『壹』 水平式電泳和垂直式電泳有什麼差別
水平式電泳和垂直式電泳區別為:方向不同、支持物不同、分離效果不同。
一、方向不同
1、水平式電泳:水平式電泳是在水平方向放置的凝膠平板中進行的電泳。
2、垂直式電泳:垂直式電泳是在垂直方向放置的凝膠平板中進行的電泳。
二、支持物不同
1、水平式電泳:水平式電泳用瓊脂糖凝膠作支持物。
2、垂直式電泳:垂直式電泳用聚丙烯醯胺凝膠作支持物。
三、分離效果不同
1、水平式電泳:水平式電泳橫截面積比垂直式電泳大,因此單位橫截面積的電量強度更低,分離效果更差。
2、垂直式電泳:垂直式電泳橫截面積比水平式電泳小,因此單位橫截面積的電量強度更高,分離效果更好。
『貳』 PCR實驗室主要儀器設備和耗材清單
PCR實驗室可分為樣品制備、核酸擴散、產物分析3大區域,每個區域所用的設備不同,下面就給大家詳細介紹一下PCR實驗室每個區域都需要什麼設備?
樣品制備區:
生物安全櫃 :防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散
樣本低溫冰箱:零下20攝氏度,-80℃ 保存樣本及DNA
高速台式冷凍離心機:收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉澱物。 有些樣品由於在常溫下不太穩定,需要低溫環境
水浴鍋或者金屬浴:用於DNA雜交過程中水浴控溫
移液器:准確量取特定體積溶液
紫外燈或者消毒車:空間環境消毒
混勻儀:移取樣本前需要混勻
超凈工作台:涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成
低溫搖床:用於大腸桿菌和酵母菌的振盪培養
磁力攪拌器:加速溶解固體內容物
核酸擴散區:
基因擴增儀:基因檢測DNA/RNA擴增
熒光定量PCR儀:核酸定量分析
核酸提取儀:樣品DNA/RNA提取
移液器:准確量取特定體積溶液
紫外燈或者消毒車:空間環境消毒
超凈工作台:涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成
純水裝置:用於PCR,DNA測序需要超純水
產物分析區:
電泳儀:水平電泳用於核酸DNA/RNA檢測,垂直電泳用於蛋白檢測,轉印電泳用於將蛋白轉移到膜上做weatern檢測
凝膠成像系統/紫外檢測儀:用於核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙醯胺的觀察和拍照;紫外分析儀用於染色後核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦
電爐:電泳瓊脂凝膠加熱融化
『叄』 蛋白垂直電泳槽、轉移電泳槽、電泳儀電源、電子天平、勻漿器、體式顯微鏡、酶標儀是否屬於醫療器械
都不是。
醫療器械參考下面網站
http://www.sda.gov.cn/gyx02302/flml.htm
醫療器械在網路的定義
醫療器械,是指單獨或者組合使用於人體(!!!)的儀器、設備、器具、材料或者其他物品,包括所需要的軟體;其用於人體體表及體內的作用不是用葯理學、免疫學或者代謝的手段獲得,但是可能有這些手段參與並起一定的輔助作用;其使用旨在達到下列預期目的:(一)對疾病的預防、診斷、治療、監護、緩解;(二)對損傷或者殘疾的診斷、治療、監護、緩解、補償;(三)對解剖或者生理過程的研究、替代、調節;(四)妊娠控制。
規定這東西,只有規定什麼什麼是什麼,哪有規定什麼什麼不是什麼。
你說的東西,一般分子實驗室應該有。
比方說針筒,我們實驗室也有,但不是醫療器械,它沒扎在人身上。
比方說,生產胰島素的設備,生產的是葯物,但它不是醫療器械。注射胰島素的那隻筆才算醫療器械。
『肆』 試說明水平電泳槽與你在生化實驗中所用的垂直電泳槽有何區別
水平電泳槽和垂直電泳槽的原理是一樣的。垂直電泳槽具有的特點:比如要做不同層的膠(濃縮膠分離膠)可以等一個先凝了之後,再灌第二個,這種情況水平電泳槽滿足不了的。分子實驗,實際上核酸既可以跑瓊脂糖也可以跑PAGE。
『伍』 電泳槽與電泳儀之間有什麼區別嗎
電泳槽是復凝膠電泳系統的核心制部分,其系統的迅猛發展主要也是體現在電泳槽上。根據電泳的原理,凝膠都是放在兩個緩沖腔之間,電場通過凝膠連接兩個緩沖腔。緩沖液和凝膠之問的接觸可以是直接的液體接觸,也可以間接通過凝膠條或濾紙條。管狀凝膠電泳和垂直板狀電泳大多採取直接液體接觸方式。這種方式可以有效地使用電場,但在裝置設計上有一些困難,如液體泄漏,電安全和操作麻煩等問題。水平板狀電泳槽大多通過間接方式,用濾紙橋搭接。 電泳槽和電泳儀合用才能進行電泳實驗。電泳槽是用來制備凝膠,進行電泳的主要場所。電泳儀主要是用來提供電流,產生電場力帶動分子運動的。電泳槽是裝(塗料)容器,電泳的工作儀器。電泳儀是提供(電泳)電壓的設備。
『陸』 凝膠電泳的實驗原理
