葉綠素萃取實驗裝置圖

⑴ 葉綠素提取實驗

一 實驗目的

1．掌握提取葉綠素的方法；

2．了解薄層層析的原理，掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法

二 實驗原理

1．葉綠素提取

高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要包括葉綠素a (C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物，胡蘿卜素是一種橙色天然色素，屬於四萜類，為一長鏈共軛多烯，有α、β、γ三種異構體，其中，β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素，與葉綠素同存在於植物體中，是胡蘿卜素的羥基衍生物，較易溶於乙醇，在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性，可將它們從植物葉片中提取出來，並通過萃取、沉澱和色譜方法將它們分離開來。

2．薄層色譜

薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術，具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上製成薄層板，將樣品溶液點加在起點處，置於層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響，可採用腐蝕性顯色劑，而且可在高溫下顯色，特別適用於揮發性小或在較高溫度下易發生反應的物質，同時也常用來跟蹤有機反應或監測有機反應完成的程度。

薄層層析的器材選擇：

（1）基板：玻璃、塑料、金屬箔，常用玻璃板。

（2）吸附劑：

吸附劑要有合適的吸附力，並且必須與展開劑和被吸附物質均不起化學反應。可用作吸附劑的物質很多，常用的有硅膠和氧化鋁，由於吸附性好，適用於各類化合物的分離，應用最廣。選擇吸附劑時主要根據樣品的溶解度、酸鹼性及極性。氧化鋁一般是微鹼性吸附劑，適用於鹼性物質及中性物質的分離；而硅膠是微酸性吸附劑，適用於酸性物質及中性物質的分離。以下簡單介紹吸附劑的幾個基本參數。

種類：常用：氧化鋁（強極性）、硅膠（中強極性）

不常用：硅藻土、纖維素、糖類、活性碳

符號：H——無任何添加劑；G——加有鍛石膏（Gypsum，CaSO4·1/2 H2O）粘合劑；

F——加有熒光素（Fluorescein）

CMC——加有羧甲基纖維素鈉（Carboxymethyl cellulose）

例：硅膠GF254表示硅膠中既加有煅石膏粘合劑，也加有熒光素，可以在波長254nm的紫外光下激發出熒光

粒度：目：1cm2內的篩孔數，數目越大，顆粒越小。薄層所用吸附劑顆粒較細，氧化鋁為200目，硅膠為100~150目。

μ：顆粒的平均直徑，以微米表示。例如：40μ的顆粒與100目相當。

活性：

吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級：I級含水量最少，活性最高；V級含水量最多，活性最低；但並不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級別的吸附劑，要用實驗的方法來確定。

酸鹼性：

市售氧化鋁有酸性（用以分離酸性化合物）、中性、鹼性（用以分離生物鹼等鹼性化合物），其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10；其中以中性氧化鋁應用最廣，可用來分離各種化合物，特別是那些對酸、鹼敏感的化合物。

硅膠沒有酸鹼性之分。

（3）展開劑

在樣品組分-吸附劑-展開劑三個因素中。對一確定組分，樣品的結構和性質可看作是一不變因素，吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的選擇有以下要求:

（a）對待測組分有很好的溶解度。

（b）能使待測組分與雜質分開，與基線分離。

（c）使展開後的組分斑點圓而集中，不應有拖尾現象。

（d）使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5，如樣品中待測組分較多，Rf值則可在0.25~0.75范圈內，組分間的Rf值最好相差0.1左右。由於薄層色譜法用途非常廣泛，國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。

(e)不與組分發生化學反應，或在某些吸附劑存在下發生聚合。

(f)具有適中的沸點和較低的粘滯度。

展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度，吸附劑活性等因素進行選擇，總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是：石油醚<環己烷<苯<乙醚<氯仿<乙酸丁酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇。

如一種溶劑不能充分展開，可選用二元或多元溶劑系統。

4．展開槽與展開：

薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中進行。

展開：

合適的展開劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點；點樣端向下，每次只展開一塊，放在正中，以免爬斜（進而展開傾斜）。

5．顯色：

如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點（有苯環的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對於在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色後，立即用鉛筆標出斑點的位置。常用

