凱氏蒸餾裝置自動

Ⅰ 凱氏蒸餾裝置燒瓶水往外溢怎麼辦

減壓 減少添加硫酸鉀

Ⅱ 凱氏定氮法的儀器

定氮儀NAI-DTY是按照GB/T 19227-2008研製的新型定氮儀，它具有消解時間短、分析速度快、取樣量少、操作步驟簡單，以及測量結果准確等優點。
1. 凱氏定氮儀，採用微電腦進行過程式控制制，包括手動模式和自動模式，可根據您的需要自行設定和切換：
自動模式下：一次完成加鹼、加硼酸、蒸餾，氨氣吸收整個過程，加硼酸和加鹼的體積以及蒸餾和吸收過程的時間都可以自行設定。
人工模式下：加硼，加鹼 和蒸餾吸收三個過程可以單獨人工操作，體積，時間自行控制，滿足專業用戶需求。
2.大屏幕點陣式液晶顯示，全中文菜單，觸摸式按鈕，操作簡捷方便。
3.自動式蒸餾控制、自動加水、自動水位控制、自動停水和水壓過低報警。
4.各種安全保護：消化管安全門裝置，蒸汽發生器缺水報警。
5.可存儲操作程序。
6.儀器外殼採用特製噴塑鋼板，工作區域採用ABS防腐板及不銹鋼底板。
7.防化學試劑腐蝕和機械損壞表面，耐酸耐鹼。
8.水位檢測、低水位報警，自動斷電。
9.標配里不含消化爐，消化爐為選配，建議選擇C型消化爐。

Ⅲ 做凱氏定氮蒸餾的時候反應室里的水為什麼排不出來，用的是玻璃蒸餾裝置，半微量的

這應該是排水系統問題吧。你去問排水的吧。

Ⅳ 凱氏定氮法測定食品中蛋白質含量的原理和基本操作方法是什麼

原理：有機含氮化合物與濃硫酸共熱消化，氮轉化為氨，再與硫酸結合成硫酸銨。硫酸銨與強鹼反應，放出氨。將氨蒸餾到過量的標准無機溶液中，再用標准鹼溶液進行滴定。根據測得的氨量，計算樣品的總氮量。

、試劑與材料：

濃硫酸、硫酸鉀-硫酸銅粉末(稱取80g硫酸鉀和20g硫酸銅(五水)，0.3g二氧化硒研細混合)、30%氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0.01M標准鹽酸、混合指示劑(田氏指示劑)儲存液(取50ml0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅溶液混合，儲存於棕色瓶中備用。此指示劑在PH5.2為紫色;PH為5.4為暗灰色或灰色;PH5.6為綠色;變色點為PH5.4)、硼酸-田氏指示劑混合液(100ml2%硼酸溶液，滴加約1ml田氏指示劑，搖勻後，溶液呈紫紅色)、蛋白質樣品、容量瓶、吸管、凱氏燒瓶、凱氏定氮蒸餾裝置、微量滴定管、電爐

三、操作方法

1、樣品處理：固體樣品，應在105℃乾燥至恆重。液體樣品可直接吸取一定量，也可經適當稀釋後，吸取一定量進行測定，使每一樣品的含氮量在0.2-1.0mg范圍內。

2、消化：取一定量樣品，於50ml乾燥的凱氏燒瓶內。加入300mg硫酸鉀-硫酸銅混合粉末，再加入3ml濃硫酸。用電爐加熱，在通風廚中消化，瓶口加一小漏斗。先以文火加熱，避免泡沫飛濺，不能讓泡沫上升到瓶頸，待泡沫停止發生後，加強火保持瓶內液體沸騰。時常轉動燒瓶使樣品全部消化完全，直至消化液清澈透明。

另取凱氏瓶一個，不加樣品，其它操作相同，作為空白試驗，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質，以對樣品進行校正。

3、蒸餾：將微量凱氏蒸餾裝置洗滌(先用水蒸氣洗滌)干凈。將凱氏燒瓶中的消化液冷卻後，全部轉入100ml的容量瓶，用蒸餾水定容至刻度。

吸取20ml稀釋消化液，置於蒸餾裝置的反應室中，加入10ml30%氫氧化鈉溶液，將玻璃塞塞緊，於漏斗中加一些蒸餾水，作為水封。

取一三角瓶，加入10ml硼酸-田氏指示劑混合液，置於冷凝管之下口，冷凝管口應浸沒在硼酸液面之下，以保證氨的吸收。

加熱水蒸汽發生器，沸騰後，夾緊夾子，凱氏蒸餾。三角瓶中的硼酸-指示劑混合液，吸收蒸餾出的氨，由紫紅色變為綠色。蒸餾15min，讓硼酸液面離開冷凝管口，再蒸1-2min以沖洗冷凝管口。空白試驗按同樣操作進行。

4、滴定：樣品和空白均蒸餾完畢後，用0.01M標准鹽酸滴定，至硼酸-指示劑混合液由綠色變回淡紫色，即為滴定終點。

四、計算 樣品總氮量(mg)=(A-B)×c×14×100/20

式中：A：樣品滴定時消耗的標准鹽酸體積 B：空白滴定時消耗的鹽酸體積 C：標准鹽酸的當量濃度 14：氮的相對分子量 20：用於蒸餾的稀釋消化液體積 100：稀釋消化液的體積

