Ⅰ 动物细胞培养所用的无菌器材与微生物实验所用的无菌器材有什么区别有相同点吗详细说明下,谢谢
区别在动物细胞培养使用的无菌器材一般是细胞培养级(cell
culture
tested),一般需要经过特殊处理(比如包被处理等),在洁净度,表面处理(表面的平整度等)方面要比普通的微生物培养更为严格。用细胞培养用的器材去做微生物实验一般没有问题,反过来就不行了。
Ⅱ 如图是关于探究酵母菌细胞呼吸方式的两组实验装置,请据图回答问题:(1)酵母菌应加到______瓶中;澄清
(1)A瓶中应加入质量分数为10%的NaOH溶液,用于吸收空气中的CO2;酵母菌应加到B、D瓶中回;澄清的答石灰水应加到C、E瓶中.
(2)由于酵母菌无氧呼吸能产生酒精,所以一段时间后在D中取少量培养液,滴加酸性重铬酸钾溶液以检测酒精的存在,如果有酒精存在,则溶液的颜色变化为橙色变为灰绿色.
(3)甲装置中发生有氧呼吸,其总反应式为:C6H12O6+6O22C2H5OH+2CO2+能量
Ⅲ 细胞生物学实验室仪器有哪些
倒置显微镜(观察细胞形态,计数等),荧光显微镜(莱卡,奥林巴斯等)(免疫荧光反应观察细胞内分子的相互作用,蛋白的表达情况;)co2培养箱(热电,三洋等)(动物细胞培养专用),超净工作台(江苏安泰,热电等);CO2罐,冰箱,液氮罐,离心机以及一些其他的常用仪器
Ⅳ 如图是探究酵母菌细胞呼吸方式的实验装置.以下说法中正确的是()A.该实验需设置有氧和无氧两种条
A、该实验需设置有氧和无氧两种条件的对比实验,甲、乙两组互为对照,A错误;内
B、若向装置甲乙的酵母菌培容养液中加入酸性重铬酸钾溶液,则只有装置乙内的溶液会由橙色变成灰绿色,B错误;
C、实验的观测指标是溶液的颜色变化,由于有氧呼吸释放的CO2比无氧呼吸多,所以可根据溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短,来检测CO2的产生速率,C正确;
D、若装置甲乙中澄清石灰水均变浑浊,则能据此判断酵母菌的呼吸方式,D错误.
故选:C.
Ⅳ 如图是验证酵母菌细胞呼吸类型的实验装置,两套装置的培养条件一致(不考虑环境中物理因素的影响),下列
A、若装置1中的红色液滴向左移,移动距离可表明酵母菌有氧呼吸所消耗的氧气量,A正确;
B、若酵母菌只进行无氧呼吸,则装置1中红色液滴不移动,装置2中红色液滴向右移,B正确;
C、若酵母菌只进行有氧呼吸,则装置1中红色液滴左移,装置2中红色液滴不移动,C错误;
D、若酵母菌同时进行有氧呼吸和无氧呼吸,则装置1中红色液滴向左移,装置2中红色液滴向右移,D正确.
故选:C.
Ⅵ 如图为“探究酵母菌细胞呼吸的方式”的实验装置图,请据图分析,错误的是:()A.C瓶和E瓶都会变浑
A、C瓶和E瓶都会变浑浊,说明酵母菌既可以进行有氧呼吸又可以进行无氧呼吸,A正确内;容
B、酵母菌适宜生存的温度在18℃~25℃之间,B错误;
C、甲装置是探究酵母菌有氧呼吸的,因此需要不停的送入新鲜空气,C正确;
D、A瓶中加入NaOH溶液是为了吸收空气中CO2,以排除空气中二氧化碳的干扰,D正确.
故选:B.
Ⅶ 下图为“探究酵母菌细胞呼吸的方式”的实验装置图,下列叙述有几项是正确的 ( )
[答案]B
[解析]酵母菌属于兼性厌氧菌,①正确;有氧呼吸产生的二氧化碳比无氧呼吸多内,相同时间后,C的浑浊度比E大容,②错误;在D瓶的液面覆盖一层油脂可确保无氧环境,会使实验更精确,③正确;甲和乙属于对比实验,④正确;检测酒精的试剂是酸性的重铬酸钾溶液,⑤错误;A瓶中的NaOH溶液可吸收空气中原有的二氧化碳,使实验结果更可靠,⑥正确。
Ⅷ 我们实验室没有专门的细胞培养间,可以做细胞培养嘛 老师说在无菌操作台上弄好,盖上盖子放到培养箱就行
可以做。操作在超净工作台,培养在恒温培养箱,但是盖子必须盖好。
Ⅸ 细胞培养会用到哪些重要的实验仪器如何做到细胞培养的无菌操作(
重要的实验仪器蒸馏器、储品柜、超净工作台、水浴锅、三氧消毒杀菌机。细胞培养的无菌操作需要在无菌台上操作。
具体设备如下:
准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。
配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。
培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。
必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。
无菌操作:
1、凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面。
2、靠近酒精灯火焰操作。
3、器皿使用前必须过火灭菌。
4、继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。
5、各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6、吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。
Ⅹ 有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步骤吗
1
材料与方法
1.