普適性顯色劑：濃硫酸、碘蒸氣、熒光素，專用顯色劑：茚三酮、三氯化鐵溶液等。

三、實驗儀器與葯品

儀器：半微量玻璃儀器一箱，小燒杯，層析缸(槽)，載玻片(100mm×25mm)乾燥器，電吹風，毛細管，移液管，研缽，布氏漏斗，抽濾裝置。

試劑：硅膠，1％ CMC，石油醚（60~90℃），乙醇，丙酮，乙醚，飽和NaCl溶液，無水Na2SO4

四、實驗步驟

1．制板：

將硅膠加 1％ CMC，調成槳狀(硅膠：CMC=1:3~4)（在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動），將其塗在載玻片上（100mm×25mm）），為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動，至平坦為止，放在干凈平坦的檯面上，晾乾之後放入105℃烘箱活化1小時，取出放入乾燥器內待用。

2、葉綠素的提取

在研缽中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以．如果是冷凍的，解凍後包在紙中輕壓吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液，適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中，加人10 mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質，分去H2O層，再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入乾燥的小錐形瓶中，加2g入無水Na2SO4乾燥。乾燥後的液體傾至另—錐形瓶中(如溶液顏色太淺，可在通風櫃中適當蒸發濃縮)。

3、點樣

用一根內徑 1mm的毛細管，吸取適量提取液，輕輕地點在距薄板一端1.5cm處，平行點兩點，兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠，可待樣品溶劑揮發後．再在原處點第二次，但點樣斑點直徑不得越過2mm。

4、展開

先在層析缸中放入展開劑[石油醚（60~90℃）-丙酮—乙醚(體積比為3:1:1)]，加蓋使缸內蒸氣飽10min， 再將薄層板斜靠於層析缸內壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒於展開劑中，密閉層祈缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1crm時，取出平放，用鉛筆或小針劃前沿線位置，晾乾或用電吹風吹乾薄層。

五、實驗注意事項

1．制板時用注意使板上硅膠厚度盡量一致。

2．植物葉片不要研成糊狀，否則會給分離造成困難

⑵ 葉綠素的提取以及實驗材料

葉綠體色素的提取
實驗原理
植物葉綠體色素是吸收太陽光能，進行光合作用的重要物質。它一般由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。這些色素都不溶於水，而溶於有機溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機溶劑提取。
實驗材料
鹵地菊葉片

器材：研缽、剪刀
實驗步驟
（1）取植物新鮮葉片1克，洗凈，擦乾，去掉中脈剪碎，放人研缽中。
（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，2-3 mL95%乙醇，研磨至糊狀，再加2-3 mL95％乙醇，過濾，即得色素提取液。

⑶ 急！！求葉綠素提取的實驗步驟

葉綠素的提取
▲ 將新鮮菠菜（Spinacia）葉片洗凈擦乾，去葉柄及葉脈。稱取樣品 8g，剪碎置研缽內，加入 8cm3丙酮及少許固體碳酸鈉，迅速研磨成勻漿；然後再加入 20cm3丙酮充分研磨。
▲ 在一玻璃漏斗底部墊一小團脫脂棉，將勻漿通過脫脂棉過濾至已裝有 20cm3石油醚的分液漏斗中，再用少量的丙酮沖洗葉片殘渣及研缽，合並濾液。
▲ 沿分液漏斗的壁小心加入 40cm3蒸鎦水，輕輕搖動，使色素轉移到上面的石油醚層靜置數分鍾，待分層清楚後棄去下面的丙酮一一水層。如發生乳化現象可加入 2－3cm3飽和NaCl 溶液。
▲ 在分液漏中再加入 40cm3蒸鎦水，輕輕搖動，以洗去石油醚中殘留的丙酮，共洗兩次。然後將葉綠素的石油醚提取液放入具塞錐形瓶中，置暗處或用黑紙包好備用。

⑷ 葉綠素提取實驗形成的色帶圖片

葉綠體
http://ke..com/view/28871.htm

葉綠素提取實驗中的問題
http://..com/question/320871.html
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色素帶圖片
http://image..com/i?ct=503316480&z=0&tn=imagedetail&word=%C9%AB%CB%D8%B4%F8&in=16564&cl=2&cm=1&sc=0&lm=-1&pn=0&rn=1

http://image..com/i?ct=503316480&z=0&tn=imagedetail&word=%C9%AB%CB%D8%B4%F8&in=8247&cl=2&cm=1&sc=0&lm=-1&pn=1&rn=1

