蟾蜍腓肠肌实验装置

A. 关于蟾蜍实验的问题。(急!!)(回答后追加100分)

双毁髓-毁蛙的脑和脊髓

·毁髓针刺入部位必须准确；毁髓针垂直刺入枕骨后凹皮肤即可，不要刺得太深。
·毁脑髓时，针体与蛙颅顶平行刺入颅腔；毁脊髓时，针体与脊柱平行插入椎管。
·脑脊髓彻底毁坏的标志：四肢(尤其下肢)肌紧张消失，并常伴有尿失禁情况。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动状态，则必须重新毁髓。

3、制备脊蛙

·待蛙苏醒后再进行蛙体实验。
·冬季应先将蛙放在30℃～40℃的温水中浸浴若干分钟，待其较活跃时再进行实验；实验过程中用温水清洗蛙体上的残余硫酸。

4、脊髓反射和反射时的测定
·每次酸刺激前，蛙体须处于安静状态。
·每次反射活动出现后，用清水洗去蛙体上残余硫酸，再用纱布拭去蛙体上水滴。
·反射时的测定应重复三次实验，取其平均值，即为其反射时；每次实验的刺激强度(如：硫酸浓度、纸片大小)和部位应保持一致。

5、反射弧的分析

·用眼科剪在踝关节处剪一环形切口时候，勿损伤血管。
·右后肢最长趾的皮肤必须除干净(为什么)。
·每次刺激后用清水洗去蛙体上的残余硫酸，再用纱布擦拭去蛙体上的水滴(为什么)。

·坐骨神经下置麻药棉球后，应立即记时并进行屈反射实验。
·屈反射不再出现时，立即进行搔扒反射实验。
·在屈反射(或搔扒反射)仍存在时，应每隔1min重复1次酸刺激。
·每次酸刺激后用水清洗蛙体时，勿使水浸到麻药棉球。

6、蛙心搏起源的分析

·实验过程中常用任氏液浸润心脏，以保持心脏生理活性。
·用玻璃针拨动心尖，暴露心脏背面。
·不同温度刺激心脏某一部位时，切勿触及心脏其他部位，以免影响实验结果。
·斯氏结扎部位必须准确。
·每次读取数据时，重复3次，取平均值。

7、观察肠系膜微循环

·麻醉蛙时，注射器针头不要刺穿下颌部皮肤。
·将肠系膜展开过孔时，不可牵拉太紧，以免撕破血管或阻断血流。
·经常用任氏液湿润肠系膜，以免干燥，影响血液循环。
·滴加药物，血管及血流出现变化后，立即用任氏液润洗肠系膜。

8、蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的制备

在制备标本过程中：
·经常用任氏液浸润标本。
·不能用金属器皿触碰神经干。
·不得让动物的皮肤分泌物、血液等浸染神经和肌肉。
·用任氏液清洗手及解剖器具上的污物。

http://home.htu.cn/jingpinkecheng/dwslx/shiyanjiaochen/022.htm 蛙心灌流看这个

B. 以蟾蜍为材料的实验

可以做很多实验，最经典的一个实验就是蛙腿腓肠肌标本的制备，可以看到很好的条件反射。
http://www.ccty.org/jpkc/HTML/56621.html
最简单的实验莫过于观察蟾蜍抱对了，再不行就解剖蟾蜍卵。或者你安排一个蟾蜍心脏分离实验
实验目的就是分离蟾蜍心脏，步骤包括处死蟾蜍，蟾蜍解剖，和分离心脏，再剪下心脏，看到心脏并描述一下，实验就算成功了。这个实验可以看到蟾蜍心脏离体后仍然跳动一段时间，可以记录一下蟾蜍心脏一共跳动了多长时间。