樣品中粗蛋白含量(mg)=樣品總氮量(mg)×6.25

Ⅳ 凱氏定氮儀的使用步驟

蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。
1、儀器的洗滌
儀器安裝前，各部件需經一般方法洗滌干凈，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min，水洗、水煮10min，再水洗數次，然後安裝並固定在一隻鐵架台上。儀器使用前，微量全部管道都須經水蒸氣洗滌，以除去管道內可能殘留的氨，正在使用的儀器，每次測樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器，重復蒸氣洗滌，不得少於三次，並檢查儀器是否正常。仔細檢查各個連接處，保證不漏氣。 首先在蒸氣發生器中加約2/3體積蒸餾水，加入數滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，並放入少許沸石（或毛細管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經插管流入反應室，但玻杯內的水不要放光，塞上棒狀玻塞，保持水封，防止漏氣。蒸氣發生後，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣只能進入反應室，導致反應室內的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應室上埠通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發燙開始計時，連續蒸煮5min，然後移開煤氣燈。沖洗完畢，夾緊蒸氣發生器與收集器之間的連接橡膠管，由於氣體冷卻壓力降低，反應室內廢液自動抽到反應室外殼中，打開廢液排出口夾子放出廢液。如此清洗2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內部已洗干凈。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝器下口，關閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用。
2、無機氮標准樣品的蒸餾吸收
由於定氮操作繁瑣，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術，初學者宜先用無機氮標准樣品進行反復練習，再進行有機氮未知樣品的測定。常用巳知濃度的標准硫酸銨測試三次。 取潔凈的100mL錐形瓶五隻，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基藍-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴，蓋好瓶口待用。取其中一隻錐形瓶承接在冷凝管下端，並使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開收集器活塞，以免錐形瓶內液體倒吸。准確吸取2mL硫酸銨標准液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水沖洗小玻杯3次，一並放人蒸餾瓶中。然後用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液，使鹼液慢慢流入蒸餾瓶中，在鹼液尚未完全流入時，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸餾水，再慢慢打開玻塞，使一半水流入蒸餾瓶，一半留在小玻杯中作水封。關閉收集器活塞，加熱蒸氣發生器，進行蒸餾。錐形瓶中的硼酸-指示劑混合液由於吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時起，再蒸餾3～5min，移動錐形瓶使瓶內液面離開冷凝管下口約lcm，並用少量蒸餾水沖洗冷凝管下口，再繼續蒸餾1min，移開錐形瓶，蓋好，准備滴定。 在一次蒸餾完畢後，移去煤氣燈，夾緊蒸氣發生器與收集器間的橡膠管，排除反應完畢的廢液，用水沖洗小玻杯幾次，並將廢液排除。如此反復沖洗干凈後，即可進行下一個樣品的蒸餾。按以上方法用標准硫酸銨再做兩次。另取2mL蒸餾水代替標准硫酸銨進行空白測定二次。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。
3、未知樣品及空白的蒸餾吸收
將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾吸收。 加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應室中，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次，每次用水量約3mL，洗滌液一並倒入反應室內。其餘操作按標准硫酸銨的蒸餾進行。 由於消化液內硫酸鉀濃度高而呈粘稠狀，不易從凱氏燒瓶內倒出，必須加入熱蒸餾水5 mL稀釋之，如果有結晶析出，必須微熱溶解，趁熱加入玻杯，使其流入反應室。此外，還應當注意趁儀器洗滌尚未完全冷卻時立即加入樣品或空白對照液，否則消化液通過冷卻的管道容易析出結晶，造成堵塞。 樣品和空白蒸餾完畢後，一起進行滴定。打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的標准鹽酸溶液進行滴定。待滴至瓶內溶液呈暗灰色時，用蒸餾水將錐形瓶內壁四周淋洗一次。若振搖後復現綠色，應再小心滴入標准鹽酸溶液半滴，振搖觀察瓶內溶液顏色變化，暗灰色在一二分鍾內不變，當視為到達滴定終點。若呈粉紅色，表明已超越滴定終點，可在已滴定耗用的標准鹽酸溶液用量中減去0.02mL，每組樣品的定氮終點顏色必須完全一致。空白對照液接受瓶內的溶液顏色不變或略有變化尚未出現綠色，可以不滴定。記錄每次滴定耗用標准鹽酸溶液毫升數，供計算用。

Ⅵ 發煙硝酸瓶裝有什麼方法密封有圖片嗎我公司生產的500m1發煙硝酸，瓶蓋總是裂開

飼料中粗蛋白測定方法（畜禽飼料與添加劑）
本標准參照採用ISO 5983―1979 《動物飼料——氮含量的測定和粗蛋白含量計算》。
1 主題內容與適用范圍 本標准規定了飼料中粗蛋白含量的測定方法。 本標准適用於配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2 引用標准 GB 601 化學試劑滴定分析（容量分析）用標准溶液的制備
3 原理 凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
4 試劑
4.1 硫酸（GB 625）：化學純，含量為98％，無氮。
4.2 混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結晶水（GB 665），6g硫酸鉀（HG 3—920）或硫酸鈉（HG 3—908），均為化學純，磨碎混勻。
4.3 氫氧化鈉（GB 629）：化學純，40％水溶液（m／V）。
4.4 硼酸（GB 628）：化學純，2％水溶液（m／V）。
4.5 混合指示劑：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
4.6 鹽酸標准溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按GB 601制備。
4.6.1 鹽酸標准溶液：c（HCl）＝0.1mol／L。8.3mL鹽酸（GB 622，分析純），注入 1000mL蒸餾水中。
4.6.2 鹽酸標准溶液：c（HCl）＝0.02mol／L。1.67mL鹽酸（GB 622，分析純），注入1000mL蒸餾水中。
4.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析純。
4.8 硫酸銨（GB 1396）：分析純，乾燥。
4.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。
5 儀器設備
5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。
5.2 分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。
5.3 分析天平：感量0.0001g。
5.4 消煮爐或電爐。
5.5 滴定管：酸式，10、25mL。
5.6 凱氏燒瓶：250mL。
5.7 凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式。
5.8 錐形瓶：150、250mL。
5.9 容量瓶：100mL。
5.10 消煮管：250mL。
5.11 定氮儀：以凱氏原理製造的各類型半自動，全自動蛋白質測定儀。6 試樣的選取和制備 選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分的變化。
7 分析步驟
7.1 仲裁法
7.1.1 試樣的消煮
稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入凱氏燒瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化劑（4.2），與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶（5.6）置於電爐（5.4）上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力（360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，至少2h。
7.1.2 氨的蒸餾（蒸餾步驟的檢驗見附錄A）
7.1.2.1 常量蒸餾法 將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入60～100mL蒸餾水，搖勻，冷卻。將蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶內。然後小心地向凱氏燒瓶（5.6）中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3），輕輕搖動凱氏燒瓶（5.6），使溶液混勻後再加熱蒸餾，直至流出液體積為100mL。降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續蒸餾1～2min，並用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
7.1.2.2 半微量蒸餾法 將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入20mL蒸餾水，轉入100mL容量瓶中，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶（5.8）內。蒸汽發生器 （5.7）的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。准確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置（5.7）的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶（5.8）使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。 註：7.1.2.1和7.1.2.2蒸餾法測定結果相近，可任選一種。
7.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗 精確稱取0.2g硫酸銨（4.8），代替試樣，按7.1.2或7.2.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加鹼、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
7.1.3 滴定 用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸餾後的吸收液立即用0.1mol／L（ 4. 6. 1）或0 .02mol／L（4.6.2）鹽酸標 准溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
7.2 推薦法
7.2.1 試樣的消煮 稱取0.5～1g試樣（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（儀器自備）或6.4g混合催化劑（4.2），12mL硫酸（4.1），於420℃下在消煮爐上 消化1h。取出放涼後加入30mL蒸餾水。7.2.2 氨的蒸餾 採用全自動定氮儀（5.11）時，按儀器本身常量程序進行測定。 採用半自動定氮儀（5.11）時，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以25mL硼酸（4.4）為吸收液，加入2滴混合指示劑（4.5），蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內，然後向消煮管中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3）進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL時為宜。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內。7.2.3 滴定 用0.1mol／L的標准鹽酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
8 空白測定 稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第7章進行空白測定，消耗0.1mol／L鹽酸標准溶液（4.6.1）的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol／L鹽酸標准溶液（4.6.2）體積不得超過0.3mL。
9 分析結果的表述
9.1 計算見下式：
粗蛋白質（％）＝（V2－V1）c×0.0140×6.25／（m×V′／V）
式中： V2—— 滴定試樣時所需標准酸溶液體積，mL；
V1—— 滴定空白時所需標准酸溶液體積，mL；
C—— 鹽酸標准溶液濃度，mol／L；
m—— 試樣質量，g；
V—— 試樣分解液總體積，mL；
V′—— 試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140—— 與1.00mL鹽酸標准溶液〔c（HCl）＝1.000mol／L〕相當的、以克表示的氮的質量。 6.25—— 氮換算成蛋白質的平均系數。
9.2 重復性 每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。 當粗蛋白質含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。 當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。 當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。

