半自动固相萃取装置控制流速

1. 固相萃取仪装置操作规程有哪些

您好，北京德世科技有限公司（www.cnpetjy.com）为您答疑解惑：
固相萃取仪装置︰具有免溶剂、快速、萃取简单、可现场携带采样之仪器。可应用在非常多的领域;如药物分析、食品分析、环境污染分析(VOC、PAH、PCB、有机氯、有机磷杀虫剂)等等。

一、安装程序

(A) 先将Holder下方黑色保护套管转松拆开，再将不绣钢金属盖转松拆下。

注意:不绣钢金属盖有时会已松离Holder而卡在黑色保护套管，此时请将黑色保护套管再套回Holder转紧后再松开，不绣钢金属盖会回卡在Holder外牙上，再将它拆下，离开Holder。

(B) 将Holder推杆推至下端，此时有黑色圆棒秃出来(内有牙纹) 。

(C) 取出要用之Fiber，以Fiber上头外牙纹和Holder微秃出黑色圆棒内牙纹平顺锁上后，推杆小心拉回最上端，再将

刚拆下之不绣钢金属盖及黑色保护套管依序小心套上锁紧，即完成装置。

(D) 小心试着将Holder推杆推至中端卡点处卡住，此时Coated Fiber已从保护针头内秃出来，可上下调整黑色保护套

管及查看Holder上刻度，略估保护针头加上Coated Fiber所伸出的长度，以配合实验所需。

注意: Fiber装好后，此时勿将推杆推至最下端，会压坏Fiber之弹簧。

(E) SPME要插入样品瓶(袋)之隔塞取样或插入GC注射器之隔塞热脱附时，先将保护针头插入隔塞后，再将推杆推

至中端卡住，秃出Coated Fiber。

(F) SPME从样品瓶(袋)隔塞取样或从GC注射器之隔塞取出时，则先收回Coated Fiber至保护针头，再取出保护针头。

注意:因保护针头是平头针，所以新的隔塞片先以干净细针插一下以便保护针头较容易插入。GC Injection Liner(Sleeve)请改用SPME用Liner这样Coated Fiber较不会碰断。

(G) 若要从Holder拆下Fiber，先将Holder推杆拉回最上端，让Coated Fiber收回至保护针头内，把Holder下方黑色保护套

管转松和不绣钢金属盖拆下，再将Holder推杆推至下端，让黑色圆棒秃出来，转松Fiber上头锁牙即可。

固相微萃取装置主要部分是一个手柄加一个固相微萃取头即可进行工作，是最简单的配置。最好还需要恒温，磁力搅拌的装置等。也可以使用全自动SPME进样器，方便好用，就是价格太贵。

二、组成

SPME由手柄(Holder)和萃取头(Fiber)两部分构成，

壮似一支色谱注射器，萃取头是一根涂不同色谱固定相或吸附剂的熔融石英纤维，接不锈钢丝，外套细的不锈钢针管(保护石英纤维不被折断及进样)，纤维头可在针管内伸缩，手柄用于按装萃取头，可永久使用。

三、SPME操作步骤

样品萃取

1. 将SPME针管穿透样品瓶隔垫，插入瓶中。

2. 推手柄杆使纤维头伸出针管，纤维头可以浸入水溶液中(浸入方式)或置于样品上部空间(顶空方式)，萃取时间大约2-30分钟。

3. 缩回纤维头，然后将针管退出样品瓶

GC分析

1.将SPME针管插入GC仪进样口。

2.推手柄杆，伸出纤维头，热脱附样品进色谱柱。

3.缩回纤维头，移去针管。

原理：

固相微萃取(Solid Phase Micro-Extraction,
SPME)是用一根表层涂有特异性涂层，如聚二甲基硅氧烷(Polydimethylsiloxane
)的石英纤维来吸附植物或昆虫顶空中的挥发性化合物。可以根据要提取的挥发物的性质选择不同的涂层。在提取过程中，石英纤维被手柄推出保护针套，处于择发物之中，挥发物被吸附到纤维涂层上，然后将石英纤维直接注入气相色谱的进样口，吸附在其表层的挥发物在瞬时高温条件下快速解吸附，进入色谱柱分离。SPME可以在自然或半自然状态下对活体生物进行连续取样，是目前分析鉴定少量挥发性化合物最精确的方法。此方法最大优点是只需少量的样品材料，并且不需要净化的中间步骤，因而无溶剂干扰。同时该法能基本反映昆虫在田间寻食过程中利用的信息化合物种类和浓度。缺点是收集的信息化合物量少，只能用于化学分析，不足以用来进行生物测定。