C. 蟾蜍腓肠肌的制备

锌铜之间有电势差，放在神经上等于给其一个电刺激
水分，电解质，温度，ph，所以要用保护液罗

D. 肌肉的收缩特征实验

目的和原理] 目的：观察肌肉收缩的形式及刺激频率与肌肉收缩反应之间的关系。原理：当给神经肌肉标本一个阈上刺激时，肌肉即发生一次收缩反应。用记录仪描记收缩过程，可得到一次单收缩曲线。每个单收缩曲线依次分为三个时期，即潜伏期、收缩期与舒张期。如相继给两个以上阈刺激，刺激之间的间隔超过一个单收缩的持续时间，则肌肉将出现一连串各自分离的单收缩；若刺激间隔时间比单收缩的持续时间短，则前一个收缩还未结束就开始后一个收缩，这样两次收缩就会重叠起来，这种现象称复合收缩。如果后一个收缩是在前一个收缩的舒张期内发生，各自收缩复合的结果，会出现一持续的锯齿状的收缩曲线，这种收缩称为不完全强直收缩。若刺激之间的间隔时间比单收缩的收缩期短，后一收缩就在前一收缩期内发生，结果会出现一持续的收缩曲线，完全看不到舒张期的形迹，这样的持续收缩状态称为完全强直收缩。

[实验动物] 蟾蜍

[实验器材与药品] 肌槽、万能支台、蛙板、蛙类手术器械、肌肉张力换能器、RM6240多道生理信号采集处理系统、任氏液。

[实验步骤]

（一）制作坐骨神经腓肠肌标本

1、破坏脑和脊髓：取蟾蜍一只，左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持探针从枕骨大孔垂直刺入（图4-1A），然后向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；将探针抽出再由枕骨大孔向后刺入脊椎管捣毁脊髓，此时如蟾蜍的四肢松软，表示脑脊髓已完全破坏，否则应按上法再进行捣毁。

2、剪除躯干上部及内脏：在骶髂关节水平以上0.5~1 cm处剪断脊柱（图4-1B），左手握蟾蜍后肢，用拇指压住骶骨，蟾蜍头与内脏自然上垂，右手持大剪刀沿两侧除内脏及头胸部（图4-1C），仅留下后肢、髋骨、脊柱及由它发出的坐骨神经。

3、剥皮：左手提脊柱断端，右手捏住其上的皮肤边缘（图4-1D），向下剥掉全部后肢皮肤将标本放在盛有任氏液的培养皿中。

图4-1 蛙类手术操作示意图

4、将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净，再进行下述步骤。

5、分离两腿：用镊子从背位夹住脊柱，将标本提起，剪去向上突出的尾干骨，然后沿正中线用剪刀将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，这样两腿即完全分离。将两条腿浸于盛有任氏液的培养皿中。

6．制作坐骨神经腓肠肌标本

取一腿放于蛙板上。

（1）游离坐骨神经：用玻璃钩沿脊柱侧游离坐骨神经，将标本背侧向上放置，把梨状肌及其附近的结缔组织剪断，再循坐骨神经沟找出坐骨神经之大腿部分（图4-2），用玻璃钩小心剥离，然后从脊柱根部将坐骨神经轻轻提起，剪断坐骨神经的所有分支，将坐骨神经一直游离至腘窝为止。

（2）完成坐骨神经小腿标本：将游离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉大腿肌肉并用剪刀将股骨刮干净，然后在股骨中部剪去上段股骨，制成坐骨神经小腿标本。

（3）完成坐骨神经腓肠肌标本：将上述坐骨神经小腿标本在跟腱处穿线结扎后剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节处，然后齐膝关节将小腿其余部分全部剪断。这样就制得具有附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的标本（图4-3）。

用任氏液粘湿的铜锌弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生明显的收缩，则表示标本的兴奋性良好，即可将标本放在盛有任氏液的培养皿中，以备实验之用。

（二）记录装置的准备

1、根据标本收缩力的大小，选择适当的肌肉张力换能器，将换能器插入相应通道的输入插座。

2、开机与启动RM6240多道生理信号采集处理系统

3、将已制备好的标本用丝线系于张力换能器的受力片上，调节换能器的水平位置，拉紧丝线给标本以一定量的前负荷，可由基线上升高度得出。

4、将刺激器插头插入刺激输出端口，另一端与肌槽上电极相连。

5、根据标本收缩活动的形式、速度、频率、力的大小适当调整增益与扫描速度，使信号波形完整清晰地显示在屏幕中。

6、标本功能状态正常稳定后即可开始实验，进入“记录状态”。

图4-2 分离坐骨神经（下肢背面） 图4-3 坐骨神经腓肠肌标本制备

1.坐骨神经 2.腓肠肌 1.坐骨神经 2.腓肠肌 3.股骨 4.脊柱

3.股二头肌 4.半膜肌

[观察项目]

