『壹』 细胞培养需要的实验耗材有哪些
1、培养瓶：如果你们是闷带实验室小规模一般灶罩闭选50ML 100ML 250ML。
2、玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器皿总是摔断 所以稍稍长一点比较好。
3、玻璃瓶：培养基可以隐裂买 胰酶的配置需要的成本很低 所以准备两三个150ML的瓶 子自己配就行了。配置胰酶需要购买一种过滤器 。
4、EP管： 4ML的塑料管 冻存管 这些塑料的管子是必须的。
5、移液枪：（各种型号都要一把吧） 这个不算是耗材 但是枪头是耗材。
6、细胞培养板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需要选择）。
7、培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些
脱脂棉、纱布、酒精灯、镊子，一次性橡胶手套、口罩、帽子、鞋套也需要准备
稍稍说下实验的硬件：培养箱（记得买二氧化碳钢瓶） 倒置显微镜 低速离心机 冰箱 液氮罐
有这些东西 基本就可以进行实验了 根据实验的需要再考虑买其他物品
『贰』 有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步骤吗
1
材料与方法
1.
1
Matrigel：Becton
Dickinson
Compary,
-
20
℃保存；
Tanswell
plate：Costar
,USA
,
#
3422
,聚碳酯膜微孔直径为8μm；
苏木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。
1.
2
趋化因子的制备
取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培养基轻柔漂洗两次;
加入无血清培养基,37℃,5
%CO2
培养24
h～48h，收集细胞培养上清；4
℃,12
000rpm
离心,10
min
,取上清；0.22
μm
滤膜过滤除菌；分装,在-
20
℃保存。
1.
3
transwell
培养板准备
所有操作均需无菌操作。-20℃保存的Matrigel
在冰上保2℃～8℃过夜融化。在冰上用预冷的枪头吸取100μl
Matrigel
加入冰预冷的300μl
无血清培养基中,充分混均。取上述稀释的Matrigel
25
μl
加入transwell
板上室,覆盖整个聚碳酯膜,37
℃,30
min
,使Matrigel
聚合成胶。已铺好Matrigel的transwell
培养板置于37℃可保存2
周。
1.
4
Matrigel
侵袭实验(Matrigel
Invasion
Assay)刺激后的各组细胞用PBS
漂洗3
次。以常规方法用无血清培养基制备单细胞悬液,5
×105个细胞/
ml
,每组细胞各分为两部分。胎盘兰拒染实验,细胞活力需大于95
%。Transwell
培养板上室加入100μl
细胞悬液(
5
×104
个)
并加入无血清培养基200
ul
。Transwell
培养板下室加入500μl
趋化因子,37℃,5
%CO2
培养24
h。用湿棉签轻轻擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞。小心取出上室,用线拴住,并做好标记,用冰预冷的甲醇固定30
min。苏木素染色1
min。梯度乙醇脱水(80
%
,95
%
,100
%)
,二甲苯透明。小心将聚碳酯膜自上室基底切取下来,置载玻片上中性树脂封片。附着于聚碳酯膜下表面的细胞在高倍镜下(
×400)
随机取6
个视野[1
]
计数,取平均数。重复实验两次。
注意
2.
1
NIH3T3
细胞制备的趋化因子与胎牛血清
趋化因子是能使细胞产生趋化运动的一类细胞因子[2
]
。目前利用NIH3T3
细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验的实验室比较多,时间较长且实验步骤繁琐。众所周知,胎牛血清中有趋化因子,我们在不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验中发现用胎牛血清和用NIH3T3
细胞制备的趋化因子做细胞体外侵袭实验效果是一样的,两组迁移的细胞数很接近。在实验时间上，用NIH3
T3细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为1
周,而用胎牛血清作趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为2
d
,实验时间节省了很多。因此认为可以用胎牛血清来代替NIH3T3
细胞制备的趋化因子。
2.
2
细胞的准备
所需细胞应处在对数生长期,细胞活力需大于95
%。如果细胞活力小,就会造成细胞穿透能力下降,影响实验结果。
2.
3
擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞
先用干棉签将上室内液体吸去,再用蒸馏水浸湿的棉签轻轻擦去Mat
rigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞,如果没有擦净聚碳酯膜上表面的细胞,在细胞计数时就会将没擦掉的细胞也计进来。尤其是细胞为圆形的时候,就会分辨不出是穿过去的细胞还是没穿过去的细胞,对于长梭形细胞来说,穿过去的细胞为长梭形,没穿过去的细胞多为圆形。
2.
4
苏木素染色
上室浸泡在新苏木素中的时间为1
min
,用过多次的苏木素为2
min。在研究粉防己碱对HUVEC
人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用没有将多余苏木素洗去,直接脱水、透明,造成细胞图片背景模糊,细胞不清楚(见图1)
。在作不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验时我们将其置于盛有自来水的烧杯中,反复漂洗几次,将多余苏木素洗去再行脱水、透明;这样做出的细胞图片背景干净,细胞清楚(见图2)
。
『叁』 分析下面实验装置并回答问题：（1）该实验装置的实验目的是______．（2）装置细玻璃管的目的是______．（
（1）根据题干可知：甲乙两装置唯一不同的变量培养液中是否含有磷元素，因此该实验装置的实验目的是：探究磷元素对植物生长的影响．
（2）水稻幼苗的根部细胞正常进行呼吸作用需要吸收空气中的氧气．因此装置细玻璃管的目的是向培养液内通入空气，以保证水稻幼苗的根部细胞能正常进行呼吸作用，即保持瓶内外气压平衡．
（3）实验必须在光下进行，以保证番茄幼苗能正常进行光合作用，番茄幼苗才能正常生长；此外，还需要每天向培养液内泵入空气，以保证番茄幼苗的根部细胞能正常进行呼吸作用．
（4）对照实验中对实验变量进行处理的，就是实验组，没有处理是的就是对照组．因此实验装置中，起对照作用的是甲．
故答案为：
（1）探究磷元素对植物生长的影响
（2）保持瓶内外气压平衡
（3）甲