2. 如何选择购买合适的固相萃取装置

看你是做什么抄样品，如果是十几毫升的小体积样品，如食品、农产品，应该选用柱式的SPE（固相萃取仪）；如果你是1L以上做大体积样品，如水样，就需要盘式SPE，因为盘式的SPE流速比柱式的快10倍左右，这样才能不至于做样品过长，影响效率

3. 哪些因素会影响固相萃取

固相萃取（SolidPhaseExtraction，SPE）技术基于液相色谱原理，可近似看作一个简单的色谱过程。原理是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的[7]。固相萃取可分为在线萃取和离线萃取。前者萃取与色谱分析同步完成，而后者萃取与色谱分析分步完成，两者在原理上是一致的。
固相萃取的影响因素如下：
1、吸附剂：目前常用的吸附剂有正、反相吸附剂、离子交换吸附剂和抗体键合吸附剂等，试验时尽量选择与目标化合物极性相似的吸附剂，其用量大小与目标物性质（极性、挥发性）及其在水样中的浓度直接相关。
2、洗脱溶剂：在SPE中，洗脱溶剂的选择与目标物性质及使用的吸附剂有关，应根据常见有机溶剂的极性和洗脱强度，试验过程中可根剧被测物的物理、化学性质选用。洗脱剂体积应以淋洗完全为前提，体积最小的为最佳，可通过多次洗脱法（小体积），根据回收率的变化曲线找到最佳的洗脱液体积，显然，洗脱体积越小富集倍数越高。
3、保留体积：在加样过程中，保留体积是SPE技术的关键因素之一，它代表了进行痕量富集时能有效处理的水样体积。根据色谱分析仪的最小检出量和水样中有机物的浓度，可以估算出欲富集的最小水样体积。另外，样液的pH值也影响样品的吸附效率。
4、流速：流速的控制对SPE至关重要，流速过大将引起SPE柱的穿漏，流速太小则处理速度太慢。柱预处理过程中流速适中，保证溶液充分湿润吸附剂即可，上样和洗脱过程则要求流速尽量慢些，以使分析物尽量保留在柱内或达到完全洗脱，否则会导致分析物流失，影响回收率的大小。尤其离子交换过程，进行比较缓慢，应采用较低的流速（0.5~2.0mL/min）。

