黄酮提取与分离中试实验装置

『壹』 植物中如何对黄酮类进行细提取

传统的萃取芝法有有机溶剂萃取，热水萃取，碱性水或碱性稀醇萃取体系溶剂萃取法。

乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物最常用的溶剂，糖原的提取宜采用浓度较高的酒精(如9% ~ 9%)，糖原的提取宜采用浓度约为%的乙醇或甲醇溶液，乙酸乙酯和丙酮也常用来提取黄酮类化合物，萃取过程包括冷浸、渗滤和回流。

超声提取是一种新的提取黄酮类化合物的方法，其原理是，超声空化对细胞膜的损伤有利于黄酮类化合物的释放和溶出，超声波使萃取液不断振荡，促进了溶质的扩同时，超声波的热效应使水温基本在7℃，原料可以用于水溶，超声波法大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提取率和原料的利用率。

微波提取技术对黄酮类化合物的提取也取得了良好的效果，具有反应效率高、选择性强、操作简单、副产物少、提取率高、纯化方便等优点。该植物细粉在浸出过程中不凝结、不结胶，克服了热水法的不足。

酶解法可用于提取细胞壁包裹的黄酮类化合物原料，例如在山楂中，由于黄酮类化合物被细胞基细胞壁包围，而这些细胞壁之间又有果胶结合，所以酶法(酶提取)的提取率比一般方法要高。

将预干燥碾碎的山楂浸泡在蒸馏水中，加热至℃，加入%果胶酶溶液，调节pH值~用mol/LNaH，在℃下酶解然后酶解溶液回流纯化。

该方法可使萃取率提高，提取原理是果胶酶充分破坏连接细胞壁的果胶物质，将山楂中的果胶完全解压为小分子物质，降低了提取物质的抗性，使果肉中的黄酮类化合物充分释放。

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我国对超临界萃取黄酮类化合物的研究始于9世纪，1999年陈树来等利用超临界CO从苦参米中提取芦丁，并以乙醚为夹带剂直接从苦参米中提取芦丁，结果表明，以醚作夹带剂，从苦参米中直接提取芦丁较为困难，提取效果好，纯度高，收率高。

半仿生提取法(SBE)是由孙秀梅和张昭旺首先提出的一种新的中药提取方法，如陈hsiao-chuan∽通过正交试验优化半仿生提取叫摘要杜仲中绿原酸和类黄酮工艺条件，杜仲叶为原料，有一块扭曲的柠檬酸性磷酸氢二钠缓冲溶液提取。

m(提取)m(液体)提到=分别提取pH值和787℃浸提H，每次浸提次数，在此条件下，得到了绿原酸的产率，黄酮类化合物得率达。

『贰』 黄酮类化合物的提取方法有哪些

1、醇提取法

黄酮类化合物提取最常用一种方法，常用的有机溶剂主要有乙醇、乙醚、甲醇和乙酸乙酯等，其中乙醇是最常用的。

2、微波提取法

微波提取技术又称微波萃取技术，其最大的优点是耗能耗材少、无污染，尤其对特定的药材提取具有高选择性。

3、超临界萃取技术

超临界萃取是一种较广泛使用的药物提取、分离手段，其最大的优点是无有机溶剂残留，保证了提取成分的100%纯天然。

4、酶解法

酶解法是一种较好的辅助提取方法。酶具有高度的选择性，因此对不同提取材料，选择合适的酶对提取率影响较大。

5、膜分离提取法

膜分离技术也是一种常用的辅助提取技术，其中超滤法作为唯一能用于分子级别的分离方法广泛的应用于黄酮类化合物的提取分离。利用超滤技术分离纯化黄酮化合物最大的优点是操作简便、无需加热、不破坏活性成分的结构，纯化和浓缩一步完成，超滤装置还可反复使用。

