生理学实验强度时间曲线测定装置图

⑴ 如图甲表示在适宜温度和CO2浓度条件下，光照强度对某绿色植物光合作用强度的影响曲线，图乙表示该植物叶

（1）M点时，植物光合作用速率等于呼吸作用速率，即只有图乙中的a₁a₄b₁b₄过程．此时细胞中合成ATP的部位有细胞质基质、线粒体、叶绿体．
（2）P点表示呼吸作用速率，其大小主要受温度影响．
（3）突然停止光照，二氧化碳的固定速率不变，C₃还原的速率下降，导致C₃的含量增加．
（4）单位时间内二氧化碳的固定量表示真光合作用速率，等于净光合作用速率与呼吸作用速率之和，相当于乙图中的b₁+b₃．即0.6+0.4=1.0．
（5）根据表格可知，该实验的自变量是光照强度．无关变量是指除自变量外，可能会影响实验结果的因素，如二氧化碳浓度、黑藻的数量等．可以通过量筒中液体的体积变化量表示氧气的释放量．
（6）光照下，氧气的释放量表示光合作用速率大于呼吸作用速率，说明叶绿体产生的氧气除了供给线粒体利用外，还释放到细胞外，即a₃过程．
故答案为：
（1）细胞质基质、线粒体、叶绿体（不分顺序）a₂a₃b₂b₃
（2）温度
（3）上升
（4）1.0b₄（或b₁+b₃）
（5）光照强度CO₂浓度、黑藻量量筒中液体的体积
（6）a₃

⑵ 学校生物研究小组利用黑藻探究光照强度对光合速率的影响，设计一个实验装置如图甲所示．经过对实验结果分

（1）增加广口瓶与冷光灯之间的距离导致光照强度减弱，短时间内光反应减弱，为暗反应提供的ATP和[H]减少，还原的三碳化合物减少，导致五碳化合物在短时间内含量下降，三碳化合物的合成量基本不变．
（2）在冷光灯提供光照的条件下，装置甲有色小液滴向左移动，说明此时黑藻的光合作用小于呼吸作用，释放二氧化碳被溶液吸收，导致瓶内压强减小，液滴向左移动．
（3）已知该植物光合作用和呼吸作用的最适温度分别为25℃和30℃．在其他条件不变的情况下，将环境温度调节到25℃，是光合作用的最适温度，此时光合作用速率最大．呼吸作用的最适温度是30℃，25℃时呼吸作用速率下降，将环境温度调节到25℃，图乙中的A点将向左移动．
（4）光合作用的反应式是：6CO₂+6H₂O→C₆H₁₂O₆+6O₂，分析曲线图，在恒温30℃、光照强度达到B时，装置甲中黑藻的叶绿体每小时释放氧气总量是8mg，根据光合作用的反应式，8小时固定CO₂量为44×8×8÷32=88mg．
（5）实验探究需要遵循单一变量原则，对照原则，该实验设计缺少对照实验．
故答案为：
（1）下降基本不变
（2）光合作用速率小于呼吸作用速率
（3）左
（4）88
（5）缺少空白对照实验

⑶ 某学习小组拟设计如图1所示实验装置验证Ba（OH）2溶液和H2SO4溶液发生的是离子反应（夹持仪器略去）．（1

（1）开始氢氧化钡电离出氢氧根和钡离子导电，随反应进行，反应生成硫酸钡沉淀和水，溶液中无导电微粒，灯泡熄灭，继续加入硫酸，硫酸电离出氢离子和硫酸根导电，导电微粒的浓度越大，灯泡的亮度越大，
故答案为：烧杯中出现白色沉淀；灯泡由明变暗，直至熄灭，然后又逐渐变亮；实验过程中灯泡的亮度发生变化，说明离子浓度发生变化，则该反应为离子反应；
（2）氢氧化钡与硫酸反应生成硫酸钡和水，反应的离子方程式Ba²⁺+2OH^-+SO₄^2-+2H⁺═BaSO₄↓+2H₂O，故答案为：Ba²⁺+2OH^-+SO₄^2-+2H⁺═BaSO₄↓+2H₂O；
（3）A．假设NaHSO₄为1mol，使原溶液中的SO₄^2-恰好完全沉淀，需要Ba（OH）₂1mol，则发生反应的离子的物质的量分别为1mol，离子方程式为H⁺+SO₄^2-+Ba²⁺+OH^-=BaSO₄↓+H₂O，故A错误；
B．1molNaHSO₄加入Ba（OH）₂溶液0.5mol至溶液显中性，离子方程式Ba²⁺+2OH^-+SO₄^2-+2H⁺═BaSO₄↓+2H₂O，故B正确；
C．假设NaHSO₄为1mol，使原溶液中的氢离子和SO₄^2-恰好完全沉淀，需要Ba（OH）₂1mol，离子方程式为H⁺+SO₄^2-+Ba²⁺+OH^-=BaSO₄↓+H₂O，故C错误；
故答案为：B；
（4）导电微粒的浓度越大，灯泡的亮度越大，导电能力越强，即先减小再增大，故答案为：C．

