㈠ 关于紫外分光光度计的原理的实验报告
UV765紫外可见分光光度计操作规程一、开机开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打开样品室。二、使用自检结束后（7个项目均出现OK字样），仪器进入主菜单，屏幕显示如下七个功能项：1.光度测量；2.光谱测量；3.定量测量；4.动力学测量；5.数据处理；6.多波长测定；7.系统状态设定。仪器经30min热稳定后，就可以进入正常测量。1.光度测量 测定一定波长下的透光率（T％）或吸光度值(A)在主菜单中选中[光度测量]项后，按[ENTER]键进入此功能块 → 按[GOTO WL]键进入波长设置用数字键输入你所需的波长值→ 按[ENTER]键确认→ 屏幕提示：请稍等……，仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值→ 按[F1]键，选择测定透光率（T％）或吸光度值(A) → 打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R位和S1位，关上样品室盖→ 按[F3]键，仪器自动将比色皿架R位置移动到光路中（即空白溶液），屏幕上显示Cell=R → 按[AUTO ZERO]键，仪器自动对空白溶液调零。屏幕提示：请稍等…… → 按[F2]键，比色皿架移动到S1位 (待测样品),屏幕上显示Cell=S1 → 按[F4]键测量T％或A值 测量完成后1）打印输出数据，按[START/STOP]键2）返回主菜单，按[MODE]键2. 光谱测量 波长扫描或光谱扫描，可直接测定一段波长范围内的光谱图和峰值谷值数据在主菜单中选中[光谱测量]项后，按[ENTER]键进入此功能块 → 根据需要设定测量模式、扫描范围、记录范围、扫描速度、采样间隔、扫描次数、显示模式各参数。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向键到达设定行，进行参数的修改，并按[ENTER]键确认 → 打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R位和S1位，关上样品室盖→ 按[F3]键，仪器自动将比色皿架R位置移动到光路中（即空白溶液），屏幕上显示Cell=R → 按[F1]键进行基线校正。屏幕提示：基线校正…… → 按[F2]键，比色皿架移动到S1位 (待测样品),屏幕上显示Cell=S1 → 按[START/STOP]键开始光谱扫描 → 屏幕显示扫描图谱扫描结束后1） 打印结果谱图，按[F4]键2） 直接读取峰谷值，按[F2]键，屏幕显示“请输入峰/谷检测灵敏度”（默认值为3），按[ENTER]键确认3） 存储图谱，获取整个波长范围内的数据，按[F3]键，用[→]、[←]方向键选择10个数字和26个字母组成文件名，按[ENTER]键确认，按[F4]存储，按1－8数字键确定文件序列号4） 修改谱图坐标范围，按[F1]键。修改完毕后，按[START/STOP]键确认后，谱图将按新设定坐标被刷新5） 返回上一级菜单，按[MODE]键3. 定量测定 建立浓度曲线，直接测定样品的浓度主菜单中选中[定量测定]项后，按[ENTER]键进入此功能块 → 根据需要设定测量波长、测量单位、测量方法各参数。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向键到达设定行，进行参数的修改，并按[ENTER]键确认 3.1 K系数法 已知斜率k和截距b，测出样品的吸光度值后待入公式就可算出浓度值在测量方法中选择K系数法，并按[ENTER]键确认 → 按[F2]键，将k值和b值输入，按[ENTER]键确认 → 打开样品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖 → 按[AUTO ZERO]键调零 → 将样品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]键进入数据测量界面→ 按[F2]键移动比色皿架，使被测样品处于光路中 → 按[START/STOP]键测量 3.2单点标定法 测量一个标准样品的吸光度与坐标零点建立工作曲线，测定未知样品浓度在测量方法中选择单点标定法，并按[ENTER]键确认 → 按[F2]键修改单点 → 按数字键输入标准样品的浓度值 → 按[ENTER]键 → 打开样品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖 → 按[AUTO ZERO]键调零 → 将空白样品换成标准样品→ 按[START/STOP]键测量标样的吸光度并显示 → 将样品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]键进入样品测量界面 → 按[F2]键移动比色皿架，使被测样品处于光路中 → 按[START/STOP]键测量 