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黄酮类化合物的颜色与分子中存在的交叉共轭体系及助色团（-OH）等的类型、数目及取代位置有关。一般来说，黄酮、黄酮醇及其苷类多呈灰黄至黄色，查尔酮为黄色至橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类等因不存在共轭体系或共轭很少，故不显色。

花色素及其苷元的颜色，因pH的不同而变，一般呈红（pH<7）、紫（7<8.5）、蓝（PH>8.5）等颜色。

黄酮苷元一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，易溶于稀碱液。黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水溶性相应加大，而在有机溶剂中的溶解度相应减少。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶剂，难溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有机溶剂。

黄酮类化合物因分子中多有酚羟基而呈酸性，故可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。有些黄酮类化合物在紫外光（254nm或365nm）下呈不同颜色的荧光，氨蒸汽或碳酸钠溶液处理后荧光更为明显。多数黄酮类化合物可与铝盐、镁盐、铅盐或锆盐生成有色的络合物

『叁』 黄酮提取

我原来做过一个大豆异黄酮的提取实验，是用乙醇法索氏提取器提取的

『肆』 某中药中含三萜皂苷，游离三萜，黄酮，黄酮醇，多糖成分，设计合理提取分离实验

皂苷部分极性较大，首先应该附集皂苷部位，通常可用正丁醇萃取或是大孔树脂得到总皂苷部位。对于具体皂苷的分离，若使用硅胶柱层析，一般以氯仿：甲醇：水进行洗脱，氯仿：甲醇：水一般为9：1：0.1，8：2：0.3，7：3：0.5。黄酮类化合物在硅胶上的吸附较多，可以采取减压硅胶柱或者中压硅胶柱，上样量稍大一些（这样可以减小吸附量），将样品分段，然后采用sephadex LH－20进行细分。多糖提取方法既有热水浸提法、酸碱浸提法、酶解提取法、微波辅助提取法、超声辅助提取法和超高压提取法等单一方法,也有超声微波辅助法、微波辅助酶法、超声波辅助酶法等联用方法。多糖分离纯化过程一般是先除杂,再对多糖组分进行分级纯化。分级纯化的常用方法有沉淀法、凝胶色谱法、阴离子交换色谱法、大孔树脂柱色谱法、超滤法等。

『伍』 活性成分总黄酮的提取方法有哪些

总黄酮的提取方法
1、 熔剂法
热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、
2、微波提取法
微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。 2.2 超声波提取法
用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
3、 超临界流体萃取法
超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大 规模的生产。
4、 酶法提取
酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是1.43%，0.94% 和0.79%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。
5、双水相提取法
双水相提取技术是瑞典Per Albersson首先发现并研究 的一种技术，双水相萃取法属于液- 液萃取，当物质进入双 水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力的作用，溶 液环境的影响，其在上、下相中的浓度不同，即各成分在两 相间选择性分配，从而达到萃取的目的。由于双水相体系分 相快、使用温度低、容易操作、无污染、提取率高，因此成 为黄酮化合物富集分离的一种有效方法。张春秀等[24]取一 定量的银杏叶浸提液，加到PEG1500/ 磷酸盐体系双水相 系统中，则黄酮类化合物进入上相PEG，从而将黄酮类化合 物分离，提取率可达98.2%。
6、 半仿生提取法
半仿生提取法是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服给药后药物经胃肠道转运的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。这种提取方法的特点是可以提取和保留更多的有效成分，能缩短生产周期、降低成本。
7、膜分离法
膜分离法主要有超滤、微滤、纳滤和反渗透等，其中超滤法是膜分离的代表，它是唯一能用于分子分离的过滤方法，是以多孔性半透膜为分离介质，依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶液中不同分子量的物质。由于大多数黄酮类化合物的分子量在1000 以下，而非有效成分如大多数的多糖、蛋白质等分子量多在50000 以上，因而使用超滤能有效去除蛋白质、多肽、大分子色素、淀粉等，达到除菌、除热原、提高药液澄明度以及提高有效成分含量等目的。这种方法操作简便、不需要加热、不损坏黄酮类化合物，提取效果好、超滤装置可反复使用。于涛等[26]研究了银杏叶中黄酮类化合物的提取过程及工艺，使用超滤技术对粗提的产品进行精制，对影响超滤的工艺条件进行了考察，超滤后产品中黄酮质量分数达到33.99%。
8、 热压流体萃取法
热压流体萃取法是一种快速、环保、便宜、有效地萃取生物活性物质的方法。Chaorui Chen等[27]采用热压流体萃取法从巴西蜂胶中提取了7种黄酮类化合物，结果表明，通过热压水萃取的样品中当存在表面活性剂时萃取物的固体含量更高，当使用热压脂溶萃取时，7种黄酮类化合物的含量在脂溶萃取中超过了水溶萃取。KairHartonen等[28]用热压水萃取法从白杨中萃取了黄酮类化合物，考察了萃取时间、温度和压力等因素的影响，并与超声波萃取、高速逆流色谱做了比较，结果表明用热压水萃取法在150℃萃取35min效 果最好。
2.9 高压液相提取法
Ying Zhang等[29]通过高压液相萃取法从鱼腥草中萃取了黄酮类化合物，研究了乙醇浓度、流速、温度和压强等因素的影响，并与热浸法和超声波辅助萃取法进行对比，发现高压液相萃取法提取效果较好，当使用50% 乙醇，溶剂流速为1.8mL/min，温度为70℃，压强为8MPa 时，黄酮类化合物的得率和浓度可以达到3.152% 和23.962%