我有個現成的 其他的我現在沒時間 你自己找吧
http://www.china-animal.com.cn/standard/article/2006-10-20/2253-1.htm
牧草我沒做過 如果粗蛋白的含量比較低的話建議取樣加倍

補充一下
．飼料中Ca的測定方法 GB/T 6436-92

1. 簡述：本標准適應於配合飼料，濃縮料，預混合料和單一飼料。
2. 原理：將試樣中有機物破壞，使鈣溶解制備成溶液，用三乙醇胺、乙二胺、和澱粉溶液消除干擾離子的影響，在鹼性溶液中以鈣黃綠素為指示劑，用EDTA標准溶液絡合滴定鈣，可快速測定鈣的含量。
3. 試劑：
1) 鹽酸羥胺（AR）；
2) 鹽酸 1+1（V1+V2）；
3) 氫氧化鉀溶液 200g/L；
4) 三乙醇胺水溶液1+1( V1+V2)；
5) 乙二胺水溶液1+1（V1+V2）；
6) 澱粉溶液；10 g/L （1%） 稱取1 g可溶性澱粉加入200ml燒杯中，加5ml水潤濕。加95ml沸水攪勻，煮沸，冷卻備用（現配現用）；
7) 孔雀綠水溶液：1 g/L；
8) 鈣黃綠素-甲基百里香酚藍指示劑：0.1g鈣黃綠素與0.10g甲基麝香草酚藍與0.3克百里香酚藍，5g氯化鉀研細混勻，貯存於磨口瓶中備用；
9) EDTA 標准滴定溶液 (對鈣的滴定度為0.4 g/ml)。
4.試樣制備:
方法: 稱取試樣適量(預混料1 g，濃縮料，全價料，魚粉等 2-4 g 於坩堝中)，精密稱定，在電爐上小心炭化，再加入高溫爐於550oC下灼燒3h（或測定粗灰分連續進行），在盛灰坩堝中加入鹽酸溶液（1+1）10ml，小心煮沸，冷卻至室溫，將此溶液過濾（脫脂棉）轉入容量瓶中（100ml），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
5．測定
准確移取試樣分解液5 ml，加水50 ml，加澱粉溶液10 ml，三乙醇胺2 ml， 乙二胺1 ml， 1滴孔雀石綠，滴加氫氧化鉀溶液10 ml，加0.1g鹽酸羥胺(每滴一種試劑都需搖勻)，加鈣黃綠素少許，在黑色背景下立即用EDTA標准滴定溶液，滴定至綠色消失呈現紫紅色為滴定終點.

6． 計算
鈣的含量：X（%）=
式中： T--------EDTA標准滴定溶液對鈣的滴定度，mg/ml
V0-------試樣分解液的總體積，ml
V1-------分取試樣分解液的體積，ml
V2--------實際消耗EDTA標准滴定溶液的體積，ml
m---------試樣的質量，g
所得結果應表示至二位小數

7． 重復性：
每一試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
含鈣量在5%以上，允許相對偏差3%；
含鈣量5%--1%時，允許相對偏差5%；
含鈣量1%以下，允許相對偏差10%。

四．飼料中總磷量的測定方法。分光 光度法 CB/T 6437—92
1． 簡述：本標准適應於配合飼料、濃縮飼料、預混合飼料和單一飼料。
測定范圍磷含量 0——20mg/ml。
2． 方法原理：
將試樣中的有機物破壞，使磷游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH )3PO4NH4VO316MoO3，，在波長420mm下進行比色測定。
3． 試劑：
1) 鹽酸（1+1水溶液） 硝酸 高氯酸
2) 釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，加硝酸250ml，另稱取鉬酸銨25g，加水400ml加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容成1000ml。避光保存，若生成沉澱，則不能繼續使用。（註：鉬酸銨倒入偏釩酸銨中）。
3) 磷標准液：將磷酸二氫鉀在105oC乾燥1h，在乾燥器中冷卻後稱取0.2195g溶解於水，定量轉入1000ml容量瓶中，加入硝酸3ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50mg/ml的磷標准液。
4. 試樣的分解
干法: 與Ca測定試樣的制備方法一致，在實際中，Ca，P 使用同一分解液.
5. 標准曲線的制備：
准確移取磷酸標准液，取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0ml於50ml容量瓶中，各加釩鉬酸銨顯色劑10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，常溫下放置10min以上，以0ml溶液為參比，用10mm比色池，在420nm波長下，用分光光度計測定各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標准曲線。
6．試樣的測定：
准確移取試樣分解液0.5ml—10ml（含磷量50—750mg）（實際中取0.5ml）於50ml容量瓶中，加入釩鉬酸胺顯色劑10ml，按5的方法顯色和比色測定，測得試樣分解液的吸光度，用標准曲線查得試樣分解液的含磷量。
7． 計算：
樣品中總磷含量（P%）=
式中： m---------試樣的質量，g；
m1----------由標准曲線查得試樣分解液磷含量，mg；
V1---------移取試樣分解液的體積，ml；
V-------試樣分解液的總體積，ml；
所得到的結果應精確到0.01%
8． 允許差
每個試樣稱取兩個平行樣品進行測定，以其算術平均值為測定結果，其間分析結果的相對偏差不大於下表所列相對允許偏差：
磷含量 % 允許偏差 %
＞0.5 10
≥0.5 3