⑷ 图甲是采用黑白瓶法测定某池塘夏季各深度24小时内的平均氧浓度变化曲线，纵轴表示水池深度，横轴表示瓶中

（1）当光照适宜时，水深2m处净光合速率为1.5g/m²﹒h，由于呼吸速率为1.5g/m²﹒h，故每平方米1小时制造的氧气总量为1.5+1.5=3（g）；水深3m处，净光合速率为0，说明光合速率等于呼吸速率，若将白瓶从2m移到3m处，光照强度小，光反应速率减慢，故C₃的还原减弱，C₃的含量增加．
（2）光照3m时，光合速率等于呼吸速率，光合作用的光反应阶段和有氧呼吸的三个阶段都能产生ATP，则产生ATP的场所有叶绿体、细胞质基质和线粒体．
（3）①随着灯泡与试管距离的增加，光照强度减弱，光合作用产生的O2减少
②随着光合作用的进行，水中CO₂含量逐渐下降，光合作用产生的O₂减少
（4）图乙中若用¹⁸O标记水，水和丙酮酸参与有氧呼吸第二阶段，生成了含有放射性的C¹⁸O₂．
故答案为：
（1）3增加
（2）叶绿体、细胞质基质、线粒体
（3）①光照强度减弱，光合作用产生的O₂减少②水中CO₂含量逐渐下降，光合作用产生的O₂减少
（4）水和丙酮酸参与有氧呼吸第二阶段，生成了含有放射性的C¹⁸O₂

⑸ 生化试剂实验中的反应曲线怎么看，要大白话，详细点，谢谢谢谢

一、基本结构
（一）按照反应装置的结构，自动生化分析仪主要分为流动式(FLOW SYSTEM)、分立式(DISCRETE SYSTEM)两大类。

1．流动式 指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。这是第一代自动生化分析仪。

2．分立式 指各待测样品与试剂混合后的化学反应都是在各自的反应杯中完成。其中有几类分支。

(1)典型分立式自动生化分析仪。此型仪器应用最广。

(2)离心式自动生化分析仪，每个待测样品都是在离心力的作用下，在各自的反应槽内与试剂混合，完成化学反应并测定。由于混合，反应和检测几乎同时完成，它的分析效率较高。

3．袋式自动生化分析仪是以试剂袋来代替反应杯和比色杯，每个待测样品在各自的试剂袋内反应并测定。

4．固相试剂自定生化分析仪(亦称干化学式自动分析仪) 是将试剂固相于胶片或滤纸片等载体上，每个待测样品滴加在相应试纸条上进行反应及测定。操作快捷、便于携带是它的优点。

(二)典型分立式自动生化分析仪基本结构

1．样品(SAMPLE)系统

样品包括校准品、质控品和病人样品。系统一般由样品装载、输送和分配等装置组成。

样品装载和输送装置常见的类型有：

(1)样品盘(SAMPLE DISK)，即放置样品的转盘有单圈或内外多圈，单独安置或与试剂转盘或反应转盘相套合，运行中与样品分配臂配合转动。有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放置多个弧形样品架(SECTOR)作转载台，仪器在测定中自动放置更换，均对样品盘上放置的样品杯或试管的高度、直径和深度有一定要求，有的需专用样品杯，有的可直接用采血试管。样品盘的装载数，以及校准品、质控品、常规样品和急诊样品的装载数，一般都是固定的。这些应根据工作需要选择。

(2)传动带式或轨道式进样 即试管架(RACK)不连续，常为10个一架，靠步进马达驱动传送带，将试管架依次前移，再单架逐管横移至固定位置，由样品分配臂采样。

(3)链式进样试管固定排列在循环的传动链条上，水平移动到采样位置，有的仪器随后可清洗试管。

分配加样装置大都由注射器、步进马达或传动泵、加样臂和样品探针等组成，①注射器(SYRINE UNIT)。根据注射器直径和活塞移动距离的多少，定量吸取样品或试剂。它的精度决定加样的精度，一般可精确到1微升。注射器漏液时，首先考虑是否探针堵塞，其次是注射器活塞磨损等。有的加液系统采用容积型注射泵和数控脉冲步进马达，提高精度。②样品探引(PROBE)与加样臂相联，直接吸取样品。探针均设有液面感应器，防止探针损伤和减少携带污染。有的设有阻塞检测报警系统当探针样品中的血凝块等物质阻塞时．仪器会自动报警冲洗探针，并跳过当前样品，对下一样品加样。有的还有智能化防撞装置遇到阻碍探针立即停止运动并报警。即使如此，它仍是非正规操作时的易损件。为了保护探针，除预先需要根据样品容器的高低、最低液面高度等进行设置外、，样品容器的规格、放置以及液面高度等设定条件不得随意改变。在某些仪器上，采样器和加液器组合在一起，加样品和加试剂或稀释液一个探针一次完成。③加样臂。连接探引，在样品杯(试剂瓶)和反应杯之间运动，完成采样和加样(加试剂)。它的运动方式，与仪器工作效率及工作寿命有一定关系。④阀门用以决定液体流动方向。⑤稀释系统。对样品进行预稀释、过后稀释或加倍，对标准原液系列稀释等。不同仪器的稀释方式有所差异，要注意识别。试剂系统亦有稀释功能：

