❶ 移液器取液时用力按下按钮有什么影响
手动移液器使用的时候按压速度和节奏对操作结果都会有影响。排液的时候按压太快,可能会导致一些液体残留,尤其是液体比较粘稠的时候。另外移液操作的重复性好坏很大程度上是由操作人本身的操作习惯决定的。如果要保持精确的操作结果,节奏和速度应保持均匀一致。如果经费允许可以考虑买电动的移液器,我们实验室用的赛多利斯电动移液器,不用担心按压用力的问题,设置好操作速度后按按钮,移液器会自动按照设置的节奏和速度来吸排液,特别好用。
❷ 核酸提取仪原理
1. 根据仪器型号大小不同划分 [1]
1) 自动液体工作站
自动液体工作站是功能非常强大的设备,液体分液、吸液等自动完成,甚至能通过整合扩增、检测等功能,实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用,不太适合常规实验室提取核酸,一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个,一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作,需要比较大的资金。
2) 小型自动核酸提取仪
小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊性来达到自动提取核酸的目的,可以在任何实验室得到应用。
2. 根据提取原理不同划分
1) 采用离心柱法的仪器
离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在1-12个样本,操作时间和手工提取差不多,并不能提高实际工作效率,且价格昂贵,不同型号仪器的耗材也不能通用,仅适合经费充足的大型实验室使用。
2) 采用磁珠法的仪器
以磁珠为载体,利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸,在低盐高PH值下与核酸分离的原理,再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性,所以可设计成很多种通量,既可以单管提取,也可以提取8-96个样本,且其操作简单快捷,提取96个样本仅需30-45min,大大提高了实验效率,且成本低廉,因而可以在不同实验室使用,是目前市场上的主流仪器。
磁珠法核酸提取仪的基本原理
磁珠法核酸提取仪一般分为抽吸法和磁棒法两种 [2] :
1. 抽吸法,也叫移液法,是通过固定磁珠、转移液体来实现核酸的提取,一般通过操作系统控制机械臂来实现转移。提取过程如下:
1) 裂解:在样品中加入裂解液,通过机械运动及加热实现反应液的混匀及充分反应,细胞裂解,释放核酸。
2) 吸附:在样品裂解液中加入磁珠,充分混匀,利用磁珠在高盐低PH值下对核酸具有很强亲和力的特点,吸附核酸,在外加磁场作用下,磁珠与溶液分离,利用吸头将液体移出弃至废液槽,吸头弃掉。
3) 洗涤:撤去外加磁场,换用新吸头加入洗涤缓冲液,充分混匀,去除杂质,在外加磁场作用下,将液体移出。
4) 洗脱:撤去外加磁场,换用新吸头加入洗脱缓冲液,充分混匀,结合的核酸即与磁珠分离,从而得到纯化的核酸。