4. 蜂蜜中磺胺类药物的检测-高效液相色谱法

转载：《分析测试网络网》楼主可以参考一下。
5种磺胺类药物残留的高效液相色谱法

5种磺胺类药物残留的高效液相色谱法

点击次数：89 发布时间：2010-10-26 8:56:32

(1)试剂和材料 除特别注明外，所用试剂均为分析纯；水为超纯水。
①磺胺类药物对照晶(SMM、SDM、SMz、SMZ和SQ)
②甲醇 色谱纯
③乙腈 色谱纯
④正己烷
⑤正丙醇
⑥无水硫酸钠
⑦碱性氧化铝SPE柱 每根柱填料量为28
⑧磺胺类药物贮备液(1mg／mi) 分别取上述磺胺类药物对照晶各约50mg，精密称定，置同一50ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期3个月。
⑨磺胺类药物工作液(5Ps／mi) 精密量取磺胺类药物贮备液o．5ml，置100ml量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期1个月。
⑩磺胺类药物对照溶液 取磺胺类药物工作液用流动相稀释成浓度为o．02gg／ml、0．05Pe／mI、0．1P8／ml、0．2Pg／m1、0．5Pz／ml、1．0鹏／ml的系列对照溶液。置2—8~C冰箱中保存，有效期I周。
(2)仪器和设备
①高效液相色谱仪
②离心机
③固相萃取装置(配考克阀
④分析天平 精度0．0001g
⑤天平 精度0.0lg
⑥旋转蒸发仪
⑦振荡器
⑧匀浆机
⑨涡动混合器
⑩分液漏斗 50ml
@梨形瓶 lOOml
⑩离心管50ml
⑩微孔滤膜 0．45um
(3)测定步骤
① 提取和净化 称取组织样品5g(精确到0．1g)，加入乙腈25ml，无水硫酸钠4g，以10000r／min以上的速度均质lmin后，以3000r／ITIIB的速度离心5min。分离后的残渣再用25ml乙腈处理，振荡10min后，以3000r／min的速度离心5min。合并两次的上清液，加入正己烷 30ml，振荡l0min，静置分层后，取下层液体，加10mi正丙醇；500c下减压干燥，残留物用95％乙腈共4m1分两次溶解，过Sep—Pek氧化铝B柱。用95％乙腈5ml过柱，不收集，真空抽干(整个过程控制碱性氧化铝SPE柱流速在l～2ml／min)。再用70％乙腈l0ml洗脱后，洗脱液中加入5ml正丙醇，500c下减压干燥后，残留物用2．0mi流动相溶解，用o．45um滤膜过滤，转移至进样小瓶中，待测。
②测定
a色谱条件
色谱柱：Cis柱，g50mmX4．6mm(内径)，粒径5um或相当者
流动相：乙腈—甲醇—水—乙酸(2+2+9+0．2)
流速；lml／mill
检测波长：270nm
进样量：20uL
b．测定 根据样液中磺胺类药物含量情况，选定峰面积相近的标准溶液。溶液及试样溶液中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样溶液测定过程中应参插注入对照溶液，以便准确定量。
③空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。
(4)灵敏度和回收率
本方法的检测限为50ug／kg。
在100ug／kg添加浓度水平上，回收率范围为50％一110％

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5. 苯并(a)芘的高效液相色谱法测定

方法提要

利用正己烷-液-液萃取、固相萃取C₁₈柱-二氯甲烷淋洗等提取水样中苯并［a］芘，提取液经硅胶柱净化、浓缩、定容后，高效液相色谱-紫外-荧光检测器串联分离检测，外标法定量。

方法适用于地下水、地表水、饮用水及污水等水样中苯并［a］芘的分析，其中固相萃取适用于洁净水分析。方法检出限随仪器灵敏度和样品基质而定。当取样量为1.0L洁净水时，本方法检出限为0.50ng/L。

仪器与装置

高效液相色谱仪带紫外检测器和荧光检测器。

固相萃取装置。

旋转蒸发仪。

恒温水浴氮吹仪。

振荡器。

带聚四氟乙烯活塞的1L分液漏斗。

固相萃取C₁₈柱1000mg，6mL。

硅胶净化柱1000mg，6mL。

分析柱WastersPAHsC₁₈液相色谱专用柱，250mm×4.6mm，粒径5μm;或性质相似的液相色谱柱，250mm×4.6mm，粒径5μm。

离心机。

试剂与材料

无水硫酸钠、氯化钠优级纯，在600℃高温炉中灼烧4h放置在干燥器中备用。

正己烷、二氯甲烷、丙酮等均为农残级。

甲醇HPLC级。

替代物标准p-三联苯称取固体三联苯替代物标准，以甲醇溶液溶解、定容，并用甲醇逐级稀释为10.0μg/mL储备液。替代物标准1-氟萘100.0μg/mL，有证标准物质。替代物标准均在-18℃下保存备用。

标准储备溶液苯并［a］芘，-18℃下避光保存，购自国家标准物质中心。

1L棕色样品瓶。

针头过滤器及注射器针头过滤器型号孔径0.45μm，直径4mm，聚四氟乙烯滤膜。

样品采集与保存

采样前不能用水样预洗采样瓶，采集时样品要充满整个样品瓶，不留气泡。样品采满后迅速放置在低温冷藏箱中并尽快送实验室检测，到达实验室后样品应尽快转移至4℃冷藏设备中保存。7d天内完成样品提取、40d内完成检测。苯并(a)芘对光敏感。在样品采集、运输、储存以及分析全过程应尽可能避光操作，防止光解。