凝膠電泳(英語:Gel electrophoresis)或稱膠體電泳 是一大類技術,被科學工作者用於分離不同物理性質(如大小、形狀、等電點等)的分子。凝膠電泳通常用於分析用途,但也可以作為制備技術,在採用某些方法(如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡)檢測之前部分提純分子。 該技術操作簡便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心法)所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳後的凝膠中回收特定的DNA條帶,用於以後的克隆技術操作。
凝膠電泳被廣泛用於分子生物學、遺傳學和生物化學:
1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳(agarose gel electrophoresis)分離,也可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)。
2.蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯醯胺凝膠中進行(SDS-PAGE),或者非變性凝膠電泳,或二維電泳。
3.毛細管電泳
4.酶譜法(zymography)
5.變性梯度膠凝電泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)
瓊脂糖和聚丙烯醯胺可以製成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恆定的電場下電泳。聚丙烯醯胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯醯胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯醯胺凝膠採用垂直裝置進行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進行DNA電泳。
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:
1、 DNA的分子大小:
線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難於在凝膠孔隙中蠕行,因而遷移得越慢。
2、 瓊脂糖濃度
一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。分離小於0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大於10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間於兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
3、 DNA分子的構象
DNA分子處於不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而開環雙鏈DNA移動最慢。如在電泳鑒定質粒純度時發現凝膠上有數條DNA帶難以確定是質粒DNA不同構象引起還是因為含有其他DNA引起時,可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個回收,用同一種限制性內切酶分別水解,然後電泳,如在凝膠上出現相同的DNA圖譜,則為同一種DNA。
4、 電源電壓
在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大於2kb的DNA片段姆直媛蝕鐧階畲?所加電壓不得超過5V/cm。
5、嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用於檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的鹼基對之間並拉長線狀和帶缺口的環狀DNA,使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15%。
6、 離子強度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配製凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高並明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。
對於天然的雙鏈DNA,常用的幾種電泳緩沖液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配製成濃縮母液,儲於室溫。
『柒』 如何做好聚丙烯醯胺凝膠垂直板電泳,那些是關鍵步驟
我做實驗的時候,最主要是把凝膠制備好。需要注意的有:1、密封條要封好,不能漏水;2、灌膠時用移液管,可以慢一點,並水平移動,防止凝膠不均勻,凝膠不會很快凝固,所以不用擔心;3、灌膠時不能有氣泡產生,否則會影響後面凝膠的效果。