五、飼料中粗灰分的測定方法
1、 簡述：本標准適用於配合飼料、濃縮飼料及各種單一飼料中粗灰分的測定。
2、 方法原理：
試料在550℃灼燒後所得殘渣，用質量百分率來表示。殘渣中主要是氧化物、鹽類等礦物質，也包括混入飼料中的砂石、土等，故稱粗灰分。
3、 測定步驟：
將干凈坩堝放入高溫爐，在550±20℃下灼燒30min，取出，在空氣中冷卻約1min，放入乾燥器冷卻30min，稱其質量。再重復灼燒冷卻至恆重。
在已恆重的坩堝中稱取2g試料，精密稱定，在電爐上小心炭化，在炭化過程中，應將試料在較低溫度狀態加熱灼燒至無煙，爾後升溫灼燒至樣品無炭粒，再放入高溫爐，於550±20℃下灼燒3h。取出，在空氣中冷卻約1min，放入乾燥器冷卻至30min，稱取質量。再同樣灼燒1h，至恆重。
4、 計算結果：

式中： m0——為恆重空坩堝質量，（g）；
m1——為坩堝加試料後質量，（g）；
m2——為灰化後坩堝加灰分的質量，（g）；
所得結果應表示至0.01%
5、 允許誤差：
粗灰分含量在5%以上，允許相對偏差為1%；
灰分含量在5%以下，允許相對偏差為5%。

六、飼料中水溶性氯化物的測定方法 快速測定法（GB/T 6439-92）
1． 簡述：本標准用於測定配合飼料和單一飼料中水溶性氯化物的測定，以及原料中水溶性氯化物的測定。
2． 方法原理：使試樣中氯離子溶解於水中，用硝酸銀標准滴定液使氯化物形成氯化銀沉澱，過量的硝酸銀使鉻酸鉀指示液變色。
3． 試劑：
1) 10%的鉻酸鉀指示劑
2) 0.1mol/L硝酸銀標准滴定液（
4． 測定方法：
稱取5-10g樣品，准確至0.001g，准確加蒸餾水100ml，攪拌15min，放置至澄清（或過濾），准確移取上清液25ml，10%鉻酸鉀指示劑1ml，用硝酸銀標准溶液滴定，呈現出磚紅色，且1min不褪色為終點。
5． 計算：

式中：V0——試樣稀釋的總體積，ml；
V2——滴定用硝酸銀溶液的體積，ml；
V1——移取試液的體積，ml；
C——硝酸銀溶液的麾爾濃度，mol/L；
m——稱取試樣的重量，g；
實際中：V0=100ml；V1=25ml；

氯含量在3%以下（含3%），允許絕對誤差0.05；氯含量在3%以上，允許相對偏差3%。

七、飼料中粗蛋白的測定方法 GB/T 6432—1994
1、 簡述：本標准適用於配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2、 原理：凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮量轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
3、 試劑：
1) 硫酸：化學純、含量為98%，無氮；
2) 混合催化劑：0.4g硫酸銅，6g硫酸鉀或硫酸鈉，磨碎混合均勻；
3) 氫氧化鈉：40%水溶液（m/v）；
4) 硼酸：2%水溶液；
5) 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
6) 鹽酸標准溶液：0.1mol/L（8.3ml鹽酸注入1000ml蒸餾水中）。
標定：
4、 試樣的消煮：
稱取試樣0.5g，精密稱定，放入凱氏燒瓶中，加入3.4g混合催化劑，再加和10ml濃硫酸和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置於電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，共加熱3小時。
5、 常量蒸餾法
將試樣消煮液冷卻，加入60~100ml蒸餾水，搖勻，冷水冷卻。將蒸餾裝置的冷凝管來端浸入裝有50ml硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內。然後小心地向凱氏燒瓶中加入50ml氫氧化鈉溶液，輕輕搖動凱氏並行瓶，使溶液混勻後再加熱蒸餾，直至流出液體積為100ml。降下錐形瓶使冷凝管末端離開液面，繼續蒸餾1~2min，並用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
6、 蒸餾步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按上述步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.1g±0.2%，否則應檢查加鹼，蒸餾和滴定各步驟是否正確。
7、 滴定
用0.1mol\L的標准鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍色變成灰紅色為終點。
8、 計算：

式中： V2——滴定試樣時所需用的標准鹽酸溶液的體積，ml；
V1——滴定空白時所需標准鹽酸溶液的體積，ml；
C——鹽酸的標准溶液的濃度，mol/L；
m——稱取試樣的質量，g。
0.0140——每毫克當量氮的克數；
6.25——氮換算成蛋白質的平均系數。
9、 重復性
每個試樣的平行樣進行測定，以其算術平均什為結果。
當粗蛋白質在25%以上時，允許相對偏差為1%；
當粗蛋白質在10%~25%之間時，允許相對偏差為2%；
當粗蛋白質在10%以下時，允許相對偏差為3%。

真蛋白的檢測

1）稱1克樣品於200ml燒杯中
2）加50ml水煮沸
3）加10%硫酸銅20ml
4）加2.5%氫氧化鈉20ml邊加邊攪拌
5）放置1小時後過濾
6）用70度的熱水反復洗殘渣,直到濾液無硫酸根離子為止
7）放入烘箱65~75度,乾燥兩個小時
8）其餘和做粗蛋白一樣(硫酸過量一點)

八、飼料中粗脂肪測定方法。GB/T 6433—1994
1、 簡述：本標准適用於各種單一、混合飼料和預混料中粗脂肪的測定方法。
2、 方法原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取試樣，稱提取物的重量，除脂肪外還有有機酸，磷脂、脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結果稱粗脂肪或乙醚提取物。
3、 試劑與儀器
2) 無水乙醚（AR）
3) 索氏脂肪提取器（帶球形冷凝管）：100或150ml。
4) 索氏脂肪提取儀。
4、 使用索氏脂肪提取器測定：
索氏提取器應乾燥無水。抽提瓶（內有沸石數粒）在105±2℃烘箱中烘乾60min，乾燥器中冷卻30min，稱重，再烘乾30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小於0.0008g為恆重。
稱取試樣1---5g，於濾紙筒中，或用濾紙包好，放入105℃烘箱中，烘乾120min（或稱測水分後的干試樣，折算成風干樣重），濾紙筒應高於提取器虹吸管的高度，濾紙包長度應以可全部浸泡於乙醚中為准。將濾紙筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加無水乙醚60----100ml，在60---75℃的水浴（用蒸餾水）上加熱，使乙醚迴流，控制乙醚迴流次數為每小時約10次，共迴流約50次（含油高的試樣約70次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發後不留下油跡為抽提終點。（將試樣在無水乙醚中浸泡三小時，效果更佳）
取出試樣，仍用原提取器回收乙醚直到抽提瓶全部收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去殘余乙醚，擦凈瓶外壁。將抽提瓶放入105+-2℃烘箱中烘乾120min，乾燥器中冷卻30min稱重，再烘乾30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小於0.001g這恆重。
5、 計算：
粗脂肪（%）=
式中：m-----風干試樣重量，g
m1-----已恆重的抽提瓶重量，g；
m2----已恆重的盛有脂肪的抽提瓶重量，g.
6、 重復性
每個試樣取兩平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
粗脂肪含量在10%以上（含10%）允許相對偏差為3%。
粗脂肪含量在10%以下時，允許相對偏差為5%。