1、找出阈刺激

先给标本单个弱刺激，然后逐渐增大刺激强度，直到刚能描记出收缩曲线为止，此时的强度为阈强度。记录该刺激强度。低于阈强度的刺激为阈下刺激。

刺激输出方式：正电压。

刺激模式：单刺激。

刺激参数：波宽为6 ms，延时为3 ms，刺激强度从0.01 V开始递增。

扫描速度：10 s/div

2、找出最适刺激强度

在阈刺激的基础上，继续增加刺激强度，肌肉收缩曲线的幅度也逐渐增大，但当达到一定的刺激强度时，肌肉收缩曲线的幅度便不再随着刺激强度的增大而增高。刚刚能引起最大收缩反应的刺激强度为最适刺激强度。记录该刺激强度。

3、描记单收缩曲线

选用最适刺激强度，刺激模式设为单刺激，扫描速度设为1.0 s/div，描记单收缩曲线。

4、描记复合收缩曲线

选用最适刺激强度，刺激模式设为连续单刺激，刺激频率从0.5 Hz开始，依次为0.5 Hz、1 Hz、2 Hz、4 Hz、8 Hz、16 Hz、32 Hz······，扫描速度设为1.0 s/div。

增加刺激频率，可描记出呈锯齿状的不完全强直收缩曲线。

继续增加刺激频率，可描记出平滑的完全强直收缩曲线。

附：RM6240多道生理信号采集处理系统使用方法

打开RM6240外置设备电源、打开计算机主机及显示器电源→双击屏幕上“RM6240并口2.0 h”图标。

一、开始示波操作

1、实验→肌肉神经→刺激频率对骨骼肌收缩的影响→常规实验

2、调节刺激器（1）模式 （2）波宽6 ms，延时3 ms （3）开始刺激

3、开始示波→工具→快速归零→点击右侧“快速归零”图标

4、调节右侧控制参数区：张力、扫描速度、灵敏度

5、工具→坐标滚动→将基线调至中央

二、开始记录

开始记录 →暂停记录 →在标记框内标记字符标记

三、停止示波

1、实验结束→停止示波

2、点击“文件”→另存为→本地磁盘E→文件名

四、结果处理

图形处理与打印，按照第一章介绍的基本操作进行。

[思考题]

1、如何判断制备的神经肌肉标本的兴奋性?

2、剥皮后的神经肌肉标本能用自来水冲洗吗？为什么?

3、引起肌肉收缩的阈刺激，最适刺激含义是什么?

4、肌肉的收缩形式有几种?各有何特点?

E. 实验——坐骨神经-腓肠肌标本制备

刺激频率与肌肉收缩的关系

【实验目的及原理】学习坐骨神经-腓肠肌标本的制作方法，观察不同刺激强度和刺激频率对骨骼肌收缩的影响。肌肉的兴奋外在表现是收缩，引起肌肉组织发生兴奋的刺激，必须具备 一定的刺激强度 、 刺激持续 时间 和 刺激强度对时间的变化率 。

给肌肉一个短暂的有效刺激，肌肉将发生一次收缩，称为 单收缩 （包括 潜伏期、收缩期和舒张期 ）。当给肌肉一串有效刺激时，可因刺激频率不同，肌肉呈现不同的收缩形式，如果刺激频率很低，即相继两个刺激的间隔大于单收缩的总时程，肌肉出现一连串的在收缩波形上彼此分开的单收缩。若逐渐增大刺激频率，使相继两个刺激的间隔小于单收缩的总时程，而大于其收缩期，肌肉则呈现锯齿性收缩波形，此称为 不完全强直收缩 ，再增大刺激频率，使相继两个刺激的间隔小于单收缩的收缩期，肌肉将出现完全的持续收缩状态，此称为 完全强直收缩 。

