PL淬滅發實驗裝置

『壹』 簡述熒光猝滅法與直接熒光法所得工作曲線的異同

淬滅是激發態通過非輻射復合的途徑達到弛豫，光穩定的一種。Quench本意為用水澆滅，淬滅為外來詞彙，並沒有「突然熄滅」中「突然」之意，故「猝滅」應為誤傳。

熒光淬滅是指熒光物質分子與溶劑分子之間發生淬滅，熒光猝滅分為靜態淬滅和動態淬滅。利用某種物質對某一種熒光物質的熒光淬滅作用而建立的對該淬滅劑的熒光測定方法，即為熒光猝滅法。

中文名

熒光淬滅

外文名

fluorescence quenching

釋義

淬滅劑的熒光測定方法

性質

化學術語

定義

熒光淬滅（fluorescence quenching）是指熒光物質分子與溶劑分子之間所發生的導致：



EB-DNA體系發射光譜圖

①熒光強度變化

或

②相關的激發峰位變化

或

③熒光峰位變化

物理或化學作用過程。與熒光物質分子發生相互作用而引起熒光強度變化和相關的激發峰位和熒光峰位變化的物質被稱為熒光淬滅劑（quencher）。

在光合作用的光反應中，電子受體即為熒光淬滅劑。[1]

分類

熒光淬滅分為靜態淬滅和動態淬滅。

基態熒光分子與淬滅劑之間通過弱的結合生成復合物，且該復合物使熒光完全淬滅的現象稱為靜態淬滅。

激發態熒光分子與淬滅劑發生能量轉移或物理碰撞使其熒光淬滅則稱為動態淬滅。

方法

熒光分子本身濃度增大使其熒光猝滅的現象稱為濃度猝滅或自猝滅。由於熒光的再吸收、熒光物質發生化學變化而觀察不到熒光的現象一般不稱為熒光猝滅。在利用熒光進行定量、液體閃擊計數等包含熒光過程的測定方法中，一定要注意溶劑、共存雜質、氧氣等猝滅劑的影響。

利用某種物質對某一種熒光物質的熒光猝滅作用而建立的對該猝滅劑的熒光測定方法，即為熒光猝滅法。一般而言，熒光猝滅法比直接熒光測定法更為靈敏，具有更高的選擇性。

影響因素

分子結構和化學環境是影響物質發射熒光和熒光強度的重要因素. 至少具有一個芳環或具有多個共軛雙鍵的有機化合物容易產生熒光,稠環化合物也會產生熒光.飽和的或只有一個雙鍵的化合物,不呈現顯著的熒光.最簡單的雜環化合物,如吡啶,呋喃,噻吩和吡咯等,不產生熒光。

取代基的性質對熒光體的熒光特性和強度均有強烈影響.苯環上的取代基會引起最大吸收波長的位移及相應熒光峰的改變.通常給電子基團,如-NH2-,-OH,-OCH3,-NHCH3和-N(CH3)2等,使熒光增強;吸電子基團,如-CL,-Br,-

『貳』 三溴化磷怎麼淬滅

這些非金屬鹵化物,通常都可用NaOH溶液處理.PBr3水解後形成NaH2PO3和NaBr,就好了.
方程式：PBr3+4NaOH===3NaBr+NaH2PO3+H2O,速率很快而且很完全.

『叄』 淬滅基團為何選none

淬滅基團選none是因為SYBRGreenI操作報告的結果。
在7300/7500定量PCR儀操作軟體上，SYBRGreenI做報告基團，淬滅基團選擇「None」。
熒光基團淬滅基團的類型熒光釋放淬滅原理，常見類型有：6-羧基熒光素、四氯－6－羧基熒光素、2，7－二甲基－4，5－二氯－6－羧基熒光素、六氯－6－甲基熒光素、CY3、6-羧基四甲基若丹明、ROX、LC_RED640等。原理：當熒光物質濃度過大，熒光物質的分子和熄滅劑分子碰撞而損失能量，二者相互作用生成了本身不發光的的配位化合物。而且溶解氧又使得熒光物質氧化，由於氧分子的順磁性，促進了體系間跨越，使得激發單重態的熒光分子轉變至三重態，從而會產生自淬滅現象。