2.试剂(REAGENT)系统一般由试剂储放和分配加液装置组成。

(1)试剂仓常与试剂转盘结合在起。多数仪器将试剂仓设为冷藏室，以提高在线试剂的稳定期。

(2)分配加液装置(DISPENSE UNIT)。与样品系统的类似。，试剂探针常常可以对试剂预加温，双试剂系统的试剂2(R2)探针起始量宜较下，以便配合不同R1/R2比例的试剂。

(3)试剂瓶(BOTTLE)。有不同的形状及大小规格。如 COBAS MIRA PLUS仪有4、10、15、35ML等规格，瓶底呈凹形，OLYMPUS AU600仪有30和60ML两种；日立7060仪有20、50、100ML三种等规格。应根据工作量和试剂规格．考虑试剂瓶残留死体积和更换频率，合理选用。独特设计的卡式试剂盒，体积小，防蒸发，方便储存。

(4)配套试剂常有条形码，仪器设有条形码检查系统，可对试剂的种类、批号、存量、有效期和校准曲线等货剌，进行核对校验，如BECKMANCX7等。

(5)试剂瓶盖自动开关系统，更有利于试剂保存。有的仪器可在运行中添加，更换试剂，有的则须在暂停状态进行。

3.条形码(BARCODE)识读系统

一般由扫描系统、信号整形和译码器三部分组成。扫描系统以光源扫射黑条白空相间的条码符号由于条和空对光的反射不同、不同宽窄的条符反射光持续时间不同，产生强度不同的反射光．再经光电转换元件接收并转换成相应强度的电信号，最后通过信号整形，由译码器解译。系统自动识别样品架及样品编号识别试剂、校准品及其批号、失效期，有的并可识别校验校准曲线等信息。

实验室常用条形码类型有CODE 39、CODE 128、2 OF 5 STANDARD、INTERLEAVED2OF 5等。要自编样品条形码需要条形码输入器，条形码阅读系统与条形码要匹配。已有全自动试管分配暨条形码粘贴准备系统。

4．反应系统

(1)反应盘装载一系列反应比色杯（CUVETTES）,多为转盘形式。反应测定过程中按固定程序，在加样臂、加液臂、搅拌棒、光路和清洗装置之间转动。有的仪器在反应杯中完成反应后再吸入比色杯比色，现在更常见反应和检测同在比色杯中进行，效率更高，尤其适于连续监测法。比色杯多采用硬质石英玻璃、硬质玻璃、无紫外光吸收的丙烯酸塑料等，使用寿命不一。DIMENSION系列的比色杯在机器内自动制造，自动封口，免冲洗，无污染。流动池式主要在小型分析仪用。容积一般几十微升，但抽液管道占用较多反应液，多样品连续使用，增加交叉污染机会。

蠕动泵(PUMP)。半自动生化仪需要蠕动泵抽吸反应液进人流动比色池作测定。要求定期对蠕动泵校准，即通过吸人定量的水来检验泵的吸液量是否准确。一般均设有泵校准功能。

(2)混合装置(MIXING UNIT) 如采用多头回旋搅拌棒(二头双清洗式搅拌系统)。搅拌棒常具特氟隆不粘涂层，避免液体粘附。

(3)温控装置生化分析仪通过恒温控制装置来保持孵育温度的调控和恒定也是由计算机来控制的，理想的孵育温度波动应小于±01℃。保持恒温的方式有三种。①空气浴恒温：即在比色杯与加热器之间隔有空气。空气浴恒温的特点是方便、速度快、不需要特殊材料，但稳定性和均匀性较水浴稍差。罗氏(ROCHE)的COBAS和0LYMPUS AU2700系统采用的就是空气浴恒温模式。②水浴循环式：即在比色杯周围充盈有水，加热器控制水的温度。水浴恒热的特点是温度恒定，但需特殊的防腐剂以保证水质的洁净，且要定期更换循环水。日立系统生化分析仪采用的即是水浴循环恒温装置。⑧恒温液循环间接加热式：结构原理是在比色杯周围流动着一种特殊的恒温液(具无味、无污染、惰性、不蒸发等特点)。比色杯和恒温液之间有极小的空气狭缝，恒温液通过加热狭缝的空气达到恒温，其温度稳定性优于干式，和水浴式循环式相比不需要特殊保养。

5．清洗(WASH)系统

探针和搅拌棒采用激流式等方式自动冲洗。清洗装置一般由吸液针、吐液针和擦拭刷组成。清洗工作流程为吸出反应一吸于一注入纯水一吸干一擦干。清洗液有碱性和酸眭两种。一般说来，在吸出反应液后，仪器先用碱性液冲洗，再用酸性液冲洗，最后用去离子水冲洗三遍。擦拭刷的功能是吸去杯壁上挂淋的水，刷体内部有负吸装置。使用进程中要注意擦拭刷是否磨损。

值得注意的是，对于常规冲洗还不能清除交叉污染(CARRY—OVER)的实验要特别处理，以减少交叉污染或携带污染。例如，胆固醇测定试剂中的胆酸盐对血清总胆汁酸的测定有干扰，在消除交叉污染的程序中，可输入程序，指令总胆汁酸不在测试胆固醇的比色杯中进行测定，如不能避开，仪器则对比色杯进行特别冲洗，防止发生交叉污染。

