菠菜色素的提取与分离实验装置图

① 某班学生以新鲜菠菜叶为材料进行叶绿体中色素的提取和分离的实验时，由于各组操作不同，出现了如图所示的

A、光合色素不能溶于水，甲没有色素，可能是误用蒸馏水做提取液和层析液专，故A正确；
B、乙中色素属的量较少，可能是因为研磨时未加入SiO₂，导致研磨不充分、提取色素含量少，故B正确；
C、丙中叶绿素含量比类胡萝卜素含量低，可能是因为研磨时未加入CaCO₃，导致部分色素被破坏，故C错误；
D、丁中叶绿素含量比类胡萝卜素含量低，且色素含量较少，可能是因为研磨时未加入CaCO₃，导致部分色素被破坏所致，故D正确．
故选：C．

② 绿叶中色素的提取和分离的实验中，菠菜叶，放入研钵中，加入无水乙醇、石英砂、CaCO2以后，迅速研磨

不可以，这是因为前面加的物质有些事保护叶绿素不被分解和破坏的比如碳酸钙，石英砂是研磨用的，乙醇必须提前加入，不然不利于研磨。叶片用研棒干研很费劲。

③ 叶绿体色素实验方法是怎么样的

操作难度：★★★

实验方法：

下面我们介绍一下叶绿体色素的提取和分离方法，并了解一下叶绿体色素的种类。

叶绿体中一般含有绿色素（叶绿素a和b）和黄色素（胡萝卜素和叶黄素）。这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂中。因此，常用酒精或丙酮来提取。

色素分离方法很多，纸层析是最简便的一种。当溶剂不断地从滤纸上流过时，由于混合物中各成分在固定相和流动相间具有不同的分配系数，因此，它们的移动速度不同，便可将混合取液中的各种色素分离开。

实验所需要的材料和用具：菠菜叶片（或其他新鲜绿叶）、一台天平、研钵、量筒、漏斗、试管、试管架、色层分析滤纸、细玻棒、大培养皿两个（底和盖直径相等）、95％酒精、碳酸钙、汽油（纯净无色的）、小酒杯（或平底短玻管）1个、剪刀、滴管。

实验步骤如下：

1.选取鲜绿的菠菜叶片，擦净、剪碎后称取3克鲜叶，放入研钵中，加少许碳酸钙（可中和细胞中的有机酸，避免形成去镁叶绿素）和5毫升酒精，研磨成糨糊状。再加酒精5毫升，研匀后用漏斗过滤，滤液即为叶绿体色素提取液，内含有叶绿素a、叶绿素b及叶黄素和胡萝卜素。

2.取色层分析滤纸，剪成圆形，其直径应略大于培养皿的直径（如无层析滤纸，也可用圆形定性或定量滤纸）。在滤纸圆心戳一圆形小孔。另取同样的滤纸，剪成长5厘米、宽1.5厘米的窄条，用细玻棒沿长度方向卷成1.5厘米长的纸捻，抽出玻棒后再进一步搓成均匀、紧密的纸捻。

3.用细口滴管吸取叶绿体色素提取液，滴在纸捻的一端，风干（或用电吹风吹干），再滴，再风干，如此重复3~5次。

4.将滴有色素的纸捻端插入圆形滤纸中心小孔中，使纸捻与圆形滤纸紧密接触，且与纸面平齐，切勿高出纸面。

5.取两个直径相等的干燥培养皿，在一个培养皿内放一小酒杯（或平底短玻管），杯内加入适量的汽油（或石油醚）作为扩散剂。把插有纸捻的圆形滤纸平放在培养皿上，使纸捻下端浸入汽油中，迅速盖上另一培养皿，两培养皿周边对齐。

6.小杯内的汽油沿纸捻扩散到圆形滤纸上，并推动叶绿体色素也向滤纸四周扩散。待汽油扩散到培养皿边缘时。取出滤纸，即可看到四种色素分离成四个同心圆环。用铅笔标出各种色素的位置和名称。

知识延伸：

由于各种色素在扩散剂中的溶解度不同，以及滤纸对各色素的吸附能力不同，而达到分离的目的。扩散最快的是胡萝卜素，为橙黄色；其次是叶黄素，为鲜黄色；再次是叶绿素a，为蓝绿色；扩散最慢的是叶绿素b，为黄绿色。

