化後，待正己烷接近硅膠頂層時迅速將待凈化樣品提取液轉入柱中，先用5mL正己烷淋洗，棄之，再用25mL正己烷-二氯甲烷(1+1)混合溶液淋洗，淋洗液用KD濃縮瓶承接，氮氣濃縮，甲醇換相、最後定容至1.0mL，過濾HPLC測定。

3)校準曲線。用甲醇分別稀釋1.93μg/mL苯並［a］芘二級標准溶液，配製成0ng/mL、1.93ng/mL、9.65ng/mL、19.3ng/mL、28.9ng/mL、38.6ng/mL標准系列，每個標准系列點加入4μL的10.0μg/mL三聯苯替代物標准溶液。通過濃度與對應峰面積建立標准曲線。

4)高效液相色譜分析條件。流動相為甲醇溶液，流速1.2mL/min(恆流方式)，柱溫40℃。紫外檢測器(UV):波長254nm。熒光檢測器(FLD):0～6min，激發波長(Ex)250nm，發射波長(Em)370nm;6～15min，激發波長294nm，發射波長430nm.。

5)定性及定量分析。

a.定性分析。採用試樣中待測目標物保留時間與標准目標物保留時間相比較的方式進行定性分析。檢測方法採用熒光和紫外串聯檢測的方式。特別當有干擾存在時，應仔細分析熒光和紫外色譜圖排除干擾。如果試樣中待測目標物含量達到方法檢出限5倍以上，需GC-MS確證。

b.定量分析。採用熒光和紫外串聯檢測的方式進行定量分析。以熒光檢測定量為主，對有干擾存在應結合紫外檢測情況綜合確定。外標法定量。再根據試樣測定濃度、稱樣量計算出試樣中濃度。目標化合物峰面積和定量校準曲線可以由高效液相色譜儀工作站自動完成，定量校準曲線也可由EXCEL工作軟體完成。對自動積分的峰面積應逐一檢查各峰基線，對不合理基線進行必要修正。

對含量接近檢出限水平的試樣，可以採用與其濃度相近的標准單點校正。對於含量超過校準曲線上限的試樣應稀釋或減小取樣量，使其峰面積保持在校準曲線的線性范圍內，重新測定。

6)方法性能指標。分別配製質量濃度為19.3ng/L的苯並［a］芘、40ng/L三聯苯的空白加標試液1L，按試樣分析步驟進行分析，獲得方法精密度和加標回收率分別為2.07%和81.1%～93.0%(n=6)。

上述苯並［a］芘校準曲線的線性方程是y=55947x-5570.5，相關系數R²=0.9999。

將質量為3.86ng的苯並［a］芘標准分別加入到1.0L空白水樣中，餘下同試樣分析，以3倍信噪比對應濃度作為方法檢出限，其方法檢出限為1.00ng/L。

色譜圖的考察(圖82.9):

圖82.9苯並［a］芘標准高效液相色譜圖(熒光檢測)

質量控制

每批試樣或至多20個試樣必須至少進行一個全流程試劑空白、一個平行雙樣和基體加標分析，以監測分析流程中玻璃器皿、試劑、溶劑和其他硬體帶來的干擾和與之相關的試樣分析精度，加標濃度不得低於原始試樣的背景濃度。

當分析超過 8h 或每分析 10 個試樣後，應用標准曲線中等濃度的確證標准檢查儀器的工作狀態，確證標准與最初標准相比偏離大於 20%，需重新測定標准系列; 若偏離仍大於 20%，需重新配製標准曲線和分析試樣。

替代物標准三聯苯 (或 1-氟萘) 回收率: 應為 65%～130%; 若不在限值之內，需要重新檢查並確認計算、替代標物准、儀器是否問題。

注意事項

苯並 (a) 芘是強致癌物，提取液濃縮及凈化過程應在通風櫃中進行，必要時戴防毒面具、手套以減少對人體的危害。

6. 固相萃取柱的固相萃取柱使用

固相萃取柱的使用
最簡單的固相萃取可以通過手工方式完成，即在固相萃取柱上端連接一個注射器，通過對注射器的擠壓將萃取柱內的液體排擠出萃取柱。另外，也可以使用正壓或負壓固相萃取裝置對批量樣品進行固相萃取操作。隨著科技的發展和樣品數量的增多，越來越多的分析實驗室開始使用自動固相萃取儀，特別是多通道固相萃取儀對批量樣品進行處理。

7. 固相萃取手動裝置及操作步驟

琪摩科技公司是一家服務於生物、化工、醫學工程等領域，主要生產氮吹儀 固相萃取 噴霧乾燥機、冷凍乾燥機、超聲波細胞粉碎機、無菌均質器、超聲波清洗機、常規實驗設備等為實驗室提供最好的儀器

8. 固相萃取儀的技術應用及特點

1、精確控速，單道流速0.01~10.85ml/min,支持大體積進樣和正壓洗脫，避免交叉污染；
2、無級數控操作、大屏幕顯示、觸摸屏與按鍵兼容操作，輕觸按鍵、人體工程力學設計；
3、耐腐蝕頂板，機箱磷化和多層環氧樹脂噴塗處理；
4、機箱結構方便維護，配有寶晶科技萃取工作軟體模塊，多種輸出方式，可以選配電腦連接操作；
5、多通道，小柱接頭耐酸、鹼、有機溶劑、氧化劑腐蝕；
6、採用高精度數控技術電機，低耗能、低噪音，控速更精準；
7、數控泵管採用美國原裝長壽命管材；
8、操作簡單，單人操作可同時進行了1~8個樣品的處理，大提高工作效率；
9、萃取速度一致性好、控制調整方便，密封性好，穩定性強；
10、採用人性化設計，每一條通道管路都配有原廠標記，通過標記可以實現直接對接，省時省力。

9. 固相萃取儀的概念及基本原理

SPE技術基於液-固相色譜理論，採用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進行富集、分離、凈化，是一種包括液相和固相人物理萃取過程；也可以將其近似地看作一種簡單的色譜過程。
SPE是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑，保留其中被測物質，再選用適當強度溶劑沖去雜質，然後用少量溶劑迅速洗脫被測物質，從而達到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質，而讓被測物質流出；或同時吸附雜質和被測物質，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質。

10. 固相萃取柱的洗脫率一般在什麼范圍

固相萃取柱的洗脫率看具體情況而定。

固相萃取柱（英文, 簡稱SPE column，或Solid Phase extraction Cartridges，簡稱SPE cartridges）是從層析柱發展而來的一種用於萃取、分離、濃縮的樣品前處理裝置。主要應用於各種食品、農畜產品、環境樣品以及生物樣品中目標化合物的樣品前處理。固相萃取技術已經被廣泛地使用在許多國標（GB/T）以及行業分析標准中。
原理：
SPE技術基於液-固相色譜理論，採用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進行富集、分離、凈化，是一種包括液相和固相物理萃取過程；也可以將其近似地看作一種簡單的色譜過程。SPE是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑，保留其中被測物質，再選用適當強度溶劑沖去雜質，然後用少量溶劑迅速洗脫被測物質，從而達到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質，而讓被測物質流出；或同時吸附雜質和被測物質，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質。