冲洗水的水温自动控制到与恒温反应槽温度相近，保证反应系统的恒温，并增加去污力。急诊测定后采用针对性清洗，似乎比采用固定的全面清洗程序更有效率更经济。耗水量仪器间相差较大。

ABBOTT AEROSET 自动生化分析仪等系统具有自动清洗功能(SMART WASH)和最佳标本顺序选择功能(OSS)。即仪器根据试剂或样品间交叉污染的项目组合，自动改变检测顺序，避免互有影响的分析项目；确实无法回避时，则采用选定的特殊清洗剂作自动清洗。

6．比色系统

(1)光源多数采有卤素灯，工作波长为325～800NM。卤素灯的使用寿命较短，一般只有1 000～L 500小时。当灯的发光强度不够时，仪器会自动报警，应及时更换，部分生化分析仪采用的是长寿命的氙灯，24小时待机可工作数年，工作波长285-750NM。

(2)比色杯 自动生化分析仪的比色杯也是反应杯。比色杯的光径0.5～0.7 CM不等，通常为石英或优质塑料。光径小的省试剂，当比色杯光径小于1 CM时，部分仪器可自动校正为1CM。生化分析仪的比色杯自动冲洗装置在仪器完成比色分析后做自动反复冲洗、吸干的动作，比色杯在自动检查合格后继续循环使用。要及时更换不合格的比色杯。如采用的是石英比色杯，比色杯要定期检查清洗。

(3)单色器与检测器各类自动生化分析仪应用的是可见一紫外吸收光谱法，即监测200-700NM光区某特定波长下发色基团吸光度的变化，辅以微机软件系统的计算来完成测定。可见一紫外吸光谱定量的基础是LAMBER—BEER定律。

传统的分光度测定普遍采用前分光，即在光源灯和样品杯之间先要用滤光片、棱镜或光栅分光，通过可调的狭缝，取得与样品“互补”的单色光之后，照射到样品杯，再用光电池或光电管作为检测器，测定样品对单色光的吸收量(吸光度)。

而现代大多生化分析仪采用后分光测量技术。后分光测定：将一束白光(混合光)先照到样品杯，然后再用光栅分光，同时用一列发光二极管排在光栅后面作为检测器。后分光的优点是不需移动仪器比色系统中的任何部件，可同时选用双波长或多波长进行测定，这样可降低比色的噪声，提高分析的精确度和减少故障率。

生化仪的单色器即分光装置，有干涉滤光片和光栅分光两类。干涉滤光片有插入式和可旋转的圆盘式两种。插入式就是将需用的滤光片插入滤片槽中，圆盘式是将仪器配备的滤光片都安装在圆盘中，使用时旋转至所需滤光片处即可。干涉滤光片价格便宜，但易变潮霉变，从而影响检测结果的准确性，半自动生化分析仪多采用此种滤光片。

光栅分光可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅两种。前者是在玻璃上覆盖一层金属膜后制成，有一定程度的相差易被腐蚀；后者是将所选波长固定地刻制在凹面玻璃上，耐磨损、抗腐蚀、无相差。全自动生化分析仪多采用光栅分光。

7．程序控制系统

计算机是自动生化分析仪的大脑，标本、试剂的注加和识别，条码的识别，恒温控制，冲洗控制，结果打印，质控的监控，仪器各种故障的报警等都是由计算机控制完成。仪器一代胜过一代，自动化程度越来越高，有的仪器甚至可以完成部分日常保养程序。自动生化分析仪数据处理功能日趋完善，如：反应进程中吸光度，各种测定方法，各种校准方法室内质控结果的统计等，生化仪都可进行处理。计算机还可以调看病人的数据、仪器的性能指标、仪器的运行状态等。自动生化仪中的质控和病人结果还可通过仪器计算机与实验室信息系统(LIS)的对接进行网络管理。

程序控制器是系统的硬件部分。它主要包括：

(1)微处理器和主机电脑。用于仪器各个单元和总体控制，应具有程控操作、故障诊断、多种数据处理和储存等强大功能。一般根据仪器功能的需要和电脑硬件市场的主流产品来配置。

(2)显示器(CRT MONITOR UNIT)。通常用键盘、鼠标、触摸屏等方式进行操作。

(3)系统及配套软件。多采用WINDOWS-NT或WINDOWS界面，具全图形化设计，多菜单选择，信息导引，故障报警，帮助提示，人机“对话”，方便直观，不少仪器有即时反应曲线显示。

(4)通过RS 232 C等数据接口与其他计算机、打印机等设备传输数据。具人工智能双向通讯系统(HOST QUERY)，仪器可直接自行向主电脑询问病人／样品基本资料及检测项目。有的具远程通讯及监控功能，可遥控远处测试及维修检查，实现网络工作。