④ 菠菜色素的提取和色素分离

一、实验目的 通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法。 通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。 二、实验原理 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶 黄素（黄）等多种天然色素。 叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C 55 H 72 O 5 N 4 Mg) 和 叶绿素b(C 55 H 7 O 6 N 4 Mg) ，其差别仅是a 中一个甲基被b 中的甲酰 基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光 合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3 倍。 尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于 醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 二、实验原理 胡萝卜素(C 40 H 56 )是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体， 即a-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。在生物体 内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素A 。目前β - 胡萝卜素已可进行工 业生产，可作为维生素A 使用，也可作为食品工业中的色素。 叶黄素(C 40 H 56 O 2 )是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通 常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚 中溶解度较小。 二、实验原理N N N N Mg CO 2 CH 3 CH 2 O CH H 3 C H 3 C R CH 2 CH 3 CH 3 CH 2 CH 2 C O O CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3叶绿素 a (R=CH 3 )叶绿素 b (R=CHO)二、实验原理CH 3 H 3 C R CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 R H 3 C CH 3 H 3 Cβ-胡萝卜素（R=H） 叶黄素（R=OH）CH 2 OH维生素A三、基本操作与技术薄层色谱 薄层色谱常用TLC表示，又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是 快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附 色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几 到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸 附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较 小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外，薄层色 谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。 薄层色谱的原理是利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸 附能力的差异从而达到分离目的的方法。 三、基本操作与技术�6�1薄层板的制备 吸附剂：最常用硅胶GF254；硅胶HF254。 粘结剂：一般用所羧甲基纤维素钠（CMC），也有用淀粉的。CMC 配成1％水溶液使用。 制板：以小板的制备为例，将硅胶加1％CMC，调成桨状（在 平 铺玻璃板上能晃动但不能流动），将其涂在载玻片上 （75 ×25），为使其坦平，可将载玻片用手端平晃动，致坦平 为止，放在干净平坦的台面上，晾干之后放入110℃烘箱 活 化1小时即可使用。 三、基本操作与技术�6�1点样 点样用的毛细管为内径＜1mm的管口平整的毛细管，将样品溶于 低沸点的溶剂（乙醚、丙酮、乙醇、四氢呋喃等）配成1％溶液。 点样前，可先用铅笔在小板上距一端5mm处轻轻划一横线，作为 起始线，然后用毛细管吸取样品在起始线上小心点样，如需重复点样， 则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。若在同一块板上点几个样， 样品点间距离为5mm以上。 三、基本操作与技术�6�1展开 展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因 素来考虑。 薄层的展开在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放入色谱器 中（小板可用广口瓶代替），使色谱器内空气饱和5-10min，再将点好 试样的薄层板放入色谱器中进行展开，点样的位臵必须在展开剂液面 之上，当展开剂上升到薄层的前沿（离前端5-10mm）或多组分已明显 分开时，取出薄层板放平晾干，用铅笔划溶剂前沿的位臵后，即可显 色。 三、基本操作与技术�6�1显色 如果化合物本身有颜色，就可直接观察它的斑点。如果本身无色， 可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点（有苯环的物质都有），用铅笔在 薄层板上划出斑点的位臵；对于在紫外灯光下不显色的，可放在含少量 碘蒸气的容器中显色来检查色点（因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑 点），显色后，立即用铅笔标出斑点的位臵。�6�1计算比移值 记下原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。 三、基本操作与技术 距离 溶剂前沿至原点中心的 点中心的距离 溶质最高浓度中心至原f R四、主要仪器与试剂仪器:研钵、布氏漏斗、圆底烧瓶、直形冷凝管、层析缸试剂:硅胶G ，甲醇，石油醚（60-90 ℃），丙酮，乙酸乙酯，菠菜叶 五、实验装臵图 薄层板在层析缸中展开 六、实验流程图 菠菜 菠菜汁 萃取液 研磨 过滤 石油醚-甲醇 萃取 浸膏 水 洗涤、蒸馏 薄层层析R f值 分别用展开剂（a ）石油醚- 丙酮=8:2 （体积比）和（b ） 石油醚- 乙酸乙酯=6:4 （体积比）展开，比较不同展开剂系 统的展开效果。 七、实验关键及注意事项薄层层析时，薄层板的制备要厚薄均匀，表面平整光洁。点样与展开应按要求进行：点样不能戳破薄层板面；展开 时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开 剂上升高度，即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分 在薄层板上的相对位臵。 八、思考题 在一定的操作条件下为什么可利用Rf值来鉴定化合物？ 在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位臵？ 展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？

⑤ 怎么从菠菜叶中提取绿色的叶绿体

光合色素的提取和分离如下：

一、光合色素的提取

1、选材：选择鲜绿、柔软的绿色菠菜叶。

2、研磨配塌：

（1）5g菠菜叶，去叶脉，剪碎放入研钵中。

（2）分别加入无水乙醇有机溶剂，要少量多次加，以利于溶解色素；加CaCO3是为了保护色素（CaCO3能中和有机酸），是因为在研磨过程中，培哪圆液泡也容易被破碎，液泡中的有机酸容易分解色素，色素被分解的多了，提取液中的色素就少了，实验效果不明显。加石英砂（SiO2）使研磨更加迅速。

3、过滤：不能使用滤纸，滤纸有吸水性，一般要用尼龙布或纱布，最后得到提取液。

二、光合色素的分离

1、原理：根据不同色素在层析液中溶解度不同。

2、过程

（1）制备滤纸条。

（2）用毛细玻璃管在滤纸条上划线，应先用铅笔划线，再用毛细玻璃管蘸取提取液划线，要多次反复的划，第一次干了，再划第二次，要尽可能细，尽可能直。

（3）烧杯中的层析液（20份在60—90℃下分离出来的石油醚、2份丙酮和1份苯混合而成的）。

（4）色素分离的方法：纸层析法。

实验目的

1、使学生了解光合作缓喊用的发现过程。

2、使学生了解叶绿体中色素的种类、颜色及其吸收的光谱；初步学习光合色素的提取方法及其在滤纸上的分布。

3、掌握光合作用的概念、实质、总反应式、光反应、暗反应的具体过程、光反应与暗反应的区别与联系及光合作用的意义。

4、应用所学的光合作用的知识，了解植物栽培与合理利用光能的关系。