柱色谱实验装置注意事项

㈠ 简述吸附柱色谱中湿法装柱的操作过程和注意事项

首先也是最关键的是匀浆，要根据你的填料比重找到合适的匀浆，如果是你买的填料的话一般都能要到匀浆方法。第二装柱压力，这个根据不同填料、不同内径的柱子不同。
第三装后的柱头处理，很重要。
第四就装的过程各个细节，如匀浆的气泡处理、密封性等等
最后装柱机的好坏、管道设计不同装出来的柱子也不同

㈡ 吸附柱色谱思考题装柱,加样的操作中应注意什么问题

硅胶一定要填结实；一定要用较多的溶剂走柱子，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也有在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。

如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。

(2)柱色谱实验装置注意事项扩展阅读

吸附色谱在生物技术领域有比较广泛的应用，主要体现在对生物小分子物质的分离。生物小分子物质相对分子质量小，结构和性质比较稳定，操作条件要求不太苛刻，其中生物碱、萜类、苷类、色素等次生代谢小分子物质常采用吸附色谱或反相色谱进行分离。吸附色谱在天然药物的分离制备中也占有很大的比例 。

固体内部的分子所受的分子间作用力是对称的，而固体表面的分子所受的力是不对称的。向内的一面受内部分子的作用力较大，而向外的一面所受的作用力较小，因而当气体分子或溶液中溶质分子在运动过程中碰到固体表面时就会被吸引而停留在固体表面上。

吸附剂与被吸附物分子之间的相互作用是由可逆的范德华力所引起的，故在一定的条件下，被吸附物可以离开吸附剂表面，这称为解吸作用。吸附色谱就是通过连续的吸附和解吸附完成的。

㈢ 柱色谱中加混合样品时应该注意哪些操作

柱色谱的使用注意事项很多，作为精密测试仪器，我们要尽可能多的考虑能够引起各种误差的操作。不仅仅是加注样品时候哦。

2. 流动相：

• 在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生，当然一般情况下都是随用随配的，没人懒到一下配好几天用的。

• 流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。

• 流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。

• 流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

• 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。

• 流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。一旦造成这种情况，很难恢复。

• 色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。避免压力突然上升或变化幅度过大，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。操作温度不要超过60℃哦，

3. 样品：

• 样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。

• 样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。

• 样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。

ps：题主认为以上啰嗦的太多么？要知道这么精密的仪器，用起来的啰嗦事更多，否则也对不起那么精准的数据不是？科学要严谨，操作多谨慎。

㈣ 薄层色谱和柱色谱实验的原理，步骤和注意事项

(1)薄层色谱---自下而上,展开分离!
(2)柱色谱---自上而下,展开分离!
(3)选择适当的展开剂!

㈤ 关于气相色谱使用注意事项

为保证气相色谱仪能够正常运行，确保分析数据的准确性、及时性，需要对气相色谱仪进行定期维护。

1、气源检查检：查发生器或者气体钢瓶是否处于正常状态；检查脱水过滤器、活性炭以及脱氧过滤器，定期更换其中的填料。

2、管线泄漏：检查定期检查管线是否泄漏，可使用肥皂沫滴到接口处检查。

3、气化室的维护：气化室包括：进样室螺帽、隔垫吹扫出口、载气入口、分流气出口、进样衬管。不同的部件有不同的维护方式：

1）进样室螺帽、隔垫吹扫出口、载气入口及分流气出口4个部件需按厂家要求定期清洗：把这几个部件从气化室上拆卸下来，放在盛有丙酮溶液的烧杯中浸泡并超声2小时，晾干后使用；若有损坏应及时更换。

2）进样衬管必须定期进行清洗，先用洗液清洗，然后用丙酮溶液浸泡，再用电吹风吹干备用，及时添加石英棉。

4、若有损坏应及时更换。

5、检测器的维护：检测器的收集器、检测器接收塔、火焰喷嘴、检测器基部、色谱柱螺帽等处，须用丙酮溶液清洗，一般超声2小时，至清洗干净，清洗后用电吹风吹干备用。

6、柱温箱的维护：柱温箱的外壳、容积区间，可用脱脂棉蘸乙醇擦洗。

(5)柱色谱实验装置注意事项扩展阅读：

一、使用方法

气相色谱仪的一般分析流程：载气由高压钢瓶中流出，经减压阀降到所需压力后，通过净化干燥管使载气净化，再经稳压阀和转子流量计后，以稳定的压力、恒定的速度流经气化室与气化的样品混合，将样品气体代入色谱柱中进行分离。

分离后的各组分随着载气先后流入检测器，然后载气放空。检测器将物质的浓度或质量的变化转变为一定的电信号，经放大后在记录仪上记录下来，就得到色谱流出曲线。根据色谱流出曲线上得到的每个峰的保留时间，可以进行定性分析，根据峰面积或峰高的大小，可以进行定量分析

二、应用领域

气相色谱法是以气体为流动相的色谱分析方法，主要用于分离分析易挥发的物质。气相色谱法已成为极为重要的分离分析方法之一，在医药卫生、石油化工、环境监测、生物化学等领域得到广泛的应用。