自动生化分析仪均采用程序控制的自动分析。分析程序一经确定，工作时只要简单地输入测定项目或编码，仪器即可按编制程序自动完成测定、计算和报告。具体的控制程序因仪器而异，一般分为固定程序和自编程序两种。固定程序为仪器厂家预先设定，常与指定试剂配套；有的不能更改，有的也可由用户修改。它与配套试剂一同使用时，既方便工作，质量也比较可靠，但成本较高。自编程序灵活实用，便于开发新项目，强调程序的灵活性。比如，成批测定过程中应可随时插入急诊标本测定而不打乱原有程序；单个急诊标本测定操作简捷、消耗少，可灵活预稀释或重复测定。

二、仪器一般工作流程

生化分析仪的正确应用，只是掌握了测定技术原理还不够，还需要对具体仪器的工作流程及测定计算方法有足够的了解。

(一)一般工作流程

工作流程可以通过仪器的测定周期来考察。重点关注比色杯空白读数点(CB)、加样品点（S）、各试剂加液点(R1、R2、……)、试剂空白读数点(RB)、各测定读数点(P)、各点时间间隔及周期总时间等。每个仪器一般都在反应转盘的固定位置和反应测定周期的固定时间设置样品试剂和稀释的加液位，以及测定读数点。如HITACHI 7170在P1到P34周期为10分钟时，PO前加样品，RL在PL前，R2在P5和P6间，R3在P16和P17间，R4在：P33和P34间。

(二)数据处理计算方法

仪器在各个吸光度读数点读取的吸光度数据，并不一定都纳人浓度计算。仪器往往根据仪器定义和操作者设定的要求，对吸光度原始数据作计算处理，转换成所谓反应数据，再按系数或公式作浓度计算。举例如下：

1．HITACH 7170的终点法测定点(A )吸光度计算为(AX+AX－1)／2。实际吸光度=吸光度数据×10 000。

2．0LYHPUS AU 600试剂空白数据：P0点试剂空白(RB)=P0点吸光度一比色杯水空白(WB)；任一测定点试剂空白(RB )。该点吸光度一比色杯水空白(WB)。

3．MONARCH 1 000两点终点法的反应数据。(终点测定吸光度一终点空白吸光度)一(始点测定吸光度一始点空白吸光度)。

4．AU 600的终点法(带试剂空白，END法)的反应数据=终点吸光度一P0点吸光度(试剂空白，RB)。终点法(不带试剂空白，END)．法)的反应数据=终点吸光度-比色杯水空白(WB)。

5．AU 600的两点法(自身空白)的反应数据=[加第二试剂后测定点读数一P0点读数]一[加第二试剂前测定点读数一PO点读数]。

三、主要操作程序

(一)仪器运行前操作程序

主要进行仪器的基本设置：

L．试验项目设置对试验名称、编码，试验组合(PROFILE)、试验轮次(ROUND)，必要时包括试验顺序等设置。

2．各试验的参数设置包括试验间比值、结果核对等参数的设定。

3．剂设置根据有关试验参数，设置各试验的试剂位、试剂瓶规格，必要时设定试剂批号、失效期等。

4．校准品设置对校准品的位置、浓度和数量等进行设置。

5．质控设置 根据质控要求。设置质控物个数，质控规则，质控项目及相应质控参数等。

6．样品管设置 包括样品管类型，残留液高度（死体积），识别方式等设置。

7．其他设置对数据传输方式、结果报告格式、复查方式及复查标准等设置。

(二)常规操作程序

开机(预热、保养)-设置开始条件(日期时间索引、轮次、样品起始号等)-根据需要，申请校准、质控和病人测定项目(包括架号、杯号或顺序号。测定中可继续申请)_装载校准品、质控物和病人标本-装载试剂-核对仪器起始状态（未应用条码系统，采用顺序识别样品时，尤其要核对测定起始编号是否与样品架号和申请号相符）-定标和质控测定-检查定标和质控结果-病人标本测定-测定过程监控（试剂检查，观察分析结果，编辑校正）-数据传递（打印报告，向检验管理系统传输，包括工作量统计、财务统计、病人情况追踪、质控分析等)。测定后保养。

(三)测定结果检查分析

1．要了解和熟悉仪器的各种警示符号的含义与作用在正确设定参数的前提下，利用各种警示符能提高 们发现问题和解决问题的效率。

2．要熟悉和灵活运用仪器的相关操作屏(界面) 如：用反应过程监测(REACTION MONITOR)，观察反应时间进程曲线；用校准追踪(CALIBRATION TRACE)回顾分析校准曲线；利用统计(STATISTICS)了解不同日期段病人测定均值及数据分析；运用分析数据编辑(DATA EDIT)察看和校正测定数据。

3．校准的检查要充分利用仪器设置的功能，监测校准曲线图形、各校准点吸光度值(不能忽略试剂空白值及空白速率值)、计算K值等的波动情况，以及与以往的比较。必要时，应进一步检查反应时间进程曲线。必须结合质控数据来把握实验条件。

4．病人结果的检查除了目测观察或用血清指数了解标本性状，注意和了解临床资料及诊断外，学会分析反应时间进程曲线及数据是重要的基本功。

四、基本测定方法

(一)终点法(END POINT METHOD)

