A. 做PCR實驗需要准備哪些實驗耗材
高壓過嘩老的超純水，高壓滅菌過的藍色、白色和黃色槍頭，100ul、亂彎升鬧如500ul和1ml離心管，大量的話需要排管（12連管），放置離心管用的的架子（96孔板等）。PCR最好在冰上進行，所以准備冰盒。
B. PCR實驗會用到哪些東西
儀器：PCR儀
耗材：PCR管
試劑：PCR Mix（購買）,H20,引物（公司合成）,模板（質粒模板,基因組模板或者RNA反轉錄的cDNA模板）
C. 做pcr需准備哪些實驗器材
pcr儀，pcr管，移液槍，還有所加的試劑
D. 熒光實時定量PCR要購買哪些試劑和材料
如果你想做熒光定量PCR的根據實驗思路來說應該需要一下試劑和儀器
1.模板提取（一般為RNA）：Trizol、氯仿、異丙醇、無水乙醇、DEPC處理水
2.模板濃度測定：分光光度計或NanoDrop
3.逆轉錄：逆轉錄試劑盒（或者一步法試劑盒），這一步可以用普通PCR做，也拆團旁可以用水域做。旅橡
4.熒光定量PCR試劑：通常有用SYBR Green Mix做的，但是這里建議你用EvaGreen做，靈敏度和平行性都要好於SYBR Green，並且或冊如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green還需要加一步Rox很麻煩。
5.其他：除了以上的那些還需要離心管、PCR管或板（Axygen反應比較好）、移液槍等，暫時就想到這么多。
E. pcr實驗室都需要哪些儀器
除了PCR儀和凝膠成像儀，還有電泳儀、微型離心機、漩渦振盪器，當然，要是想精細，還得有製作純水的設備
F. 做PCR實驗要准備什麼
PCR技術必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA,然後才進行自動熱循環,最後進行產物鑒定與分析.引物設計與合成目前只能在少數技術力量較強的研究院、所進行,臨床應用只需購買PCR檢測試劑盒就可開展工作,PCR自動熱循環中影響因素很多,對不同的DNA樣品,PCR反應中各種成份加入量和溫度循環參數均不一致.現將幾種主要影響因素介紹如下.
一、溫度循環參數
在PCR自動熱循環中,最關鍵的因素是變性與退火的溫度.如操作範例所示,其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s,共25～30個循環,擴增片段500bp.在這里,每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度後開始計算.在自動熱循環儀內由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s,這一遲滯時間的長短取決於幾個因素,包括反應管類型、壁厚、反應混合液體積、熱源（水浴或加熱塊）以及兩步驟間的溫度差,在設置熱循環時應充分給以重視和考慮,對每一儀器均應進行實測.
關於熱循環時間的另一個重要考慮是兩條引物之間的距離；距離越遠,合成靶序列全長所需的時間也越長,前文給出的反應時間是按最適於合成長度500bp的靶序列擬定的.下面就各種溫度的選擇作一介紹.
1．模板變性溫度變性溫度是決定PCR反應中雙鏈DNA解鏈的溫度,達不到變性溫度就不會產生單鏈DNA模板,PCR也就不會啟動.變性溫度低則變性不完全,DNA雙鏈會很快復性,因而減少產量.一般取90～95℃.樣品一旦到達此溫度宜迅速冷卻到退火溫度.DNA變性只需要幾秒種,時間過久沒有必要；反之,在高溫時間應盡量縮短,以保持Taq DNA聚合酶的活力,加入Taq DNA聚合酶後最高變性溫度不宜超過95℃.
2．引物退火溫度退火溫度決定PCR特異性與產量；溫度高特異性強,但過高則引物不能與模板牢固結合,DNA擴增效率下降；溫度低產量高,但過低可造成引物與模板錯配,非特異性產物增加.一般先由37℃反應條件開始,設置一系列對照反應,以確定某一特定反應的最適退火溫度.也可根據引物的（G+C）%含量進行推測,把握試驗的起始點,一般試驗中退火溫度Ta(annealing temperature)比擴增引物的融解溫度TTm(melting temperature)低5℃,可按公式進行計算：
Ta = Tm - 5℃= 4(G+C)+ 2(A+T) -5℃
其中A,T,G,C分別表示相應鹼基的個數.例如,20個鹼基的引物,如果（G+C）%含量為50%時,則Ta的起點可設在55℃.在典型的引物濃度時（如0.2μmol/L）,退火反應數秒即可完成,長時間退火沒有必要.
