电泳实验装置使用方法

A. 《微生物基础技术》SDS-PAGE电泳技术详细操作步骤和详解

SDSPAGE电泳技术的详细操作步骤和详解如下：

一、详细操作步骤

1. 检漏：

   • 在组装好电泳装置后，需进行检漏操作，确保装置密封良好，无液体泄漏。

2. 制胶灌胶：

   • 根据所需分离的蛋白质分子量范围，选择合适的丙烯酰胺浓度制备凝胶。
   • 将凝胶溶液缓慢倒入玻璃板间，避免气泡产生，并插入梳子等待凝胶凝固。

3. 处理样品：

   • 将蛋白质样品与上样缓冲液混合，确保SDS与蛋白质充分结合。
   • 将混合后的样品进行沸水浴处理，使蛋白质变性。

4. 配制缓冲液：

   • 配制电泳缓冲液，通常包含甘氨酸、Tris和SDS等成分。

5. 准确点样：

   • 待凝胶凝固后，拔出梳子，用电泳缓冲液冲洗点样孔。
   • 使用微量加样器将处理好的蛋白质样品准确点入点样孔中。

6. 电泳：

   • 连接电泳装置，设定合适的电压和时间进行电泳。
   • 注意观察电泳进度，避免电泳时间过长导致蛋白质扩散。

7. 割胶染色：

   • 电泳结束后，将凝胶从玻璃板中取出，进行割胶操作。
   • 使用考马斯亮蓝等染料对凝胶进行染色，使蛋白质条带显色。

8. 脱色和照胶分析：

   • 将染色后的凝胶进行脱色处理，去除多余的染料。
   • 使用凝胶成像系统对凝胶进行拍照和分析，根据蛋白质条带的位置和颜色深浅判断蛋白质的分子量和纯度。

二、详解

• SDS的作用：SDS通过去垢和电荷掩蔽作用，消除蛋白质间的电荷差异，使蛋白质在电场中以相同的电荷/质量比移动，从而实现高效分离。
• 凝胶的选择：丙烯酰胺凝胶的浓度对蛋白质的分离效果有重要影响。浓度较高的凝胶适用于分离分子量较小的蛋白质，而浓度较低的凝胶则适用于分离分子量较大的蛋白质。
• 电泳条件：电泳的电压和时间需根据具体实验需求进行调整。过高的电压可能导致蛋白质条带扩散，而过长的时间则可能导致蛋白质降解。
• 安全操作：在实验过程中需佩戴防护设备，如手套、口罩和护目镜等，以防止化学物质的伤害。同时，注意实验废弃物的妥善处理。

掌握SDSPAGE电泳技术对于蛋白质分子量测定、纯度评估和多肽亚基分析等科研任务具有重要意义。因此，理解并熟练操作这项技术是十分必要的。

B. 在制备氢氧化铁胶体时，通常可能含有氯化铁，应如何除去

【准备】在200mL煮沸的蒸馏水里滴入约12mL1.2％的氯化铁溶液，冷却到室温。用玻璃纸作半透膜，用3000mL 蒸馏水渗析72小时，除去氯离子。最后加入8g尿素，以增大胶体的密度。

【操作】

（1）将制得的氢氧化铁胶体注入洗净的U形管（15×100mm）中，从管底到液面的高度约5cm。用长滴管吸取0.1％的硝酸钾溶液，分别沿U形管两口的管壁交替地缓慢滴入，不能搅动胶体，直到两端硝酸钾液面离胶体液面都是15mm左右为止 ，要求上下两层之间有明显的界限。（2）将石墨电极（可从1号干电池中得到）插入硝酸钾溶液中，使电极离胶体液面约6mm，整个电泳实验装置见左图。

（3）选用较高直流电压（150～180V），接通电源，半分钟后就能看到阴极区硝酸钾下面的胶体颜色加深，阳极区胶体液面有明显下降，2分钟可降2Omm，3分钟可降30mm左右。

【说明】

（1）氢氧化铁胶体的电泳速度跟氢氧化铁胶粒的带电量有关，胶粒带电量越大，电泳速度越大。渗析可以减少胶粒中的氯离子，增大胶粒的带电量。

（2）氢氧化铁胶体在U形管中的高度跟氢氧化铁胶体的电泳速度呈反比，即胶体在U形管的高度越高，胶体的电泳速度越小。所以，胶体在U形管中的高度以50mm左右为宜，不能太高。