根据反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其吸光度大小，对物质进行定量分析的方法。对一般化学反应来说，反应完全(或正、逆反应动态平衡)、反应产物稳定时为反应终点。对抗原一抗体反应来说，是抗原和抗体完全反应、形成最大且稳定的免疫复合物时为终点。在反应时间进程曲线上为与X轴平行线区段。在测定计算方式上，一般分为一点法和两点法两种。

1．一点法(ONE POINT) 以试剂和样品混合之前的空气空白(GB)、水空白(WB)或试剂空白(RB)的吸光度值为测定计算基点，以反应终点的吸光度读数减去空白读数，得到反应吸光度。通过与相同条件下校准液反应吸光度的比较，求得测定结果。常与一点校准法配合使用，即采用一个校准浓度，校准曲线通过零点且成线性。也应用多点校准。

2．两点终点法(TWO POINT END)即终点一始点法 以试剂和样品混合之后的某一时间点作为始点，以反应终点的吸光度读数减去始点读数。一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰(主要指色度干扰)。常采用双试剂，多以加R2前某一点作测定始点；某些情况下，也可以加R2后一点作测定始点。若使用单试剂，主反应启动太快或仪器起始读数点受限时难以运用。

固定时间法(FIXED METHOD)与两点终点法的区别只是在：测定读数的末点不在反应平衡区段，而是根据方法学选择。如血清肌酐(苦味酸法)测定。

3．三点终点法 即双终点法，在一个通道内一次进行两项反应相关的终点法测定。比如同测游离脂肪酸和甘油三酯。某些仪器(如HITACHI系列)设置此方法。

(二)连续监测法(CONTINUOUS MONITORING METHOD)

又称速率法(RATE ASSAY)。即连续监测反应过程，根据所测定的产物生成或底物消耗的速度进行定量分析的方法。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段(斜率保持不变)，常用于酶活性线性反应期测定。

1．连续监测法即零级反应速率法，亦称斜率法。在较长的反应时间区段内(至少90-120秒)，每隔一定时间(常为2~30秒)读取一次吸光度值，至少读取4点，得到3个△A；一般将连续多次读数作最小二乘法处理，读数间隔时间太短的作带速率时间(TR)多点法处理，均取线性反应部分的读数，求出单位时间内的反应速率△A/MIN。此法必须以零级反应为测定计算的基础，因为只有在零级反应下，单位时间内的吸光度变化(反应速率△A/MIN)才与酶活力呈正比。此法相对减少了分析误差，大大提高了分析速度和准确性。但是，半自动生化分析仪采用单样品连续监测，相当耗时。应用连续监测法，首先应准备线性范围内的高、中、低浓度的样品，分别作反应时间进程曲线，了解不同浓度下反应全过程，兼顾确定延迟时间和线性监测期。

2．两点速率法即所谓拟一级速率法。在反应中选取两时问点T 1、T 2，读取吸光度A 1、A2，计算(A2-A1)，(T2-T1)=△A，△T。此方法与终点两点法的区别主要有两点：后一读数点反应未达终点，以速率计算结果。它与连续监测法比较，缺点在于人为确定T 1、T 2，不定因素较多，不能保证反应在T 1-T 2期间呈线性，影响结果准确性；应在常规测定前，先做预试验来确定线性时间段。若在选择的时间段内反应不成线性(如零级反应期短，仪器无法设置或测定)，则只能改用终点法。优点在于方法简单；酶活力较低、测定吸光度值较小时，可增加测定时间段而不受仪器连续监测时间点的局限，减少读数误差。

3．速率B法在一个通道内一次进行两项反应相关的速率法测定。它既可以是两项试验测定，也可用于干扰或／及样品空白自动补偿0后一用途的原理是：利用仪器的微机自动处理，在第一反应(干扰反应)一直维持线性的前提下，可以从第二反应(主反应)速率中扣除第一反应速率的延续影响。如用于消除胆红素转化为胆绿素吸光度下降、对肌酐苦味酸法测定的负干扰等。某些仪器(如HITACHI系列)设置此方法。

(三)空白(BLANK)校正

在分光光度法中，常利用空白溶液来调节仪器的吸光度零点，或用来抵消某些测定的干扰因素。在生化分析仪测定中，除了采用双或多波长、两点法等排除背景干扰外，常要运用专门空白测定，以便从样品测定吸光度中扣除其影响。正确选择空白校正，对提高准确度起重要作用。

1．试剂空白一般在方法类型和校准模式中，即分为有或无试剂空白两大类。试剂空白单独测定或与校准配合测定，并需预选装载去离子水样品杯或试剂空白架。校准或病人样品的各测定点吸光度，均要扣除相应测定点的试剂空白吸光度或空白速率值。无试剂空白的方法，多直接以反应杯的水空白作为测定基准值。

在不少仪器中，试剂空白测定类似校准测定，并非在病人样品测定时实时测定。所以，要注意它的测定频率，避免因试剂批号或质量的变化造成试剂空白的改变引起的计算误差。

2.样品空白 主要为了消除样品本身混浊或色度的干扰。常采用空白通道法，测定校正结果=显色反应通道结果-空白通道结果。多数仪器须另外占用测定通道，分析速度减半，但去干扰的准确性应高于两点终点
参考资料：
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⑹ 二氧化碳吸收的24小时曲线图