『陆』 如果采用乙醇浸渍法提取某植物材料中的总黄酮，需要使用到回流装置吗还是直接设置好水浴温度浸渍就可以

冷凝管就好了，总不能让乙醇跑了吧。哪种加热方法都行，但是要让乙醇沸腾，保持恒温。料液比1:5--1:10都行。最后乙醇与黄酮分离肯定要分流的。

『柒』 乙醇回流提取黄酮所需器材及过程

索氏提取器。

过程：用滤纸包住要提取的东西，放在提取管中，乙醇放在烧瓶里。通冷凝水，加热回流。

『捌』 黄酮类化合物的分离

较常用的分离方法有：\x0d（一）柱层析法\x0d分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等.此外,也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等.\x0d1.硅胶柱层析：\x0d此法应用范围最广,主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类.少数情况下,在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物,如多羟基黄酮醇及其苷类等.\x0d2. 聚酰胺柱层析：\x0d对分离黄酮类化合物来说,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.\x0d聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物,包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等\x0d3.葡聚糖凝胶(Sephadex gel)柱层析：\x0d对于,主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G型及Sephadex-LH-20型.\x0d葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是：\x0d分离游离黄酮时,主要靠吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目.但分离黄酮苷时,则分子筛的属性起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体.\x0d分离游离黄酮主要是吸附作用,极性小到大顺序洗脱.\x0d分离黄酮苷类,主要是分子筛作用,分子大到小顺序洗脱.\x0d总的洗脱顺序：糖多的苷到糖少的苷到游离苷元（极性小到大）\x0d葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：\x0d碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）,含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等).\x0d醇及含水醇,如甲醇,甲醇-水（不同比例）、t-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等.\x0d其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等.\x0d二）梯度pH萃取法\x0d梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离.根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质,可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后,依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2% NaOH及4%NaOH水溶液萃取,来达到分离的目的.\x0d酸性:7,4-二OH溶于5%NaHCO3液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）\x0d具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀,滤集后按常法悬浮在乙醇中,通入H2S进行复分解,滤除硫化铅沉淀,滤液中可得到黄酮类化合物.但初生态的PbS沉淀具有较高的吸附性,因此现多不主张用H2S脱铅,而用硫酸盐或磷酸盐,或用阳离子交换树脂脱铅.\x0d有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合,生成物易溶于水,可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离.