九、飼料中粗纖維的測定
1 適用范圍
本標准規定了飼料中粗纖維含量的測定方法。適用於各種混合飼料、配合飼料、濃縮飼料及單一飼料。
2、 原理
用濃度准確的酸和鹼，在特定條件下消煮樣品，再用乙醇除去可溶物，經高溫灼燒扣除礦物質的量，所餘量為粗纖維，它不是一個確切的化學實體，只是在公認強制規定的條件下測出的概略成分，其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質素。
3、 試劑
3.1 硫酸溶液0.128±0.005mol/L：
3.2 氫氧化鈉溶液，0.313±0.005mol/L：
3.3 酸洗石棉、95％乙醇、乙醚、正辛醇（防泡劑）。
4.4消煮器：有冷凝球的600mL高型燒杯或有冷凝管的錐形瓶。
4.5抽濾裝置：抽真空裝置，吸濾瓶和漏斗。（濾器使用200目不銹鋼網或尼龍濾布）
4. 6古氏坩堝：30mL，預先加入酸洗石棉懸浮液30mL（內含酸洗石棉0.2～0.3g）再抽干，以石棉厚度均勻，不透光為宜。上下鋪兩層玻璃纖維有助於過濾。
7、 分析步驟
7.1 仲裁法
稱取1～2g試樣，准確至0.0002g，用乙醚脫脂（含脂肪大於10％必須脫脂，含脂肪不大於10％，可不脫脂），放入消煮器（或大的三角燒瓶中），加濃度准確且已沸騰的硫酸溶液（3.1）200mL和1滴正辛醇，立即加熱，應使其在2min內沸騰，調整加熱器，使溶液保持微沸，且連續微沸30min，注意保持硫酸濃度不變。試樣不應離開溶液沾到瓶壁上。隨後抽濾，殘渣用沸蒸餾水洗至中性後抽干。用濃度准確且已沸騰的氫氧化鈉溶液（3.2）將殘渣轉移至原容器中並加至200mL，同樣准確微沸30min，立即在鋪有石棉的古氏坩堝上過濾，先用25mL硫酸溶液洗滌，用沸蒸餾水洗至中性，再用15mL乙醇洗滌，抽干。將坩堝放入烘箱，於130±2℃下烘乾2h，取出後在乾燥器中冷卻至室溫，稱重，再於550±25℃高溫爐中灼燒30min，取出後於乾燥器中冷卻至室溫後稱重。
7.2 推薦法
稱1～2g試樣（脫脂步驟同手工方法）於G2玻璃沙漏斗中，用坩堝夾將漏斗插入熱萃取器；從頂部加入預先煮沸的硫酸溶液200mL和兩滴正辛醇，將加熱旋扭開到最大位置，待溶液沸騰後，將旋扭調到合適位置，使溶液保持微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，加入預先煮沸的氫氧化鈉溶液200mL，同樣准確微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，將坩堝轉移至冷萃取器，加入25mL95％乙醇，抽干，將漏斗轉移到烘箱，於130±2℃下烘乾2h，取出後在乾燥器中冷卻至室溫，稱重。再放入500±25℃高溫爐中灼燒1h，乾燥器中冷卻至室溫後稱重。型號不同的儀器具體操作步驟見該儀器使用說明書。
8 測定結果的計算
8.1 計算公式
粗纖維（％）＝（m1－m2）/m
式中：m1——130℃烘乾後坩堝及試樣殘渣重，g；
m2——550℃（或500℃）灼燒後坩堝及試樣殘渣重，g；
m—— 試樣（未脫脂）質量，g。
8.2 重復性
每個試樣取兩平行樣進行測定，以算術平均值為結果。
粗纖維含量在10％以下，絕對值相差0.4。粗纖維含量在10％以上，相對偏差為4％。

Ⅶ 測定蛋白質含量只有凱氏定氮法嗎

當然不是
一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法
樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例，其反應式如下：
nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)
2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)
(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)
反應（1）、(2)在凱氏瓶內完成，反應（3）在凱氏蒸餾裝置中進行。
為了加速消化，可以加入cuso4作催化劑，k2so4以提高溶液的沸點。收集氨可用硼酸溶液，滴定則用強酸。實驗和計算方法這里從略。
計算所得結果為樣品總氮量，如欲求得 樣品中蛋白含量，應將總氮量減去非蛋白
氮即得。如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量，即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、雙縮脲法（biuret法）
（一）實驗原理
雙縮脲（nh3conhconh3）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。
紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1-10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。
（二）試劑與器材
1. 試劑：
（1）標准蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白（bsa）或標准酪蛋白，配製成10mg/ml的標准蛋白溶液，可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。如有需要，標准蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標准蛋白質溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配製，酪蛋白用0．05n naoh配製。
（2）雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（cuso4•5h2o）和6.0克酒石酸鉀鈉（knac4h4o6•4h2o），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑料瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。
2. 器材：
可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標准蛋白質溶液，用水補足到1毫升，然後加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻後，在室溫（20～25℃）下放置30分鍾，於540nm處進行比色測定。用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質的含量為橫座標，光吸收值為縱座標繪制標准曲線。
2、樣品的測定：取2～3個試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。