⑸ 關於葉綠素的提取和分離實驗

熒光：葉綠素溶液在透射光下呈綠色，而在反射光下呈紅色的現象。葉綠素分子吸收量子從基態上升到激發態，後因不穩定從第一單線態回到基態所發射的光就稱為熒光。

葉綠素的酒精溶液在透射光下為翠綠色，而在反射光下為棕紅色。這個紅光就是葉綠素受光激發後發射的熒光。這個現象就是熒光現象。其主要原理是由於葉綠素有兩個不同的吸收峰。葉綠素吸收光的能力極強，如果把葉綠素的丙酮提取液放在光源與分光鏡之間，可以看到光譜中有些波長的光被吸收了。因此，在光譜上就出現了黑線或暗帶，這種光譜叫吸收光譜。葉綠素吸收光譜的最強區域有兩個：一個是在波長為640nm～660nm的紅光部分，另一個在波長為430nm～450nm的藍紫光部分。對其他光吸收較少，其中對綠光吸收最少，由於葉綠素吸收綠光最少，所以葉綠素的溶液呈綠色。葉綠素的丙酮提取液在透射光下是翠綠色的，而在反射光下是綜紅色的
熒光效應在植物生理學中有廣泛的應用。用這個效應可以研究植物的抗逆生理。因為在逆境下，植物的葉綠素會發生變換，研究其熒光，可以作為植物受逆境脅迫程度的指標。
另外，還有一個磷光效應。就是當熒光出現後，立即中斷光源，用靈敏的光學儀器還可在短時間內看到紅色「余暉」，這就是磷光。

⑹ .做《葉綠體中色素的提取和分離》實驗時，下面的四種裝置圖，哪個是正確的

A是因為濾液細線接觸了層析液，濾液溶解在層析液中會影響色素的擴散情況
D是因濾液細線要畫得又細又直，如果不細不直，在層析時會導致色素帶的重疊，而D中細線明顯不符合細這個要求

⑺ 葉綠素的提取和分離實驗怎麼做

提取色素：稱取5 g的綠葉，剪碎，放入研缽中→加入少量二氧化硅、碳酸鈣和10 mL無水乙醇→研磨→過濾→收集到試管內並塞嚴試管口。

制備濾紙條：將乾燥的定性濾紙剪成略小於試管長與直徑的濾紙條，將濾紙條的一端剪去兩角，在距離剪角一端1cm處用鉛筆畫一條細的橫線。

畫濾液細線：用毛細吸管吸取少量的濾液，沿鉛筆線均勻地畫出一條細線，待濾液干後，再畫1～2次。

分離色素：將適量的層析液倒入試管中。結果為濾紙條上呈現四條顏色、寬度不同的色素帶。

(7)葉綠素萃取實驗裝置圖擴展閱讀：

葉綠素提取注意事項：

制備濾紙條時，要將濾紙條的一端剪去兩角，這樣可以使色素在濾紙條上擴散均心，便於觀察實驗結果。

過濾時不用濾紙過濾而用單層尼龍布過濾是因為濾紙對色素具有吸附作用，若用其過濾，會導致收集到的濾液色素含量少，使實驗效果不明顯或失敗。

分離色素時，一定不要讓濾紙條上的濾液細線接觸到層析液，這是因為色素易溶解於層析液中，導致色素帶不清晰，影響實驗效果。

⑻ 葉綠素的提取和分離實驗步驟

提取：（1） 取菠菜或其他植物新鮮葉片4-5片（2g左右），洗凈，擦乾，去掉中脈剪碎，放入研。（2） 研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2-3ml 95％乙醇，研磨至糊狀，再加10-15ml 95％乙醇，離心35min，提取上清液過濾於三角瓶中，殘渣用10ml 95％乙醇沖洗，一同過濾於三角瓶中。（3） 如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉乾粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉最好），先用105℃殺青，再在80℃下烘乾，研成粉末，密閉儲存。用時稱葉粉2g放入小燒杯中，加95％乙醇20-30ml 浸提，並隨時攪動。待乙醇呈深綠色時，濾出浸提液備用。分離：（1） 取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），將其剪成濾紙條（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液，沿紙條的長度方向塗在紙條的一邊（距邊約1cm），使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內，風干後，再重復操作數次。 （2） 在層析缸中加入適量的推動劑，將濾紙條帶有色素的一端插入層析缸中，使濾紙條下端浸入推動劑中。迅速蓋好層析缸蓋。此時，推動劑借毛細管引力順濾紙條向上擴散，並把葉綠體色素向上推動，不久即可看到各種色素的條帶。 （3） 當推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風干，即可看到分離的各種色素：葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。