1. 纸色谱法鉴定氨基酸怎么操作谢谢!
纸色谱法是属于分配色谱的一种,通常用特制的滤纸如新华一号滤纸作为固定相(水的支持剂),含有一定比例的水的有机溶剂(展开相)作流动相,应用于多官能团或高极性化合物如糖或氨基酸的分离、鉴定。
Rf比移值是一个特定常数。Rf值随被分离化合物的结构、固定相与流动相的性质、温度等因素不同而异。当温度、滤纸等实验条件固定时,它是一个常数。这也就是用纸色谱进行定性分析的依据。
用标准氨基酸作出纸色谱和Rf值,与在相同条件下作出的混合物的纸色谱和Rf相对照,以达到分离、鉴定氨基酸的目的。当然,在实际应用中,纸上层析的操作要复杂得多。尤其是Rf值相接近的氨基酸需要用两向纸上层析才能达到分离鉴定的目的。
氨基酸经纸上层析后,常用茚三酮显色剂显色。必须注意!指印含有一定量的氨基酸,在实验方法中足以检出(可以检出以微克计的痕迹量)。
2. 纸色谱法适于分离哪些种类的混合物
纸色谱法用于分离固体混合物。
纸色谱法(filter paper chromatography)指的是把一种溶剂固定在固体的支持物(固定相) 上,由于滤纸纤维对水有较强的亲和力,一般能吸附其自身质量22%的水,其中,6%的水以氢键与纤维素牢固结合,这些水即称为固定相。被水饱和的有机相(如正丁醇乙醚水系统) 为流动相。当流动相从含有氨基酸样品的滤纸上流过时,氨基酸就在固定相与流动相之间连续进行分配。
如果分离液体混合物,则可以用分液漏斗。
分液漏斗,是一种玻璃实验仪器,包括斗体,盖在斗体上口的斗盖。斗体的下口安装一三通结构的活塞,活塞的两通分别与两下管连接。可使实验操作过程利于控制,减少劳动强度,当需要分离的液体量大时,只需搬动活塞的三通便可将斗体内的两种液体同时流至下管,无需更换容器便可一次完成。在初中阶段分液漏斗的主要作用则是控制化学反应的速率。本装置是科学研究、化学实验中一种功能较好的实验器皿。
3. 纸层析法分离氨基酸实验中展层时间的长短对结果有什么影响
氨基酸离鉴定——纸层析 ,实验目 掌握氨基酸纸层析原理,析待 测品氨基酸. 二,实验原理 纸层析滤纸惰性支持物配层析.滤纸纤维羟基具亲水性,吸附层水作固定相,机溶剂流相.机相流经固定相,物质两相间断配离. 溶质滤纸移速度用Rf值表示: Rf=原点层析斑点距离/原点溶剂前沿距离 定条件某种物质Rf值数.Rf值与物质结构,性质,溶剂系统,层析滤纸质量层析温度等素关.本实验利用纸层析离氨基酸. 三,实验器材 (1)烧杯(5000mL):1/组 (2)微量注射器(100 L):1/ 组. (3)喷雾器:公用. (4)培养皿:1/组. (5)层析滤纸(22cm,宽14cm新华号滤纸):1张/组. (6)直尺,铅笔:自备. (7)电吹风:1/组. (8)托盘,针,白线:1套/组. (9)手套:1双/组. (10)塑料薄膜:公用. (11)烧杯:50mL,1/组. 四,实验试剂 (1)扩展剂:4体积丁醇1体积冰醋酸放入液漏斗,与5体积水混合,充振荡,静置层,弃层水层. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3种(赖氨酸,苯丙氨酸,缬氨酸),0.5%待测氨基酸液1种. (3)显色剂:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 实验试剂 五,实验操作 检查培养皿否干燥,洁净;若否,其洗净并置于干燥箱内120℃烘干. (1)平衡:剪块塑料薄膜铺桌面,层析缸或烧杯置于塑料薄膜,再盛约20mL展层溶液烧杯置于倒置层析缸或烧杯,用塑料薄膜密封起,平衡20min. (2)规划:带手套,取宽约14cm,高约22cm层析滤纸张.纸端距边缘2cm处轻轻用铅笔划条平行于底边直线A,直线做4记号,记号间间隔2cm,原点位置.另距左边缘1cm处画条平行于左边缘直线B,B线A,B两线交点原点标明刻度(厘米单位),参见左图. (3)点:用微量注射器别取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸馏水洗涤微量注射器,免交叉污染),点四位置.挤滴点,同位置需点2~3,2~3mL/,每点完点,立刻用电吹风热风吹干再点,保证每点纸扩散直径超3mm.每须点4,其3已知,1待测品. (4)层析:用针,线滤纸缝筒状,纸两侧 边缘能接触且要保持平行,参见图3-3.向培养皿加入扩展剂,使其液面高度达1cm左右,点滤纸筒直立于培养皿(点端,扩展剂液面A线约1cm),罩烧杯,仍用塑料薄膜密封.扩展剂升A线始计,每隔定间测定扩展剂升高度,填入表3-1.升15~18cm,取滤纸,剪断连线,立即用铅笔描溶剂前沿线,迅速用电吹风热风吹干. (5)显色:用喷雾器通风厨向滤纸均匀喷0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用热风吹干,即显各层析斑点,参见左图. (6)计算各种氨基酸Rf值,并判断混合品都哪些氨基酸,各自实验结贴实验报告,见表3-2. (7)层析间横坐标,扩展剂升高度纵坐标画图,求扩展剂升18cm所需要间. (8)微量注射器内外用蒸馏水清洗干净,倒掉用展层液平衡液,培养皿洗净,整理桌面仪器试剂