（1）气孔是植物体与外界进行气体交换的“窗口”，因此植物体吸收和释放二氧化碳主要是通过叶片上的气孔完成的．
（2）“观察曲线可知”，AB段的二氧化碳浓度逐渐升高（填“升高”或“降低”），这是植物进行呼吸作用的结果．
（3）BE段二氧化碳的浓度逐渐降低（填“升高”或“降低”）j是由于这段时间有光，植物进行光合作用，植物吸收的二氧化碳多于（填“多于”或“少于”）释放的二氧化碳．
（4）装置内二氧化碳浓度最低的时间点约为18时，二氧化碳浓度的变化曲线可说明植物对维持空气中的碳一氧平衡有重要作用．
故答案为：（1）气孔    
（2）升高；呼吸
（3）降低；光；光合；多于
（4）18；碳一氧

⑺ 在适宜的条件下，测定光照强度对植物光合作用速率的影响．下图甲表示实验组的装置，图乙表示在不同光照强

（1）图甲中的植物进行光合作用，需要光合作用的原料二氧化碳，图中B装的是碳酸氢钠，目的是为植物进行光合作用提供二氧化碳；根据图乙，在光照强度为2千勒司的时候，氧气既不吸收也不释放，说明光合作用强度等于呼吸作用强度，所以图甲内的气体的体积不会增加，液面不移动．
（2）在光照强度为4千勒司的时候，净光合作用强度为6mgO₂/100cm²叶片?小时，根据光合作用的方程式可知：每100cm²叶片每小时有机物（假设产物是葡萄糖）增重：180×6÷（6×32）≈5.6mg．
（3）在F点和F点以后，在增加光照强度，光合作用强度不再增加，所以光照强度不再影响光合作用强度，影响因素可能是CO₂浓度、温度等．
（4）若图甲中的叶片过密，导致呼吸作用增大，所以图乙中的曲线整体下移．
（5）在B瓶中加入离体的叶绿体为实验材料后，植物不再进行呼吸作用，而植物真正的光合作用强度=净光合作用强度+呼吸作用强度，在光照强度为8Klx时，每100cm²叶片每小时氧气为12mg+6mg=18mg．
（6）将该植物叶片从光下移到黑暗中，光反应停止，[H]和ATP减少，则三碳化合物的还原减弱，导致三碳的消耗减少，而三碳的合成不变，所以叶绿体中C₃化合物含量短时间内的变化上升．
故答案为：（1）碳酸氢钠（或Na₂CO₃）；不变（或液面等高）
（2）5.6mg（保留1位小数）
（3）CO₂浓度、温度等（回答一种即可）
（4）向下．
（5）18mg
（6）上升

⑻ 生理学实验设计~~~急求

家兔动脉血压的神经和体液调节
【目的】

本实验采用直接测量和记录动脉血压的急性实验方法，观察神经和体液因素对动脉血压的调节作用。

【原理】

在生理情况下，人和其它哺乳动物的血压处于相对稳定状态，这种相对稳定是通过神经和体液因素的调节而实现的，其中以颈动脉窦－主动脉弓压力感受性反射尤为重要。此反射既可在血压升高时降压，又可在血压降低时升压，反射的传入神经为主动脉神经与窦神经。家兔的主动脉神经为独立的一条神经，也称减压神经，易于分离和观察其作用。在人、犬等动物，主动脉神经与迷走神经混为一条，不能分离。反射的传出神经为心交感神经、心迷走神经和交感缩血管纤维，心交感神经兴奋，其末梢释放去甲肾上腺素，去甲肾上腺素与心肌细胞膜上的b受体结合，引起心脏正性的变时变力变传导作用，心迷走神经兴奋，其末梢释放乙酰胆碱，乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合，引起心脏负性的变时变力变传导作用，交感缩血管纤维兴奋时释放去甲肾上腺素，后者与血管平滑肌细胞的a-受体结合引起阻力血管的收缩。

本实验应用液压传递系统直接测定动脉血压。即由动脉插管、测压管道及压力换能器相互连通，其内充满抗凝液体，构成液压传递系统。将动脉套管插入动脉内，动脉内的压力及其变化，可通过密闭的液压传递系统传递压力，通过压力换能器将压力变化转换为电信号，用微机生物信号采集处理系统记录动脉血压变化曲线。

【预习要求】

1．仪器设备知识 参见第二章第三节 RM6240微机生物信号采集处理系统（或第四节PcLab和MedLab微机生物信号采集处理系统）。

2．实验理论 实验动物知识参见第三章第一节 生理科学实验常用实验动物的种类；第四章第一节 动物实验的基本操作、第四节 实验动物手术；统计学知识参见第5章第四节 常用统计指标和方法；生理学教材有关动脉血压的调节。检索全文数据库中的相关研究论文，检索方法参见第五章第五节。

