Ⅰ 关于实验室抽虑除菌的操作
问:最近要做一些培养基,有一些糖类需要过滤除菌,但不知道怎么操作,还需要什么辅助设备?
答:你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了,一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格,指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了!
答:如果溶液的量比较大,超过500ml,可以采用已灭菌的抽滤瓶,预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢,使用时,不用在无菌室中进行,只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后,过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。
如果用小量的溶液过滤,无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜(millipore或pall都有卖)就可以。
答:看过滤的量,如果量小,用注射器加滤器、0.22微米滤膜过滤,滤器加上滤膜后盖紧,稍旋松,饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌,用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作,并先旋紧滤器,注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌;过滤应该是费力的,如果感觉很轻松,则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次,以防止0.22堵塞。注射器,若能高压更好些。
如果量大,正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜,这些都是要高压的。负压可用抽滤。
Ⅱ 请问制备培养基时如何过滤除菌
1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种,高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比,高压灭菌的工作强度小,成本较低,但易造成营养成分的流失,而且在多次加样(无菌谷氨酰胺溶液,无菌碳酸氢钠溶液等)过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1~0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌,并且已成为培养基除菌的发展方向,它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌
某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失,不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果,灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤,正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染,可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器(如Zeiss滤器)或立式微孔滤器(Millipore、Pall)除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢,中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时,先要用培养用水将滤膜充分润湿,在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都要包好(可用牛皮纸、纱布、无纺布等);高压灭菌后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后,要打开滤器,检查滤膜是否完整,如果滤膜破裂,需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积,因为滤膜的折叠,膜面积显著增大,液体处理量大,而且不容易发生堵塞现象。
Ⅲ 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌四种各有那些优缺点
1.高压蒸汽灭菌
为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去,而聚集在密封的容器中,在密闭的情况下,随着水的煮沸,蒸汽压力升高,温度也相应增高。压力和温度之间的关系见表9-1。
高压蒸汽是最有效的灭菌法,能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下(121.6℃),15~30分钟,所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。
进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅,有立式与卧式两种。
可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表,有的还装有温度计,能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口,其作用是在密闭之前,利用蒸汽将锅内的冷空气排净,另外还装有安全活门,如果压力超过一定限度,活门即可自动打开,放出过多的蒸汽。
2.干热灭菌
微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高,时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3~4小时,方能达到灭菌的目的。
干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌,凡带有橡胶的物品和培养基,都不能进行干热灭菌。
3.间歇灭菌
各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。
间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体,然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时,使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时,再放置24小时。如此连续灭菌3次,即可达到完全灭菌的目的。
间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行,也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌,这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间,会被破坏,而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用,又使被处理的物质免遭破坏。
4.紫外线灭菌
紫外线杀菌力最强的是波长2650~2660Å的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20~50分钟(视房间大小而定),接种箱照射10~15分钟即可。
为了加强紫外线灭菌的效果,在照射前,可在无菌室、缓冲间或接种箱内喷洒5%石炭酸,以使空气中附着有微生物的尘埃降落,同时也可以杀死一部分微生物。无菌室的工作台的台面和椅子,可用2~3%的来苏儿擦洗。然后再照射紫外线。由于紫外线对人体有伤害作用,所以人不要直视正在照射的紫外线灯,也不要在照射情况下进行工作。
灭菌后,为了检验紫外线的灭菌效果,可以在无菌室、缓冲间或接种箱内放一套盛有培养基的培养皿,将皿盖打开5~10分钟,盖好后,放入温箱中培养。如果只有一、二个菌落,可认为灭菌效果良好。如杂菌丛生。则需延长照射时间或同时加强其它灭菌措施。
Ⅳ 高中中实验室过滤装置的使用
高中实验室过滤装置仅使用于不溶性固体与液体的分离
Ⅳ 过滤除菌操作时,滤器和过滤瓶等装置使用前用什么设备进行消毒灭菌
过滤除菌操作时,滤器和过滤瓶等装置使用前用高压蒸锅进行消毒灭菌
都需要高回压灭菌,不过答如果你使用的滤器是进口灭过菌的就不需要了,前提是你没拆开过。
KRBB液的配方是:NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下:准确称取HEPES 2.383g,加入新鲜三蒸水定容至。
Ⅵ 实验室用热过滤装置有哪些
也就是配个加热套,根据你不同的过滤器皿,都会有相对应的软性加热套,把你的器皿很好的包裹好,进行温控过滤。
Ⅶ 实验室过滤和纯化的实验室装置有哪些
固液分离:
离心机、三角漏斗(过滤)、布氏漏斗(减压过滤)。
固体纯化:重结晶、熔融结晶。
液液分离:
分液、萃取(分液漏斗)
蒸馏、精馏。
Ⅷ 过滤除菌操作时,滤器和过滤瓶等装置使用前用什么设备进行消毒灭菌
过滤复除菌操作时,滤器和过制滤瓶等装置使用前用高压蒸锅进行消毒灭菌
都需要高压灭菌,不过如果你使用的滤器是进口灭过菌的就不需要了,前提是你没拆开过。
KRBB液的配方是:NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下:准确称取HEPES 2.383g,加入新鲜三蒸水定容至。
Ⅸ 实验室减压过滤装置有哪些
通常指抽滤
主要有真空泵,抽滤漏斗,抽滤瓶,滤纸等
Ⅹ 实验室常用过滤方法进行净水.图为一过滤装置,该过滤装置中有几处错误,你能找出来吗①______②______
图中无玻璃棒引流,可能会弄破滤纸,使过滤失败;漏斗的下端没有紧靠接受的烧杯,可能会使液体外溅.
答案:①没有用玻璃棒引流②漏斗下端管口没有靠紧烧杯内壁