1
Matrigel:Becton
Dickinson
Compary,
-
20
℃保存;
Tanswell
plate:Costar
,USA
,
#
3422
,聚碳酯膜微孔直径为8μm;
苏木素染液,梯度乙醇,二甲苯溶液。
1.
2
趋化因子的制备
取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培养基轻柔漂洗两次;
加入无血清培养基,37℃,5
%CO2
培养24
h~48h,收集细胞培养上清;4
℃,12
000rpm
离心,10
min
,取上清;0.22
μm
滤膜过滤除菌;分装,在-
20
℃保存。
1.
3
transwell
培养板准备
所有操作均需无菌操作。-20℃保存的Matrigel
在冰上保2℃~8℃过夜融化。在冰上用预冷的枪头吸取100μl
Matrigel
加入冰预冷的300μl
无血清培养基中,充分混均。取上述稀释的Matrigel
25
μl
加入transwell
板上室,覆盖整个聚碳酯膜,37
℃,30
min
,使Matrigel
聚合成胶。已铺好Matrigel的transwell
培养板置于37℃可保存2
周。
1.
4
Matrigel
侵袭实验(Matrigel
Invasion
Assay)刺激后的各组细胞用PBS
漂洗3
次。以常规方法用无血清培养基制备单细胞悬液,5
×105个细胞/
ml
,每组细胞各分为两部分。胎盘兰拒染实验,细胞活力需大于95
%。Transwell
培养板上室加入100μl
细胞悬液(
5
×104
个)
并加入无血清培养基200
ul
。Transwell
培养板下室加入500μl
趋化因子,37℃,5
%CO2
培养24
h。用湿棉签轻轻擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞。小心取出上室,用线拴住,并做好标记,用冰预冷的甲醇固定30
min。苏木素染色1
min。梯度乙醇脱水(80
%
,95
%
,100
%)
,二甲苯透明。小心将聚碳酯膜自上室基底切取下来,置载玻片上中性树脂封片。附着于聚碳酯膜下表面的细胞在高倍镜下(
×400)
随机取6
个视野[1
]
计数,取平均数。重复实验两次。
注意
2.
1
NIH3T3
细胞制备的趋化因子与胎牛血清
趋化因子是能使细胞产生趋化运动的一类细胞因子[2
]
。目前利用NIH3T3
细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验的实验室比较多,时间较长且实验步骤繁琐。众所周知,胎牛血清中有趋化因子,我们在不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验中发现用胎牛血清和用NIH3T3
细胞制备的趋化因子做细胞体外侵袭实验效果是一样的,两组迁移的细胞数很接近。在实验时间上,用NIH3
T3细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为1
周,而用胎牛血清作趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为2
d
,实验时间节省了很多。因此认为可以用胎牛血清来代替NIH3T3
细胞制备的趋化因子。
2.
2
细胞的准备
所需细胞应处在对数生长期,细胞活力需大于95
%。如果细胞活力小,就会造成细胞穿透能力下降,影响实验结果。
2.
3
擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞
先用干棉签将上室内液体吸去,再用蒸馏水浸湿的棉签轻轻擦去Mat
rigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞,如果没有擦净聚碳酯膜上表面的细胞,在细胞计数时就会将没擦掉的细胞也计进来。尤其是细胞为圆形的时候,就会分辨不出是穿过去的细胞还是没穿过去的细胞,对于长梭形细胞来说,穿过去的细胞为长梭形,没穿过去的细胞多为圆形。
2.
4
苏木素染色
上室浸泡在新苏木素中的时间为1
min
,用过多次的苏木素为2
min。在研究粉防己碱对HUVEC
人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用没有将多余苏木素洗去,直接脱水、透明,造成细胞图片背景模糊,细胞不清楚(见图1)
。在作不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验时我们将其置于盛有自来水的烧杯中,反复漂洗几次,将多余苏木素洗去再行脱水、透明;这样做出的细胞图片背景干净,细胞清楚(见图2)
。