3．引物延伸溫度溫度的選擇取決於Taq DNA聚合酶的最適溫度.一般取70～75℃,在72℃時酶催化核苷酸的標准速率可達35～100個核苷酸/秒.每分鍾可延伸1kb的長度,其速度取決於緩沖溶液的組成、pH值、鹽濃度與DNA模板的性質.擴增片段如短於150bp,則可省略延伸這一步,而成為雙溫循環,因Taq DNA聚合酶在退火溫度下足以完成短序列的合成.對於100～300bp之間的短序列片段,採用快速、簡便的雙溫循環是行之有效的.此時,引虧卜物延伸溫度與退火溫度相同.對於1kb以上的DNA片段,可根據片段長度將延伸時間控制在1～7min,與此同時岩告,在PCR緩沖液中需加入明膠或BSA試劑,使Taq DNA聚合酶在長時間內保持良好的活性與穩定性；15%～20%的甘油有助於擴增2.5kb左右或較長DNA片段.
4．循環次數常規PCR一般為25～40個周期.一般的錯誤是循環次數過多,非特異性背景嚴重,復雜度增加.當然循環反應的次數太少,則產率偏低.所以,在保證產物得率前提下,應盡量減少循環次數.
擴增結束後,樣品冷卻並置4℃保存.
二、引物引物設計
要擴增模板DNA,首先要設計兩條寡核苷酸引物,所謂引物,實際上就是兩段與待擴增靶DNA序列互補的寡核苷酸片段,兩引物間距離決定擴增片段的長度,兩引物的5』端決定擴增產物的兩個5』末端位置.由此可見,引物是決定PCR擴增片段長度、位置和結果的關鍵,引物設計也就更為重要.
引物設計的必要條件是與引物互補的靶DNA序列必須是已知的,兩引物之銷棗穗間的序列未必清楚,這兩段已知序列一般為15～20個鹼基,可以用DNA合成儀合成與其對應互補的二條引物,除此之外,引物設計一般遵循的原則包括：
1．引物長度根據統計學計算,長約17個鹼基的寡核苷酸序列在人的基因組中可能出現的機率的為1次.因此,引物長度一般最低不少於16個核苷酸,而最高不超過30個核苷酸,最佳長度為20～24個核苷酸.這樣短的寡核苷酸在聚合反應溫度（通過72℃）下不會形成穩定的雜合體.有時可在5』端添加不與模板互補的序列,如限制性酶切位點或啟動因子等,以完成基因克隆和其他特殊需要；引物5』端生物素標記或熒游標記可用於微生物檢測等各種目的.
有時引物不起作用,理由不明,可移動位置來解決.
2．（G+C）%含量引物的組成應均勻,盡量避免含有相同的鹼基多聚體.兩個引物中（G+C）%含量應盡量相似,在已知擴增片段（G+C）%含量時宜接近於待擴增片段,一般以40%～60%為佳.
3．引物內部應避免內部形成明顯的次級結構,尤其是發夾結構（hairpin structures）.例如：
4．引物之間兩個引物之間不應發生互補,特別是在引物3』端,即使無法避免,其3』端互補鹼基也不應大於2個鹼基,否則易生成「引物二聚體」或「引物二倍體」（Primer dimer）.所謂引物二聚體實質上是在DNA聚合酶作用下,一條引物在另一條引物序列上進行延伸所形成的與二條引物長度相近的雙鏈DNA片段,是PCR常見的副產品,有時甚至成為主要產物.
另外,兩條引物之間避免有同源序列,尤為連續6個以上相同鹼基的寡核苷酸片段,否則兩條引物會相互競爭模板的同一位點；同樣,引物與待擴增靶DNA或樣品DNA的其它序列也不能存在6個以上鹼基的同源序列.否則,引物就會與其它位點結合,使特異擴增減少,非特異擴增增加.
5．引物3』端配對DNA聚合酶是在引物3』端添加單核苷酸,所以,引物3』端5～6個鹼基與靶DNA的配對要求必須精確和嚴格,這樣才能保證PCR有效擴增.
