石景山實驗室抽氣裝置

『捌』 如何用faa法染色固定，如何使用抽氣裝置

石蠟切片法——固定與包埋
一、實驗目的

掌握石蠟切片法中固定、透明與包埋的基本操作步驟及要點。

二、實驗材料

黨參、秦艽或其它材的根

三、實驗用具及試劑

福爾馬林-酒精-醋酸混合固定液(簡稱FAA)、各級酒精溶液、二甲苯、石蠟（熔點52～54℃）、恆溫箱、電熱板、解剖針等。

四、實驗內容與步驟

1．取材

取培養在花盆中或用植物園中的黨參根或秦艽根，用水沖去附在其上的木屑或泥土，切成5mm長的小段(亦可用帶側根的部分)。

2．固定

FAA固定液中固定24h以上。

3．脫水

將FAA固定液倒出後，轉入70%酒精中浸泡1h後，再順次轉入83%和95%酒精中各2h，然後轉入純酒精中2～3h（中間換一次)。

4．透明

等量純酒精及二甲苯中2h，二甲苯2h(中間換一次)。

5．透蠟

將已經透明的材料和二甲苯一起倒入包埋用的小杯中，此時可把寫好的標簽投入二甲苯中，然後輕輕倒入溶解的石蠟(熔點為52～54℃)，這樣，石蠟就在二甲苯的上層凝固起來。小杯放在35～37℃的熔蠟爐內，使石蠟徐徐溶解到飽和為止，約需l～2d。

6．包埋

先將小杯移入56～60℃的恆溫箱內(溫度宜較石蠟熔點高3℃)，待石蠟熔化後，倒去含二甲苯的石蠟，換以熔化的純石蠟，以後每隔lh左右換純蠟一次，材料在恆溫箱中的時間視不同材料而異，約為2～5h，共換純蠟2～3次，即可進行包埋。

包埋時，先用道林紙摺成適當大小的紙盒，放在已經加熱的電熱板上。然後右手持解剖執針，左手從溫箱中取出盛滿石蠟的小杯，隨手將溫箱關好，迅速把石蠟連同材料和標簽一起倒入紙盒中，再用烤熱的解剖針輕輕撥動材料使之排列整齊。如發現材料附近有石蠟的凝塊，則需用熱針熔去，同時使標簽上有字的一面朝外，以便識別。稍停，待盒中石蠟凝到不致動搖材料時，就將紙盒輕輕放入冷水中使它迅速凝固。半h後，即可取出貯藏備用。

五、實驗注意事項

1．在材料選擇和切割時應注意下列問題：

（1）選取新鮮、無病蟲害並具代表性的材料；

（2）先作徒手切片或剝離檢查，決定適宜的材料，立即固定；

（3）注意按季節和植物生長發育不同階段取材；

（4）材料大小要適當。

2．固定時應注意的問題：

（1）標簽的填寫

必須將標簽紙貼於標本瓶上，並寫上以下內容：編號、採集時間、地點、處理者姓名。另外，在實驗記錄本上表明編號的詳細情況：何種植物的何種器官，是橫切還是縱切，用的是何種固定液等等。

（2）固定液的選擇

根據所用材料的不同，選擇不同的固定液。一般，各種器官，不論是根、莖、葉，還是花和果實，其組織切片均用FAA固定液，而根尖、莖尖、花等材料的壓片（非切片法）用卡諾固定液。

（3）材料體積的影響

對於微小材料可直接投入固定液，對於較大材料，則須將其先解剖成較小材料，再迅速投入固定液。若材料外部超過固定液上線，達不到固定作用時，應須立即放入滲透力很強的固定液中，如醋酸酒精溶液；或利用超聲波發生器處理數min。

（4）多毛芽或根莖的固定

對多毛的芽或根莖固定時，須先投入滲透能力很強的醋酸酒精溶液中數分鍾，然後再投入其它固定液中固定。必要時配合抽氣裝置，其意義在於使固定液盡快滲入材料內部，並排除材料內氣泡的干擾。

3．脫水時的注意事項

（1）脫水從低濃度開始逐漸替換高濃度酒精，否則發生細胞收縮。

（2）從同濃度（保存液中）酒精開始。例FAA從70%或50%酒精開始。注意要加蓋，各級酒精停留時間因材料而定。

4．透明時的注意事項

（1）使用時材料必須脫盡水分，否則發生乳狀混濁。
（2）要避免材料收縮