三、folin—酚試劑法（lowry法）
（一）實驗原理
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難（現在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是：在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。
folin—酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以後在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要精確控制操作時間，標准曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應。而且對後者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色後會色淺，則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。
進行測定時，加folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定，但上述還原反應只在ph=10的情況下發生，故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。
此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測定。
此法可檢測的最低蛋白質量達5mg。通常測定范圍是20~250mg。
（二）試劑與器材
1.試劑
（1）試劑甲：
（a）10克 na2co3，2克 naoh和0.25克酒石酸鉀鈉 （knac4h4o6•4h2o）。溶解於500毫升蒸餾水中。
（b）0.5克硫酸銅（cuso4•5h2o）溶解於100毫升蒸餾水中，每次使用前，將50份（a）與1份（b）混合，即為試劑甲。
（2）試劑乙：在2升磨口迴流瓶中，加入100克鎢酸鈉（na2wo4•2h2o）,25克鉬酸鈉（na2moo4•2h2o）及700毫升蒸餾水，再加50毫升85%磷酸，100毫升濃鹽酸，充分混合，接上迴流管，以小火迴流10小時，迴流結束時，加入150克硫 酸 鋰（li2so4），50毫升蒸餾水及數滴液體溴，開口繼續沸騰15分鍾，以便驅除過量的溴。冷卻後溶液呈黃色（如仍呈綠色，須再重復滴加液體溴的步驟）。稀釋至1升，過濾，濾液置於棕色試劑瓶中保存。使用時用標准naoh滴定，酚酞作指示劑，然後適當稀釋，約加水1倍，使最終的酸濃度為1n左右。
（3）標准蛋白質溶液: 精確稱取結晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白，溶於蒸餾水，濃度為250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶於水若混濁，可改用0.9%nacl溶液。
2. 器材
（1）可見光分光光度計
（2）旋渦混合器
（3）秒錶
（4）試管16支
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標准蛋白質溶液（濃度為250mg/ml）。用水補足到1.0毫升，然後每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，於室溫（20～25℃）放置10分鍾。再逐管加入0.5毫升試劑乙（folin—酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然後在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質的量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪制出標准曲線。
注意：因lowry反應的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間，即第1支試管加入5毫升試劑甲後，開始計時，1分鍾後，第2支試管加入5毫升試劑甲，2分鍾後加第3支試管，余此類推。全部試管加完試劑甲後若已超過10分鍾，則第1支試管可立即加入0.5毫升試劑乙，1分鍾後第2支試管加入0.5毫升試劑乙，2分鍾後加第3支試管，余此類推。待最後一支試管加完試劑後，再放置30分鍾，然後開始測定光吸收。每分鍾測一個樣品。
進行多試管操作時，為了防止出錯，每位學生都必須在實驗記錄本上預先畫好下面的表格。表中是每個試管要加入的量（毫升），並按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。最下面兩排是計算出的每管中蛋白質的量（微克）和測得的吸光度值。
folin—酚試劑法實驗表

管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
標准蛋白質 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
（250mg/ml）
未知蛋白質 0.2 0.4 0.6
（約250mg/ml）
蒸餾水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4
試劑甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
試劑乙 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
每管中蛋白質的量（mg）
吸光度值（a700）
2. 樣品的測定：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質20~250微克），按上述方法進行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。通常樣品的測定也可與標准曲線的測定放在一起，同時進行。即在標准曲線測定的各試管後面，再增加3個試管。如上表中的8、9、10試管。
根據所測樣品的吸光度值，在標准曲線上查出相應的蛋白質量，從而計算出樣品溶液的蛋白質濃度。
注意:由於各種蛋白質含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，顯色的深淺往往隨不同的蛋白質而變化。因而本測定法通常只適用於測定蛋白質的相對濃度（相對於標准蛋白質）。

四、改良的簡易folin—酚試劑法
（一）試劑
1. 試劑甲：鹼性銅試劑溶液中，含0.5n naoh、10%na2co3、0.1%酒石酸鉀和0.05%硫酸銅，配製時注意硫酸銅用少量蒸餾水溶解後，最後加入。2. 試劑乙：與前面的基本法相同。臨用時加蒸餾水稀釋8倍。
3. 標准蛋白質溶液：同基本法。
（二）操作步驟
測定標准曲線與樣品溶液的操作方法與基本法相同。只是試劑甲改為1毫升，室溫放置10分鍾後，試劑乙改為4毫升。在55℃恆溫水浴中保溫5分鍾。用流動水冷卻後，在660nm下測定其吸光度值。
改良的快速簡易法，可獲得與 folin—酚試劑法（即lowry基本法）相接近的結果。
五、考馬斯亮蘭法（bradford法）
（一）實驗原理
雙縮脲法（biuret法）和folin—酚試劑法（lowry法）的明顯缺點和許多限制，促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。
1976年由bradford建立的考馬斯亮蘭法（bradford法），是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點，因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。
考馬斯亮蘭g-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm變為595nm，溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。經研究認為，染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結合。
在595nm下測定的吸光度值a595，與蛋白質濃度成正比。
bradford法的突出優點是：
（1）靈敏度高，據估計比lowry法約高四倍，其最低蛋白質檢測量可達1mg。這是因為蛋白質與染料結合後產生的顏色變化很大，蛋白質－染料復合物有更高的消光系數，因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比lowry法要大的多。
（2）測定快速、簡便，只需加一種試劑。完成一個樣品的測定，只需要5分鍾左右。由於染料與蛋白質結合的過程，大約只要2分鍾即可完成，其顏色可以在1小時內保持穩定，且在5分鍾至20分鍾之間，顏色的穩定性最好。因而完全不用像lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。
（3）干擾物質少。如干擾lowry法的k+、na+、mg2+離子、tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、edta等均不幹擾此測定法。
此法的缺點是：
（1）由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此bradford法用於不同蛋白質測定時有較大的偏差，在製作標准曲線時通常選用 g—球蛋白為標准蛋白質，以減少這方面的偏差。
（2）仍有一些物質干擾此法的測定，主要的干擾物質有：去污劑、 triton x-100、十二烷基硫酸鈉（sds）和0.1n的naoh。（如同0.1n的酸干擾lowary法一樣）。
（3）標准曲線也有輕微的非線性，因而不能用beer定律進行計算，而只能用標准曲線來測定未知蛋白質的濃度。
（二）試劑與器材
1. 試劑：
（1）標准蛋白質溶液，用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(bsa)，配製成1.0mg/ml和0.1mg/ml的標准蛋白質溶液。
（2）考馬斯亮蘭g—250染料試劑：稱100mg考馬斯亮蘭g—250，溶於50ml 95%的乙醇後，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀釋至1升。
2. 器材：
（1）可見光分光光度計
（2）旋渦混合器
（3）試管16支
（三）操作方法
1. 標准方法
（1）取16支試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分為兩組按表中順序，分別加入樣品、水和試劑，即用1.0mg/ml的標准蛋白質溶液給各試管分別加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然後用無離子水補充到0.1ml。最後各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭g—250試劑，每加完一管，立即在旋渦混合器上混合（注意不要太劇烈，以免產生大量氣泡而難於消除）。未知樣品的加樣量見下表中的第8、9、10管。
（2）加完試劑2-5分鍾後，即可開始用比色皿，在分光光度計上測定各樣品在595nm處的光吸收值a595，空白對照為第1號試管，即0.1mlh2o加5.0mlg—250試劑。
注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用後立即用少量95%的乙醇盪洗，以洗去染色。塑料比色皿決不可用乙醇或丙酮長時間浸泡。