『肆』 證明動態和靜態淬滅的方法都有啥

drove. In ten minutes the tea was ready

『伍』 什麼是熒光淬滅現象,對實驗的開展有何啟示

摘要 根據您的提問，做出如下解答：

『陸』 關於細胞生物學實驗的問題！！！！

實驗、葉綠體的分離與熒光觀察

實 驗 目 的

1. 通過植物細胞葉綠體的分離, 了解細胞器分離的一般原理和方法。

2. 觀察葉綠體的自發熒光和次生熒光, 並熟悉熒光顯微鏡的使用方法。

實 驗 原 理

將組織勻漿後懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法。葉綠體的分離應在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液)中進行, 以免滲透壓的改變使葉綠體到損傷。將勻漿液1000r/min的條件下離心2min, 以去除其中的組織殘渣和未被破碎的完整細胞。然後，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉澱的葉綠體(混有部分細胞核)。分離過程最好在0~5℃的條件下進行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。

利用熒光顯微鏡對可發熒光的物質進行檢測時，將受到許多因素的影響，如溫度、光、淬滅劑等。因此在熒光觀察時應抓緊時間, 有必要時立即拍照。另外，在製作熒光顯微標本時最好使用無熒光載片、蓋片和無熒光油。

實 驗 用 品

一、器材

1.主要設備: 普通離心機、組織搗碎機、粗天平、熒光顯微鏡。

2.小型器材: 500ml燒杯2個, 250ml量筒1個, 滴管20支, 10ml刻度離心管20支, 試管架5個，紗布若干，無熒光載片和蓋片各4片。

二、材料 新鮮菠菜。

三、試劑 0.35mol/L氯化鈉溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)。

實 驗 方 法

一、葉綠體的分離與觀察

1. 選取新鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦乾後去除葉梗脈，稱30g於150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，裝入組織搗碎機。

2. 利用組織搗碎機低速(5000r/min)勻槳3~5min。

3. 將勻漿用6層紗布過濾於500ml燒杯中。

4. 取濾液4ml在1000r/min下離心2min。棄去沉澱。

5. 將上清液在3000r/min下離心5min。棄去上清液，沉澱即不葉綠體(混有部分細胞核)。

6. 將沉澱用0.35mol/LNaCl溶液懸浮、

7. 取葉綠體懸液一滴滴於載玻片上，加蓋玻片後即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。

(1)在普通光鏡下觀察。

(2)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的直接熒光。

(3)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的間接熒光：取葉綠體懸液一滴滴在無熒光載片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙熒光染料, 加蓋片後即可在熒光顯微鏡下觀察。

二、菠菜葉手切片觀察

用剔須刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面置於載玻片上，滴加1~2滴0.35mol/L NaCl溶液，加蓋片後輕壓，置顯微鏡下觀察。

(1)在普通光鏡下觀察。

(2)在熒光顯微鏡下觀察其直接熒光。

(3) 觀察間接熒光：向手切片上滴加1～2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液, 加蓋片後可在熒光顯微鏡下觀察間接熒光。

實 驗 結 果

一、葉綠體的分離和觀察

1. 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。

2. 以Olympus熒光顯微鏡為例，在先用B(bule)激發濾片、B雙色鏡和O530(orange)陰斷濾片的條件下，葉綠體發出火紅色熒光。

3. 加入吖啶橙染色後，葉綠體可發出桔紅色熒光，而其中混有的細胞核則發綠色熒光。

二、菠菜葉手切片觀察

1. 在普通光鏡下可以看到三種細胞 (1)表皮細胞: 為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細胞; (2)保衛細胞: 為構成氣孔的成對存在的腎形細胞；(3)葉肉細胞: 為排列成柵狀的長形和橢圓形細胞。葉綠體呈綠色橄欖形，在高倍鏡下還可以看到綠色的基粒。

2. 在熒光顯微鏡下，葉綠體發出火紅色熒光，但其熒光強度要比游離葉綠體弱, 氣孔發綠色熒光，兩保衛細胞內的火紅色葉綠體則環繞氣孔排列成一圈。表皮細胞內的葉綠體數量要比葉肉細胞少。

3. 用吖啶橙染色後，葉綠體則發出桔紅色熒光，細胞核可發出綠色熒光, 氣孔仍為綠色。

作 業

1. 在普通光學顯微鏡下，用目微尺和台微尺測量一下葉綠體的長軸和短軸，分別測量5~10個葉綠體，求其平均值。

2. 在熒光顯微鏡下，觀察葉綠體的自發熒光時，更換濾鏡系統，葉綠體的顏色是否有變化？

實驗五、 植物染色體標本制備與觀察

實驗目的

學習植物染色體標本的制備技術，了解Feulgen反應的基本原理,學習其操作方法和壓片法,初步掌握細胞分裂各期的主要特點.