3．预绘制实验原始数据记录表格和统计表格。

【材料】

家兔，动脉插管，血压换能器，生物信号采集处理系统，200g/L氨基甲酸乙酯，1000U/ml的肝素，0.1g/L去甲肾上腺素，10-2g/L乙酰胆碱。

【方法】

1．实验系统连接及参数设置

（1）颈动脉血压测量记录装置。将血压换能器固定于铁支柱上，其位置应与心脏在同一平面。

（2）压力换能器输出线接微机生物信号处理系统第4通道（亦可选择其它通道）。微机生物信号处理系统参数设置：

① RM6240系统：点击“实验”菜单，选择“循环”或“自定义实验项目”菜单中的“兔动脉血压调节”。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：4通道时间常数为直流，滤波频率100Hz，灵敏度12Kpa，采样频率800Hz，扫描速度 500ms/div。连续单刺激方式，刺激强度5~10V，刺激波宽2ms，刺激频率30 Hz。

② PcLab和MedLab系统：点击“文件”菜单“打开配置”中的“动脉血压记录”项目。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：1通道放大倍数200、直流（DC）耦合，采样间隔1ms；串刺激方式，波宽2ms，刺激强度5~10V，时程1s，频率30 Hz。

（3）血压换能器定标 为定量记录血压及血压变化的幅度，测量系统需在记录之前定标。定标方法：在见图7-16-1中，三通连接水银检压计和充以生理盐水的注射器，打开弹簧夹使与大气相通，仪器开始记录，并将通道基线调至与零线重合。注射器缓慢注水，排尽空气，夹上弹簧夹。继续注水，使水银检压计压力达到24.0Kpa（180mmHg）。保持采样一段时间，打开微机生物信号处理系统定标（单位修正）对话框，输入水银检压计指示的压力值。实验过程中不能改变定标数值。

实验室一般情况下已将仪器和血压换能器系统进行了定标，无须再定标。

2．手术准备（参见第四章第一节 动物实验的基本操作、第四节 实验动物手术）

（1）家兔称重后，氨基甲酸乙酯按1g/kg体重的剂量于耳缘静脉注射麻醉。注意麻醉剂不能过量，注射速度不宜过快。

（2）动物仰卧固定缚于手术台上，固定四肢，前肢交叉固定，用棉绳钩住兔门齿，将绳拉紧并缚于兔台铁柱上。

（3）暴露颈部气管、颈总动脉、颈静脉、迷走神经和减压神经。用玻璃分针仔细分离右侧上述神经，穿细丝线。分离两侧颈总动脉和两侧颈静脉，各穿一线备用。

（4）给动物静脉注射肝素，剂量为1000u/kg体重。等1分钟后再进行下一步骤，以使肝素在体内血液中混合均匀。

（5）颈总动脉插管 左颈总动脉远心端结扎，近心端用动脉夹夹住，并在动脉下面预先穿一丝线备用。用眼科剪在靠近结扎处动脉壁剪一“V”字形切口，将动脉套管向心方向插入颈总动脉内，扎紧固定。打开动脉夹。

【模拟实验操作方法】

1．模拟实验窗口（图6-2-7） 家兔颈部动脉插管用三通压力换能器与水银检压计相连，水银检压计指示动脉血压，家兔呼吸运动用其腹部动画展现，并与仿真记录仪记录的血压曲线二级波同步。

2．手术刀 鼠标点击手术刀并拖动至家兔颈部释放，启动动脉插管录像，动脉插管录像结束，记录仪描记动脉血压曲线。鼠标点击手术刀并拖动至家兔颈部手术放大图的神经上方释放，切断神经。

3．仿真三道记录仪 第一道记录动脉血压曲线，第二道记录心率，第三道记录实验项目标记。仿真记录仪面板设灵敏度、位移、纸速调节按钮，面板设数字显示框，分别显示记录仪第一道灵敏度、动脉血压、心率、实验项目。

4．刺激器 打开电源开关后，鼠标器点击刺激电极拖动至家兔颈部手术放大图的神经上方释放，释放位置不同、可分别产生刺激迷走神经中枢端、迷走神经末梢端、主动脉神经中枢端、主动脉神经末梢端引起的动脉血压变化。

5．注射器 鼠标器点击注射器拖动至家兔耳部上方释放，向输入框输入药品剂量，点击确定，药品从家兔耳缘静脉注入。动脉血压因药物作用而发生变化，药品剂量1:10000 去甲肾上腺素 0.3ml。

6．测量按钮 按测量按钮，仿真记录仪显示所做实验项目的实验曲线，仿真记录仪面板按钮变为图标按钮，有放大、缩小、压缩、扩展、定位图标按钮，分别可使仿真记录仪内的实验曲线纵向放大或缩小，横向压缩或扩展，定位图标按钮可使所选记录曲线处的位置移到仿真记录仪左边框。

7．测量状态 在测量状态下，鼠标器在仿真记录仪内移动，可对实验曲线进行测量，并从仿真记录仪的面板数字显示框“血压”和“Time”中读出血压值和心动周期时间。在曲线上点击，可测量相对值。拖动仿真记录仪面板上的滚动条，可使实验曲线左右滚动，显示前后实验数据曲线。

⑼ 植物的光合作用和呼吸作用强度可以用单位时间内呼吸或释放二氧化碳的量来表示．图甲曲线表示在恒温30℃时