【实验对象及器材】蛙或蟾蜍。蛙手术器械一套、蛙板一块、烧杯、滴管、铁架台、双凹夹、肌动器、张力换能器、BL-410生物机能实验系统、任氏液。

【实验步骤】

（一)制备坐骨神经-腓肠肌标本

1.按常规损毁蟾蜍脑和脊髓，剪去蟾蜍的前半身、内脏，剥去皮肤、分离两后肢。

2.取一侧标本，腹面向上，分离脊柱段坐骨神经。

3.将标本背面向上，分离大腿段坐骨神经，游离坐骨神经至膝关节，膝关节以上仅保留坐背神经和1/3股骨断端。

4.结扎跟腱，结扎线远端剪断跟腱，分离腓肠肌至膝关节，膝关节以下仅保留游离的腓肠肌。

5.用 浸有任氏液的锌铜弓 迅速接触坐骨神经， 检验标本兴奋性 。

（二）固定神经-肌肉标本

将坐骨神经置于肌动器的刺激电极上，刺激电极与BL-410生物机能实验系统的刺激输出孔相连，股骨断端固定在肌动器上，提起结扎跟腱的结扎线，将其与张力传感器前方簧片相连，张力传感器接BL-410生物机能实验系统CH1通道；肌动器与张力传感器均固定于铁架台上。

（三）调用“刺激频率与反应的关系”实验模块。

（四） 注意每次刺激之后必须让标本休息30s，并给标本滴加任氏液。

【实验重点及难点】

1坐骨神经-腓肠肌标本的制作方法。

2相关器械的使用

刺蛙针 :垂直刺入枕骨大孔，破坏两栖动物的脑和脊髓

蛙板 :两栖动物手术台

粗剪刀 :剪断骨骼

手术剪 :剪断正常组织

眼科剪 :剪血管，神经

玻璃分针 :分离神经组织的手术器械

锌铜弓 :测试神经肌肉标本的兴奋性是否良好

注意事项

1、避免过度牵拉神经或用金属器械接触神经组织。

2、标本制成后需放在任氏液中浸泡数分钟，刺激过程随时给神经组织滴加任氏液，保持活性。

3、剥皮后须将手及用过的器械洗净，再进行下一步。

4、每次刺激后应使肌肉休息30秒，每次刺激不得超过5秒。

F. 以蛙的活的脊髓—腓肠肌为材料验证ATP是直接能源物质步骤

实验步骤：
(1)剥取蛙的腓肠肌，制备如图所示的两套实验装置，编号为甲、乙。
(2)向甲、乙不断施加电刺激,直至指针不再偏转为止。向装置甲的腓肠肌上滴加适量的适宜浓度的ATP溶液，直到不再吸收为止。立即对坐骨神经施加适宜强度的电刺激。乙收缩，指针偏转。

(3)向装置甲的腓肠肌上滴加适量的适宜浓度的葡萄糖溶液，直到不再吸收为止。立即对坐骨神经施加适宜强度的电刺激。甲没反应，指针不动。
实验结论：蛙的腓肠肌收缩所需的直接能源物质是ATP，而不是葡萄糖。

G. 蟾蜍离体坐骨神经腓肠肌标本可以进行哪些实验研究，设计实验思路

坐骨神经我肯定好的能写

成

H. 蟾蜍坐骨神经腓肠肌实验分析怎么写

坐骨神经丛中的一支神经支配着腓肠肌的活动，所以一刺激坐骨神经，腓肠肌就会收缩。

I. 此图中的肌肉是感受器还是效应器

神经---肌肉标本 蟾蜍和青蛙是两栖动物，两栖动物一些基本生命活动和生理机能与温血动物近似，而其离体组织、器官保持活性所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握，所以生理实验中常选用蟾蜍或青蛙的离体组织或器官作为实验标本。坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，给坐骨神经一个适宜的刺激可产生一可传导的动作电位，引起其所支配肌肉（腓肠肌）的收缩。将蟾蜍或青蛙的坐骨神经腓肠肌标本置于任氏液中，其活性可以在几小时内保持不变。故制备蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本，可用于研究观察组织的兴奋与兴奋性、传导性以及刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。 下图是青蛙离体的神经—肌肉标本，BC段和CD段的距离相等。下列关于兴奋传导的说法正确的是（） < xmlnamespace prefix ="v" ns ="urn:schemas-microsoft-com:vml" />< xmlnamespace prefix ="o" ns ="urn:schemas-microsoft-com:office:office" /> A．如果在肌肉某处用电刺激，兴奋在BC段上的传导与在CD段上的传递所用的时间相同 B．若刺激点改在D处，则在A、B、C三处都可以检测到膜内外电位的变化 C．一般情况下，肌肉在反射弧的组成中属于效应器的一部分D．兴奋以电信号形式在神经元之间传递，方向是单向的

J. 蟾蜍的腓肠肌在哪里

样制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本:[2]步骤,这个基本实验的步骤到底是什么呢?让我们一起来看一下!