考馬斯亮蘭法實驗表
管 號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
標准蛋白質 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
(1.0mg/ml)
未知蛋白質 0.02 0.04 0.06
(約1.0mg/ml)
蒸餾水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04
考馬斯亮藍
g－250試劑 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
每管中的蛋
白質量（mg）
光吸收值
（a595）
（3）用標准蛋白質量（mg）為橫座標，用吸光度值a595為縱座標，作圖，即得到一條標准曲線。由此標准曲線，根據測出的未知樣品的a595值，即可查出未知樣品的蛋白質含量。
0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的a595約為0.50。
2. 微量法
當樣品中蛋白質濃度較稀時（10－100mg/ml）,可將取樣量（包括補加的水）加大到0.5ml或1.0ml, 空白對照則分別為0.5ml或1.0ml h2o, 考馬斯亮藍g－250試劑仍加5.0ml, 同時作相應的標准曲線，測定595nm的光吸收值。
0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的a595約為0.29。
六、紫外吸收法
蛋白質分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，使蛋白質具有吸收紫外光的性質。吸收高峰在280nm處，其吸光度（即光密度值）與蛋白質含量成正比。此外，蛋白質溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。利用一定波長下，蛋白質溶液的光吸收值與蛋白質濃度的正比關系，可以進行蛋白質含量的測定。
紫外吸收法簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定後仍能回收使用。低濃度的鹽，例如生化制備中常用的（nh4）2so4等和大多數緩沖液不幹擾測定。特別適用於柱層析洗脫液的快速連續檢測，因為此時只需測定蛋白質濃度的變化，而不需知道其絕對值。
此法的特點是測定蛋白質含量的准確度較差，干擾物質多，在用標准曲線法測定蛋白質含量時，對那些與標准蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質，有一定的誤差。故該法適於用測定與標准蛋白質氨基酸組成相似的蛋白質。若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。核酸的干擾可以通過查校正表，再進行計算的方法，加以適當的校正。但是因為不同的蛋白質和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經過校正，測定的結果還是存在一定的誤差。
此外，進行紫外吸收法測定時，由於蛋白質吸收高峰常因ph的改變而有變化，因此要注意溶液的ph值，測定樣品時的ph要與測定標准曲線的ph相一致。
下面介紹四種紫外吸收法：
1. 280nm的光吸收法
因蛋白質分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm處具有最大吸收，且各種蛋白質的這三種氨基酸的含量差別不大，因此測定蛋白質溶液在280nm處的吸光度值是最常用的紫外吸收法。
測定時，將待測蛋白質溶液倒入石英比色皿中，用配製蛋白質溶液的溶劑（水或緩沖液）作空白對照，在紫外分光度計上直接讀取280nm的吸光度值a280。蛋白質濃度可控制在0.1～1.0mg/ml左右。通常用1cm光徑的標准石英比色皿，盛有濃度為1mg/ml的蛋白質溶液時，a280約為1.0左右。由此可立即計算出蛋白質的大致濃度。
許多蛋白質在一定濃度和一定波長下的光吸收值（a1％1cm）有文獻數據可查，根據此光吸收值可以較准確地計算蛋白質濃度。下式列出了蛋白質濃度與（a1％1cm）值（即蛋白質溶液濃度為1%，光徑為1cm時的光吸收值）的關系。文獻值a1％1cm,?稱為百分吸收系數或比吸收系數。
蛋白質濃度 = (a280′10 )/ a1％1cm,280nm (mg/ml)
(q 1%濃度?10mg/ml)
例：牛血清清蛋白 ： a1％1cm=6.3 (280nm)
溶菌酶： a1％1cm=22.8 (280nm)

若查不到待測蛋白質的a1％1cm值，則可選用一種與待測蛋白質的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白質作為標准蛋白質，用標准曲線法進行測定。標准蛋白質溶液配製的濃度為1.0mg/ml。常用的標准蛋白質為牛血清清蛋白（bsa）。
標准曲線的測定：取6支試管，按下表編號並加入試劑：
管號 1 2 3 4 5 6
bsa（1.0mg/ml） 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
h2o 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0
a280
用第1管為空白對照，各管溶液混勻後在紫外分光光度計上測定吸光度a280，以a280為縱座標，各管的蛋白質濃度或蛋白質量（mg）為橫座標作圖，標准曲線應為直線，利用此標准曲線，根據測出的未知樣品的a280值，即可查出未知樣品的蛋白質含量，也可以用2至6管a280值與相應的試管中的蛋白質濃度計算出該蛋白質的a1％1cm,280nm
2. 280nm和260nm的吸收差法
核酸對紫外光有很強的吸收，在280nm處的吸收比蛋白質強10倍（每克），但核酸在260nm處的吸收更強，其吸收高峰在260nm附近。核酸260nm處的消光系數是280nm處的2倍，而蛋白質則相反，280nm紫外吸收值大於260nm的吸收值。通常：

純蛋白質的光吸收比值：a280/a260 ? 1.8
純核酸的光吸收比值： a280/a260 ? 0.5
含有核酸的蛋白質溶液，可分別測定其a280和a260，由此吸收差值，用下面的經驗公式，即可算出蛋白質的濃度。
蛋白質濃度(mg/ml)=1.45×a280－0.74×a260
此經驗公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質（酵母烯醇化酶）和核酸（酵母核酸）的混合液所測定的數據來建立的。
3. 215nm與225nm的吸收差法
蛋白質的稀溶液由於含量低而不能使用280nm的光吸收測定時，可用215nm與225nm吸收值之差，通過標准曲線法來測定蛋白質稀溶液的濃度。
用已知濃度的標准蛋白質，配製成20～100 mg/ml的一系列5.0ml的蛋白質溶液，分別測定215nm和225nm的吸光度值，並計算出吸收差：
吸收差d= a215 －a225
以吸收差d為縱座標，蛋白質濃度為橫座標，繪出標准曲線。再測出未知樣品的吸收差，即可由標准曲線上查出未知樣品的蛋白質濃度。
本方法在蛋白質濃度20~100mg/ml范圍內，蛋白質濃度與吸光度成正比，nacl、（nh4）2so4以及0.1m磷酸、硼酸和tris等緩沖液，都無顯著干擾作用，但是0.1n naoh, 0.1m乙酸、琥珀酸、鄰苯二甲酸、巴比妥等緩沖液的215nm光吸收值較大，必須將其濃度降到0.005m以下才無顯著影響。
4. 肽鍵測定法
蛋白質溶液在238nm處的光吸收的強弱，與肽鍵的多少成正比。因此可以用標准蛋白質溶液配製一系列50～500mg/ml已知濃度的5.0ml蛋白質溶液，測定238nm的光吸收值a238，以a238為縱座標, 蛋白質含量為橫座標，繪制出標准曲線。未知樣品的濃度即可由標准曲線求得。
進行蛋白質溶液的柱層析分離時，洗脫液也可以用238nm檢測蛋白質的峰位。
本方法比280nm吸收法靈敏。但多種有機物，如醇、酮、醛、醚、有機酸、醯胺類和過氧化物等都有干擾作用。所以最好用無機鹽，無機鹼和水溶液進行測定。若含有有機溶劑，可先將樣品蒸干，或用其他方法除去干擾物質，然後用水、稀酸和稀鹼溶解後再作測定。
不過凱式定氮法最常用