核酸是生物最重要的組成成分,核酸分為兩大類,即脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA).它們在細胞內的分布及化學性質均有所不同.DNA主要分布在核的染色質或有絲分裂過程中出現的染色體內.RNA分布在細胞質和核仁內.但在染色質及染色體中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA.在線粒體,葉綠體等細胞器內除含有RNA外,也含有少量的DNA.

實驗原理

Feulgen反應的原理是根據DNA經弱酸(1mol/L)水解後,打開料嘌呤和脫氧核糖連接的鍵,在脫氧核糖的一端形成有離的醛基.這些醛基就在原位與Schiff試劑結合,形成含醌基( )的化合物,醛基是一個發色團所以具有顏色,因此凡有DNA的部位,就呈現紫紅色.

實驗材料

大麥、黑麥或小麥種子

實驗內容

植物染色體標本的制備及DNA的顯示法-Feulgen反應

壓片法

細胞有絲分裂相的觀察

實驗步驟

（一）植物染色體標本的制備

1、將植物種子放在潮濕的濾紙上，20°C發芽，待胚根長至1～2cm時，切取0.5cm長的根尖部分。

2、預處理：將切下的根尖浸入0.1%秋水醯素液中，室溫下處理3～4小時。

3、固定、水解及染色：

Camoy固定劑

固定10-30分鍾 ➞ 95%酒精10分鍾 ➞ 70%酒精10分鍾 ➞ 蒸餾水 →(對照) 5%三氯醋酸 ➞ 90oC 15分鍾

➞ 1mol/L HCl ← 蒸餾水 ➞ 1mol/L HCl ➞ 60 oC 8分鍾 ➞ Schiff試劑40 -60分鍾 ➞ 亞硫酸水(1,2,3) ➞ 換3次,每次5分鍾自來水 ➞ 將染色後的根尖漂洗干凈,懸著染色效果好的材料 ➞ 蒸餾水 ➞ 壓片 ➞ 鏡檢

(二) 壓片法

壓片的操作步驟如下,把根尖放在載片上,用刀片切取根尖(0.3cm),縱切根尖,加一滴水,用解剖針將根尖縱向分成若干小條,保留1-2小條,加蓋玻片,用鉛筆端輕輕敲擊蓋玻片,使細胞分離,壓平呈雲霧狀.

（三）蠶豆(或洋蔥)根尖壓片的觀察

首先在低倍鏡下,區分根尖的分生組織區及延長組織區的細胞,然後,在高倍鏡下,觀察細胞核的形態,注意在你的片子上,是否有有絲分裂細胞,如有,你能找到細胞分裂期的幾個階段,其特徵如何 (可參照附錄)

做Feulgen反應時,應注意的幾個問題

固定劑的選擇:一般常選用Carnoy固定液.其他的固定劑如Flemming固定劑及Champy固定劑等均可用,但不能使用Bouin固定劑.

水解時間:水解時間一定要合適,不宜過長或不足,否則會影響實驗結果.如用Carnoy固定液固定的材料,水解時間一般在8-15分鍾之間.水解時間的長短要隨不同的材料及不同的固定劑而定.

Schiff試劑的質量:在做Feulgen反應時,重要的因素就是Schiff試劑的質量問題.實驗時,要注意試劑顏色是否正常,有無SO2的氣味.

洗滌劑的重要性:漂洗時,所用的亞硫酸水,最好在每次實驗前臨時配製,以便保持較濃的SO2.

實驗對照組:一定要做對照片,以便說明實驗結果的真實性.

操作過程中,用鑷子鑷取根尖的生長區部位,切勿夾取根冠部位.

鴉片過程中盡量使根尖分生組織細胞保持原來的分布狀態.