『捌』 電泳槽和電泳儀的區別
電泳槽是凝膠電泳系統的核心部分,其系統的迅猛發展主要也是體現在電泳槽上。根據電泳的原理,凝膠都是放在兩個緩沖腔之間,電場通過凝膠連接兩個緩沖腔。緩沖液和凝膠之問的接觸可以是直接的液體接觸,也可以間接通過凝膠條或濾紙條。管狀凝膠電泳和垂直板狀電泳大多採取直接液體接觸方式。這種方式可以有效地使用電場,但在裝置設計上有一些困難,如液體泄漏,電安全和操作麻煩等問題。水平板狀電泳槽大多通過間接方式,用濾紙橋搭接。
電泳槽和電泳儀合用才能進行電泳實驗。電泳槽是用來制備凝膠,進行電泳的主要場所。電泳儀主要是用來提供電流,產生電場力帶動分子運動的。電泳槽是裝(塗料)容器,電泳的工作儀器。電泳儀是提供(電泳)電壓的設備。
『玖』 垂直式蛋白質電泳的操作步驟
實驗試劑和器材
1.材料: 低分子量標准蛋白試劑盒: 低分子量標准蛋白: 兔磷酸化酶B
MW=97,400
牛血清白蛋白
MW=66,200
兔肌動蛋白
MW=43,000
牛碳酸酐酶
MW=31,000
胰蛋白酶抑制劑
MW=20,100
雞蛋清溶菌酶
MW=14,400
開封後溶於200µl蒸餾水,置-20℃保存,使用前室溫融化,沸水浴中加熱3-5分鍾後上樣。 樣品1:稱3mg樣品1,加2 ml蒸餾水溶解。
2.實驗試劑
(1) 30%丙烯醯胺(Acr):稱Acr30g,甲叉雙丙烯醯胺
(Bis)0.8g,加蒸餾水至100ml,過濾後置棕色瓶中,
4℃貯存可用1-2月。
(2)10%SDS(十二烷基磺酸鈉)
(3)1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl緩沖液:稱取Tris18.2g,
加入50ml水,用1mol/L鹽酸調pH8.8, 最後用蒸餾水定容至100ml。
(4)1.0mol/LpH6.8Tris-HCl緩沖液:稱取Tris12.1g,加
入50ml水,用1mol/L鹽酸調pH6.8, 最後用蒸餾水定容至100ml。
(5)0.05mol/LpH8.0Tris-HCl緩沖液:稱取Tris0.6g,加 入50ml水,用1mol/L鹽酸調pH8.0,最後用蒸餾水定容至100ml。
(7)10%過硫酸銨(AP)
(8)TEMED(四甲基乙二胺)
(9)樣品溶解液:SDS(100mg)+巰基乙醇(0.1ml)+
溴酚藍(2mg)+甘油(2g) +0.05mol/L pH8.0Tris-HCl(2ml),最後定容至10ml。
(10)固定液:取50%甲醇454ml,冰乙酸46ml混勻。
(11)染色液:稱取考馬斯亮藍R250 0.125g,加上述固定液 250ml,過濾後備用。
(12)脫色液:冰乙酸75ml,甲醇50ml,加蒸餾水定容至1000ml。
(13)電極緩沖液(內含0.1%SDS,0.05mol/LTris- 0.384mol/L甘氨酸緩沖液pH8.3):稱Tris6.0g,甘 氨酸28.8g,加入SDS1g,加蒸餾水使其溶解後定容至1000ml。
實驗過程
1.將玻璃板用蒸餾水洗凈晾乾, 准備2個干凈的錐形瓶.
2.把玻璃板在灌膠支架上固定好.※固定玻璃板時,兩邊用力一定要均勻,防止夾壞玻璃板.
3.按比例配好分離膠,用移液管快速加入,大約5厘米左右,之後加少許蒸餾水,靜置40分鍾.※凝膠配製過程要迅速, 催化劑TEMED要在注膠前再加入,否則凝結無法注膠.注膠過程最好一次性完成,避免產生氣泡.
※水封的目的是為了使分離膠上延平直,並排除氣泡 ※凝膠聚合好的標志是膠與水層之間形成清晰的界面.
4.倒出水並用濾紙把剩餘的水分吸干,按比例配好濃縮膠,連續平穩加入濃縮膠至離邊緣5mm處,迅速插入樣梳,靜置40分鍾. ※樣梳需一次平穩插入,梳口處不得有氣泡,梳底需水平.
5.拔出樣梳後,在上槽內加入緩沖液,沒過鋸齒時可拆去 底端的瓊脂糖. ※要使鋸齒孔內的氣泡全部排出,否則會影響加樣效果.
6、加樣三個。 (1)取10µl標准蛋白溶解液於EP管內,再加入10µl 2倍樣品緩沖液,上樣量為20µl。
(2)取10µl樣品1溶液,再加入10µl 2倍樣品緩沖液,上樣量分別為5µl
和10µl。
7.用微量注射器距槽底三分之一處進樣,加樣前,樣品在沸水中加熱3分鍾,去掉亞穩態聚合。※注射器不可過低,以防刺破膠體,也不可過高,在樣下沉時會發生擴散.※為避免邊緣效應,最好選用中部的孔注樣.
8.電泳槽中加入緩沖液,接通電源,進行電泳,開始電流恆定在10mA,當進入分離膠後改為20mA,溴酚藍距凝膠邊緣約5mm時,停止電泳。
9.凝膠板剝離與染色:電泳結束後,撬開玻璃板,將凝膠板做好標記後放在大培養皿內,加入染色液,染色1小時左右。10.脫色:染色後的凝膠板用蒸餾水漂洗數次,再用脫色液脫色,直到蛋白質區帶清晰。※剝膠時要小心,保持膠完好無損,染色要充分.
以上是我實驗課件,希望有所幫助!
『拾』 電泳實驗怎麼做
若是生物方面的:
1、實驗樣品的准備
2、電泳儀器及相關實驗試劑准備
3、根據實驗目的,設計實驗方案
4、具體實驗
可聯系北京德元國際科技有限公司,他們做生物方面的電泳實驗,應該比較清楚