通常采用的检测器有：热导检测器，火焰离子化检测器，氦离子化检测器，超声波检测器，光离子化检测器，电子捕获检测器，火焰光度检测器，电化学检测器，质谱检测器等。

㈥ 柱色谱法在洗脱和分离过程中应注意什么

沿色谱柱壁加样或加洗脱液，防止吸附剂溅起；洗脱过程中不能让液体流干。

㈦ 用湿法硅胶柱色谱装柱分离大黄酚与大黄素甲醚的操作程序和注意事项有哪些如何检查分离的效果

（1）色谱柱的材料
可用于制作色谱柱的材料很多，一般有不锈钢、玻璃、铜、铝、镍、聚四氟乙烯或塑料等。选择柱材料的依据是柱管内壁的表面特性，另外，也应考虑来源方便，制作容易，安装使用简便等。目前用于气相色谱的柱材料主要是不锈钢和玻璃。值得提出的是弹性石英和金属镍在制作柱上的优点已被人们所重视，可能成为未来制作色谱柱的主要材料。
①不锈钢柱管：优点是质地坚固，能承受较高的温度，制作使用方便，不易损坏，且有一般的惰性表面，使用范围较宽。但对某些样品如酸类，含卤素的化合物及腐蚀性物质等则易发生反应。极性化合物、医药、生物样品和水等不易在不锈钢上分析。因这些化合物易被吸附或在高温金属表面催化分解。如在使用之前，用有机溶剂和稀硝酸等处理，可使特性得到一定的改善。
②聚四氟乙烯柱：这种柱最大的优点是制作方便，易加工成任何形状。并有优良的耐腐蚀性。特别适合用来分析SO2，硫化氢，硫醇等以及腐蚀性、活性强的无机卤化物如COS，HF，H2S，F2等。
（2）柱管的清洗
常用的不锈钢柱在填充固定相前应进行清洗，除去内部的油污与锈垢。方法是用10%热盐酸或和5～10%热碱液抽洗，然后用蒸馏水冲洗至中性，烘干备用。如果柱内壁比较干净，可注入洗液或丙酮等溶剂清洗几次，然后用蒸馏水冲洗干净并烘干备用。
（3）填充
通常采用真空泵的抽空填充法，即将空柱的一端塞上玻璃棉后接上真空源；另一端装上漏斗，把干燥的固定相慢慢喂入其中，并轻轻敲击柱壁，直至装满，头上稍留一点空间塞上玻璃棉抵住物。填充操作总的要求是：填料颗粒不破碎，但又填得均匀，松紧适度，不留任何间隙。还要注意柱头抵柱物（玻璃棉的洁净，用量宜越少越好）。

注意事项
（1）由于色谱柱属于吸附性物质，所以长时间不用要通一段时间气进行老化后再使用，否则容易造成基线不稳或噪音大、灵敏度低等现象。
（2）在做试验时要防止污染。
（3）如果色谱柱受到污染，它表现出的明显现象是峰分离变差，灵敏度变低并且峰形托尾，所以解决这种污染柱的根本方法是更换色谱柱。

色谱柱的分离效果
色谱柱的分离效果常用分离度、分辨率等指标来评价。
（1）分离度（θ） 相邻的两个色谱峰中，小峰峰高（hi）和两峰交点（m）的高度（hm）之差与小峰峰高（hi）之比值，称为分离度。
θ值常用于描绘未全分离色谱峰的分离程度。在色谱分析中，一般要求θ值大于0.5。（2）分辨率（R） 又称分辨度，R等于相邻两组分色谱峰保留值之差与此两峰峰底宽度总和之半的比值。如图3-6 所示：
式中 tR2、tR1 — 分别为相邻两组分的保留值；
Wl、W2 — 分别为相邻两组分的峰底宽。
组分的保留值与峰底宽采用同一的计量单位时，如R＝1.0，两组分色谱峰稍有重迭；如R＝1.5时，则两组分色谱峰基本上可以全分离。
在应用上，可通过上述柱效能的几项指标，估算色谱柱具有良好分离效能时所需的柱长度。

㈧ 有机柱色谱实验中，色谱柱中若留有空气或填装不均匀，对分离效果有何影响如何避免

会影响渗透速率和显色的均匀
避免
1，装柱过程中应不断敲打色谱柱。
2，过程中，柱内洗脱剂的液面高度始终不能低于吸附剂最上端。

㈨ 柱层析的注意事项有哪些

1 装柱。 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。 干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧 密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写 的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就 全下来了。当然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是 开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！ 2 加样。 用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再 加少量的低极性溶剂，然后俅蚩钊绱肆饺危话闶⑸熬突臼前咨牧恕? 加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了） ，再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。 3 淋洗剂的选择。 感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过 柱子就用那种极性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不轻易在柱子上分开，因为柱子是一 个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。 4 样品的收集。 用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以假如样品与硅胶的吸附比 较强的话，就不轻易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以 采用氧化铝作固定相。 另外，收集的试管大小要以样品量而定，非凡是小量样品，假如用大试管，可能一根就 收到了三个样品，wuwu。假如都用小试管那工作量又太大。 5 最后的处理。 柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以假如想送 分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没 了，必要时进行重结晶。 另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是 和使用的溶剂有关，假如是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在 室温稍高的情况下，很轻易出现这种现象，因此，在室温高的时候， 可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。还有，使用混合溶剂时，使用 的两种溶剂的沸点应该相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而 乙醚却要选择30－60的石油醚。二是：不论是用带砂板的还是塞棉花的， 在装柱之前，都要将空气用加压的方法将空气排干，这样就可避免柱中有 空气！过柱子需要耐心，不要着急。

㈩ 柱色谱在洗脱和分离的过程中要注意些什么

一般的色谱分离中，如果柱子流干或者进入空气会使得样品峰流动的时候不均匀，造成峰变宽，理论塔板数降低，分离效果变差。