習題

簡述Feulgen反應的原理

欲得到一張好的Feulgen反應製片,製片過程中應注意些什麼

繪制細胞分裂圖。
實驗六 植物原生質體的制備

實驗目的

1.學習植物原生質體的分離制備技術，觀察原生質體的形態。

2.學習植物原生質體的融合技術，觀察不同方法融合細胞的形態及變化。

實驗用品

顯微鏡，擦鏡紙，剪子，鑷子，小平皿，吸管四支，直式漏斗，300目尼龍網，10ml離心管，載片，蓋片。

實驗原理

原生質體（protoplast）這個術語最早是由Hanstein在1880年提出來的。確切地說，食用菌原生質體是指細胞壁完全消除後餘下的那部分包裹的裸露的細胞結構。

植物的花瓣細胞在經過纖維素酶，離折酶處理後，纖維素和果膠成分遭到破壞，造成原生質體脫離細胞壁進入培養液中。

植物花瓣細胞中的大液泡中存在有大量色素，且不同的細胞色素不同，因此可以在不對細胞染色的情況下，通過顏色范圍辨認不同細胞的原生質體，以及同種間細胞融合和異種間細胞融合情況。

PEG是一種高分子化合物，由於含有醚鍵而具有負極性，與水，蛋白質和碳水化合物等一些正極化基團形成氫鍵。當PEG分子足夠長時，可作為鄰近原生質體表面之間的分子橋而使之粘連。PEG也能連接Ca2+等陽離子。Ca2+可在一些負極化基團和PEG之間形成橋，因而促進粘連，在洗滌過程中，連接在原生質體膜上的PEG分子可被洗脫，這將引起電荷的紊亂和再分布，從而引起原生質體融合，高Ca2+高pH清洗則增加了質膜的流動性，因而大大提高了融合頻率，洗滌時的滲透沖擊對融合也可能起作用。

實驗試劑

1.洗滌液：

甘露醇 0.6 M

CaCl2?2H2O 8 mM

NaH2PO4?H2O 2 Mm

Ph 5.6

實驗步驟

1.酶液的制備 把纖維素酶（EAS－867）溶於0.5～0.7摩爾/升甘露醇內，加10毫摩/升氯化鈣溶液作穩定劑。酶溶解後，經4000轉/分離心機沉降原生質體，20分鍾後，取上清液。經針筒型過濾器，再經0.45微米微孔濾膜過濾後，在無菌箱內把酶液分裝在三角燒瓶內，貯存在冰箱里備用。

2.材料准備 把生長在溫室，苗齡60天以上的煙草植株，取上中部全展葉，在日光下照射2小時，使它萎蔫。也可以用溫室生長的蠶豆葉作同樣處理，或用大田收獲的胡蘿卜，放在0℃以上低溫備用。萎蔫後的葉片浸在3%的漂白精片溶液中15～20分鍾，再用無菌水沖洗干凈，用無菌吸水紙吸干表面水分。

3.酶解 用尖頭鑷子撕去葉片下表皮，剪成小塊。胡蘿卜則用刀片削去表皮和中柱，取用皮層部，切成小塊。以上材料1克，放入盛有10毫升酶溶液的培養皿里，加蓋。在28～30℃下保溫1.5～3小時。

4.洗滌 葉片或其他組織經酶解後會出現圓形的游離原生質體，原生質體懸浮液內有未消化的組織、碎片、細胞和破裂的原生質體。用濾紙或尼龍布濾去粗雜質，再把原生質體懸浮液移到離心管，用手搖離心機轉動2分鍾，吸去上清液（見圖），再加入0.5毫升甘露醇洗滌2～3次，最後就得到較為純凈的原生質體，可以供進一步培養或作其他實驗用。

實驗七 細胞融合方法

實驗目的

1、初步掌握動物細胞PEG融合的方法。

2、學習細胞融合及其應用的有關知識。

實驗原理

2個或2個以上的細胞合並為1個細胞的現象，稱為細胞融合。細胞融合的主要方法有病毒法、聚乙二醇（PEG）法和電融合方法。

用PEG處理細胞，能使質膜性質發生改變，導致細胞膜融匯，胞質流通，最後導致細胞融合。

實驗器材、材料與試劑

1、儀器：

光學顯微鏡，離心機，恆溫水浴鍋，C02培養箱，超凈台，倒置顯微鏡等。

2、材料

新鮮雞紅細胞，無菌注射器，6號針頭，刻度離心管，試管，載玻片，蓋玻片。

3、試劑

50%PEG，Hanks液，甲醇，Giemsa染液，碘酒，75%乙醇

實驗方法

(1)取新鮮雞血以0.85％生理鹽水製成10％的懸液。

(2)稱取0.5克PEG(MW=4,000)放入試管內，在酒精燈上融化之，迅速加入0.5ml預熱的Hanks液混勻製成50％的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。