3.3多点标定法 测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度在测量方法中选择多点标定法，并按[ENTER]键确认 → 打开样品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖 → 按[AUTO ZERO]键调零 → 按[F2]键重新标定 → 按数字键输入标准样品数 → 按[ENTER]键确认 → 将标准样品依次放入比色皿架R、S1、S2位……关上样品室盖 → 按[F3]移动比色皿架R位到光路 → 按[ENTER]键确认 → 按数字键输入标样浓度值，按[ENTER]键确认 → 按[START/STOP]键测量标样的吸光度→ 按[ENTER]键确认 → 按[F2]键移样品位S1到光路，同样的方法测量所有标样的吸光度 → 按[F1]键生成方程曲线，显示该曲线的斜率k、截距b、相关系数R → 按[MODE]键返回定量测量菜单 → 按[START/STOP]键进入数据测量菜单 → 放入样品 →按[F2]键移动比色皿架，使被测样品处于光路中 → 按[START/STOP]键测量 6.多波长测定 同时测定几个波长下的透光率（T％）或吸光度值(A)主菜单中选中[多波长测定]项后，按[ENTER]键进入此功能块 → 按[F3]键设定测量波长数目和样品池个数，按[ENTER]键确定 → 按数字键输入相应波长值 → 打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R、S1、S2位……，关上样品室盖 → 按[START/STOP]键开始测量 测量完成后1）打印输出数据，按[F4]键2）返回主菜单，按[MODE]键三、关机将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。 注意事项：1.开机前将样品室内的干燥剂取出，仪器自检过程中禁止打开样品室盖。2.比色皿内溶液以皿高的2/3～4/5为宜，不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。测定时应保持比色皿清洁，池壁上液滴应用擦镜纸擦干，切勿用手捏透光面。测定紫外波长时，需选用石英比色皿。3.测定时，禁止将试剂或液体物质放在仪器的表面上，如有溶液溢出或其它原因将样品槽弄脏，要尽可能及时清理干净。4.实验结束后将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。问题处理：1、如果仪器不能初始化，关机重启；如不成功，请向管理老师反映。2、如果吸收值异常，依次检查：波长设置是否正确（重新调整波长，并重新调零）、测量时是否调零（如被误操作，重新调零）、比色皿是否用错（测定紫外波段时，要用石英比色皿）、样品准备是否有误（如有误，重新准备样品）。㈡ 用紫外可见分光光度法测定苯甲酸
目的与要求1、掌握吸收曲线的测定与绘制方法 2、掌握直接比较法定量的方法 3、熟悉紫外分光光度计的使用方法 原理样品中的苯甲酸在酸性条件下可用水蒸气蒸馏法提取，在碱性条件下形成苯甲酸盐。苯甲酸及其盐对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm左右。 用紫外可见分光光度计可测定物质在紫外光区、可见光区的吸收光谱，并可定量测定。 仪器与试剂1、仪器 751型分光光度计；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只；刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。 2、试剂 苯甲酸标准储备液（1ml相当于0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氢氧化钠溶液。 操作步骤操作步骤1、苯甲酸吸收曲线的绘制 取苯甲酸储备液4.00ml，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。此液1ml相当于8μg苯甲酸。 测定条件：氢灯，1cm石英比色皿，0.01mol/L氢氧化钠为参比测定波长：从210nm-240nm每隔一定波长（2nm-5nm）测定一次吸光度，在225nm左右隔1nm测定一次吸光度。绘制苯甲酸的紫外吸收曲线，得最大吸收波长为测定波长。2、直接比较法测定样品溶液中苯甲酸的含量取10.00ml样品溶液，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀后备用。 以0.01mol/L氢氧化钠溶液为参比溶液，在完全相同的条件下测定苯甲酸标准溶液和稀释好的样品溶液的吸光度值。3、结果处理 按下式计算样品溶液中苯甲酸的浓度： Cx (μg/ml) = 8×50×Ax /(10As) Cx:待测样品液的浓度；Ax是待测样品溶液的吸收值；As是苯甲酸标准液的吸收值。