引物設計是否合理可用PCRDESN軟體和美國PRIMER軟體進行計算機檢索來核定.
人工合成的寡核苷酸引於最好經過色譜（層析）純化或PAGE純化,以除去未能合成至全長的短鏈等雜質.純化引物在25%乙腈溶液中4℃保存可阻止微生物的生長；一般情況下,不用的引物應保存在-20℃冰箱中,在液體中引物能保存6個月,凍干後可保存1～2年.
G. 我的實驗室想開展微生物用PCR方法鑒定，請問需要哪些儀器、試劑，還有操作步驟和方法，全過程最好！謝謝！
步驟如下：
1. 細判或菌總DNA的提取
2. 16S rDNA序掘陵伍列的擴增(採用通用引物)
3. PCR產物的回收
4. 16S rDNA產物與T載體的連接
5. E.coli JM109感受態細胞的製作(CaCl2法)
6. 連接產物轉化入E.coli JM109感受態細胞
7. 挑取轉化子並驗證汪扒
8. 測序以及序列比對
9. 系統發育樹的構建
所需儀器及試劑：
PCR儀、冷凍離心機、核酸電泳儀、水浴鍋
DNA提取試劑盒、常用培養基、CaCl2、PCR試劑盒
E.coli JM109菌種、T載體、氨苄青黴素（由你載體類型決定）
O(∩_∩)O~，希望對你有用
H. 逆轉錄PCR的實驗步驟用到哪些試劑和儀器
一、實驗器具與材料：
1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl
2、吸頭：1ml、200μl、20μl
3、勻漿管：5ml
4、吸頭台：放置1ml吸頭的一個，放置20μl吸頭的一個
5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl
6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，帶蓋）；1個125ml的白色試劑瓶（放無水乙醇）
7、量筒：50ml、250ml、500ml
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml
9、試管架：5ml、1.5ml、20μl
10、鹽水瓶：250ml、500ml各2個備用，一個裝無水乙醇，另一個裝DEPC水
11、鋁制飯盒：4個
12、塑料小飯盒：1個
13、大瓷缸：2個
14、錫泊紙：一卷
15、卷紙：2卷
16、三角燒瓶：帶蓋，稍大
二、實驗器具的處理與准備
1、塑料製品：（包括槍頭、EP管、勻漿管等）
先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料製品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水，過夜，然後高壓，再烤乾備用，實驗前將槍頭等放入吸頭台，再高壓一次（EP管）
2、玻璃製品：泡酸過夜，沖洗干凈，蒙錫紙烤乾備用（DEPC水泡）（洗凈後先泡1‰DEPC過夜，再烤乾）
3、勻漿器：（包括剪刀、鑷子）先洗凈後，再高壓（不需要泡DEPC）
三、試劑配製：
1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。
2、75%乙醇：用無水乙醇DEPC水配，然後放-20℃保存（其中DEPC水需先高壓）
3、異丙醇：放入棕色瓶中
4、氯仿：放入棕色瓶中
5、瓊脂糖
僅供參考
I. 剛開始做PCR，要准備哪些東西
剛入門，用的SYBE green I ，需要PCR專用槍頭，八連管，目標基因的引物，管家基因(β-actin或)，Trizol、逆轉錄試劑盒、熒光PCR試劑盒、引物等，
J. 要做（mRNA）RT PCR，需要的儀器有哪些
首先，RT不是證明RNA有無表達的很好方法，RT批不出來會有很多原因，並不僅僅是沒有模板。建議你做northern。
做RT需要
1，很乾凈整潔的實驗環境，RNA提取對操作環境的要求很高。
2，電動組織分散儀（IKA公司的T10那種）或研缽+液氮或玻璃組織研磨器，以上提取效果遞減。
3，1.5ml管冷凍離心機。
4，移液槍1ml、200ul、10ul一套，最好專用。
5，紫外分光光度計、石英狹縫比色皿。
6，核酸電泳儀、電泳槽（電泳槽最好專用）
7，RNase
free的各式槍頭、1.5ml離心管；RNase
free的雙蒸水。
8，如果樣品不會立即進入下一步實驗，建議具備超低溫冰箱。