(3)取上述10％的雞紅細胞懸液1ml放入離心管中，再加入5ml Hanks液混勻，然後以1,000rpm離心5分鍾，小心棄去上清，用指彈法將細胞團塊彈散。

(4)取上述50％PEG溶液0.5ml，在1分鍾內滴加到雞紅細胞懸液，邊加邊輕輕搖動混勻。待PEG全部加入後靜置1分鍾左右。此全部過程都要求在37℃水浴內進行。

(5)緩慢滴加9ml Hanks液以終止PEG的作用，在37℃水浴內靜置5分鍾。

(6)離心棄上清後，取一滴融合後的細胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。

『柒』 誰給介紹一下Quo-test糖化血紅蛋白儀使用的親和熒光淬滅法原理准確性和穩定性如何

Quo-test糖化血紅蛋白儀是英國Quotient 診斷公司生產的一種快速、自動化POCT糖化血紅蛋白分析儀。目前被德國EKF診斷公司收購。

Quo-test糖化血紅蛋白儀採用全新的親和熒光淬滅原理，並獲得全球專利。他的成份分離方法採用經典的硼酸鹽親和法，檢測方法採用了首創的熒光淬滅法。具體過程如下：

步驟1：試劑中不含熒光物質，沒有熒光激發。

步驟2：儀器將熒光物質加入到試劑。硼酸鹽與熒光基團結合，產生大量激發熒光。

步驟3：儀器將樣本加入到試劑中。硼酸鹽-熒光基團與血紅蛋白競爭結合，導致熒光量下降。其中未糖化的血紅蛋白結合力遠大於糖化血蛋白，因此未糖化成分首先與硼酸鹽-熒光基團結合，熒光量急劇下降。此過程中可檢測未糖化成分的含量。

步驟4：糖化血紅蛋白成分與硼酸鹽-熒光基團結合。此結合過程緩慢，因此熒光淬滅過程緩慢，呈曲線狀。

步驟5：儀器檢測步驟4周期中的熒光淬滅過程，即可反映糖化血紅蛋白成分的含量。

此原理特異性和靈敏度均比較理想，已經通過IFCC和NGSP認證。由於該儀器採用一體化試劑，無需人工加樣和預處理標本，檢測過程全自動化；非常適合床旁快速檢測。

『捌』 淬滅型熒光探針的檢測限怎麼求

？kele9955(站內聯系TA)文獻是說加TFA抑制電離效果，但是也可以用，它的抑製作用沒想像的那麼強，實驗室我們一般用FA ，我覺得這個更好一些guoye123(站內聯系TA)色譜的檢測限，通俗地說，就是色譜的最小、能准確定量的檢測濃度。
色譜所用檢測器有上百種，常用的也有幾十種，單純以最低檢測濃度論，ECD、PID、HID、DID，都能達到PPB級，大多數都是PPM級到常量級之間。所以，以最小檢測限比較，兩者不能相較。倒是我們最初接觸質譜時，都是以色譜定量，質譜定性。兩者各有偏重。
10的負九次方 我要沒看錯的話，你說的這個是靈敏度，不是檢測限。檢測限與儀器和方法有關，你用的是LC/MS/MS的話，可以直接算出方法的檢測限。

『玖』 熒游標記實驗激光照射後為什麼淬滅

熒光分子在激發光的照射下,反復經歷多次激發,發射過程後,往往造成分子內部結構發生不可逆的變化,不能吸收更多的光子而進一步發射熒光.這時就稱該分子被光漂白了.當激光功率高時,熒光分子有可能在高強度的激光下被漂白了

『拾』 什麼是化學發光淬滅法

在化學反應中，產物分子吸收了反應過程中釋放的化學能而被激發，在返回基態時發出輻射稱為化學發光，而淬滅是熒光分子之間或熒光分子與熄滅劑分子之間碰撞引起的熒光熄滅效應。