Ⅷ 半微量蒸餾裝置的原理與用法是什麼

原理：

其原理以分離雙組分混合液為例.將料液加熱使它部分汽化,易揮發組分在蒸氣中得到增濃,難揮發組分在剩餘液中也得到增濃,這在一定程度上實現了兩組分的分離。

兩組分的揮發能力相差越大,則上述的增濃程度也越大。在工業精餾設備中,使部分汽化的液相與部分冷凝的氣相直接接觸,以進行汽液相際傳質,結果是氣相中的難揮發組分部分轉入液相,液相中的易揮發組分部分轉入氣相,也即同時實現了液相的部分汽化和汽相的部分冷凝。

液體的分子由於分子運動有從表面溢出的傾向.這種傾向隨著溫度的升高而增大。

如果把液體置於密閉的真空體系中,液體分子繼續不斷地溢出而在液面上部形成蒸氣,最後使得分子由液體逸出的速度與分子由蒸氣中回到液體的速度相等,蒸氣保持一定的壓力。

此時液面上的蒸氣達到飽和,稱為飽和蒸氣,它對液面所施的壓力稱為飽和蒸氣壓.實驗證明,液體的飽和蒸氣壓只與溫度有關,即液體在一定溫度下具有一定的蒸氣壓。這是指液體與它的蒸氣平衡時的壓力,與體系中液體和蒸氣的絕對量無關。

(8)凱氏蒸餾裝置自動擴展閱讀：

半微量蒸餾裝置主要是半微量凱氏蒸餾器。

半微量凱氏蒸餾器包括：磨口蒸餾瓶、磨口冷凝管、帶有氮氣球的彎支管，所述蒸餾瓶具有夾層套，蒸餾瓶底部為廢液出口，蒸餾瓶一端外壁設有瓶頸支管，蒸餾瓶的中部外壁設有帶塞的磨砂杯，所述帶有氮氣球的彎支管分別連接磨口蒸餾瓶和磨口冷凝管。

半微量凱氏蒸餾器，其加液處採用磨砂塞使用方便，適用於微量與常量之間的半微量，用水蒸氣蒸餾法，對有機物作氮的含量分析測定，蒸餾液純度高

半微量凱氏蒸餾器，其特徵在於，包括：磨口蒸餾瓶、磨口冷凝管、帶有氮氣球的彎支管，所述蒸餾瓶具有夾層套，蒸餾瓶底部為廢液出口，蒸餾瓶一端外壁設有瓶頸支管，蒸餾瓶的中部外壁設有帶塞的磨砂杯，所述帶有氮氣球的彎支管分別連接磨口蒸餾瓶和磨口冷凝管。

參考資料來源：網路-蒸餾

Ⅸ 有誰知道凱氏定氮的具體步驟，注意事項，！！

1、消化:精密稱取大豆樣品1.0g左右，放入乾燥的250 ml消化管中，加入0.4g CuSO4 7g K2SO4 10ml H2SO4先200'C炭化，待泡沫停止後提高溫度到450'C，加熱至液體沸騰，待瓶內液體呈藍綠色透明後，再繼續加熱0.5h。

冷卻後加入20ml水，移入100ml容量瓶中，用少量水洗滌消化管2~3次，洗液合並於容量瓶中定容。

2、蒸餾:連接凱氏定氮裝置，於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3處，加甲基紅指示劑數滴及數ml硫酸，保持水呈酸性。加入數粒玻璃珠以防暴沸，調節火力加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、向吸收瓶內加入20g/L硼酸溶液20ml及混合指示劑2滴，並使冷凝管下端插入液面以下，吸取10ml樣品消化稀釋液由進樣口進入反應室，並以10ml水洗滌進樣口使其流入反應室內，將400g/L NaOH溶液10ml倒入進樣口，立即夾緊螺旋夾，並加入少量蒸餾水，密封進樣口。

當蒸汽通入反應室時，准確計時，反應產生的氨氣通過冷凝管進入吸收瓶，蒸餾5min，移動吸收瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾Imin，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下吸收瓶。

停止加熱，使反應室內的液體進入汽水分離器，打開進樣口的螺旋夾，將汽水分離器的液體放出。再向反應室內加入蒸餾水，夾緊螺旋夾，再次進行加熱至水蒸汽放出，停止加熱，使反應室內的水進入汽水分離器，進行洗滌。

4、滴定:用0.025mol/L硫酸標准溶液滴定吸收液至灰色。

5、計算:X= 2cVX 14X5.71/m

X為樣品中蛋白質的含量，%；c為硫酸標准溶液的濃度，molL；V為樣品消化液消耗硫酸標准溶液的體積，ml；m為樣品的質量，g。

注意事項

(1) 樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

(2) 樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬-沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

(3) 消化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷後，慢慢加入30%過氧化氫(H2O2)2-3ml，促使氧化。

(4) 在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

(5)如硫酸缺少， 過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

(6)加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

(7)混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

(8) 氨是否完全蒸餾出來，可用PH試紙試餾出液是否為鹼性。

(9)凱氏蒸餾裝置自動擴展閱讀：

凱氏定氮法原理

凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸共熱，經一系列的分解、碳化和氧化還原反應等復雜過程，最後有機氮轉變為無機氮硫酸銨，這一過程 稱為有機物的消化。

為了加速和完全有機物質的分解，縮短消化時間，在消化時通常加入硫酸鉀、硫酸銅、氧化汞、過氧化氫等試劑，加入硫酸鉀可以提高消化液的沸點而加快有機物分解，除硫酸鉀外，也可以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類類提高沸點，但效果不如硫酸鉀。

硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、鉬酸鈉等，但考慮到效果、價格及環境污染等多種因素，應用最廣泛的是硫酸銅。

Ⅹ 全自動凱氏定氮儀的主要特點

通過程序化設計和新獲得專利的蒸汽發生器實現改變蒸餾時間和蒸汽流量。根據分專析樣品的不同屬，可選擇快或慢的蒸餾速度。良好的自我保護裝置，不關閉防護門，儀器不啟動，安全可靠，不會對人員造成任何傷害。含四個RS232介面，可同時接電腦、列印機、鍵盤等外部設備，儀器內部程序可對各項連接設置進行編輯，而且還可編輯輸出實驗報告的各項參數，同時對操作語言也可進行選擇。
全自動控制過程包括：樣品蒸餾控制,加鹼量控制,加硼酸量控制,蒸汽流量控制,蒸餾時間控制,殘余物排出開關控制,自動報警控制,自動滴定開關控制
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