分析步骤

1)试样提取。

a.液-液萃取。将1.0L水样倒入预先加有30gNaCl的1L分液漏斗中，待NaCl溶解后加入50mL正己烷、5μL10.0μg/mL的p-三联苯替代物标准溶液;并用20mL丙酮淋洗样品瓶，淋洗液转入分液漏斗，振荡5min。静置10～20min，将水相转移至原样品瓶，正己烷相转入150mL平底烧瓶中。原样品再进行第二次萃取，萃取方法同第一次，正己烷量减少为30mL。合并正己烷相，并加入3g无水硫酸钠，稍稍摇动，观察有无结块现象，如有结块，需补加无水硫酸钠至沙状，继续放置20min，之后过滤至另一150mL平底烧瓶中，滤液旋转蒸发浓缩至约3mL。如果是洁净地下水，样品可以不净化，直接转移至KD浓缩瓶中，氮气吹扫至0.3mL，加入甲醇0.5mL，氮气吹扫至0.3mL，再加甲醇0.50mL，氮气吹扫至0.3mL，最后甲醇定容1.0mL，0.45μm滤膜过滤，HPLC测定。如污染较重，则需净化。净化方法见2)样品净化。

b.固相萃取(适用于洁净水样)。将固相萃取C₁₈柱(1000mg，6mL)，安放在固相萃取装置上，用10mL二氯甲烷淋洗C₁₈柱，再用10mL甲醇分两次淋洗C₁₈柱(第二次甲醇浸泡5min)，最后用10mL空白水分两次淋洗，等待上样。在活化过程中不要让柱子流干。在要富集的1.0L水样中加入5g氯化钠、40ng替代物标准p-三联苯、30mL甲醇等混匀后样品以5mL/min的流速流过已活化的C₁₈柱。样品流完后真空干燥3min后取下C₁₈柱，以3000r/min离心10min除水。除水后的C₁₈柱安装回固相萃取装置，用5mL二氯甲烷浸泡C₁₈柱5min后自然流下，收集洗脱液。用4mL二氯甲烷洗涤样品瓶并与样品洗脱液合并。洗脱液中加入1g无水Na₂SO₄，振摇后放置15min，用滴管将洗脱液转移至25mLKD浓缩瓶中，用2mL二氯甲烷洗涤Na₂SO₄相后并入KD浓缩瓶，加入0.5mL甲醇，氮气吹扫至0.5mL，再入甲醇1.0mL，氮气吹扫到0.5mL，最后甲醇定容至1.0mL，过滤HPLC测定。

2)试样净化。净化硅胶柱预先用10mL10%丙酮-正己烷溶液、10mL正己烷活化后，待正己烷接近硅胶顶层时迅速将待净化样品提取液转入柱中，先用5mL正己烷淋洗，弃之，再用25mL正己烷-二氯甲烷(1+1)混合溶液淋洗，淋洗液用KD浓缩瓶承接，氮气浓缩，甲醇换相、最后定容至1.0mL，过滤HPLC测定。

3)校准曲线。用甲醇分别稀释1.93μg/mL苯并［a］芘二级标准溶液，配制成0ng/mL、1.93ng/mL、9.65ng/mL、19.3ng/mL、28.9ng/mL、38.6ng/mL标准系列，每个标准系列点加入4μL的10.0μg/mL三联苯替代物标准溶液。通过浓度与对应峰面积建立标准曲线。

4)高效液相色谱分析条件。流动相为甲醇溶液，流速1.2mL/min(恒流方式)，柱温40℃。紫外检测器(UV):波长254nm。荧光检测器(FLD):0～6min，激发波长(Ex)250nm，发射波长(Em)370nm;6～15min，激发波长294nm，发射波长430nm.。

5)定性及定量分析。

a.定性分析。采用试样中待测目标物保留时间与标准目标物保留时间相比较的方式进行定性分析。检测方法采用荧光和紫外串联检测的方式。特别当有干扰存在时，应仔细分析荧光和紫外色谱图排除干扰。如果试样中待测目标物含量达到方法检出限5倍以上，需GC-MS确证。

b.定量分析。采用荧光和紫外串联检测的方式进行定量分析。以荧光检测定量为主，对有干扰存在应结合紫外检测情况综合确定。外标法定量。再根据试样测定浓度、称样量计算出试样中浓度。目标化合物峰面积和定量校准曲线可以由高效液相色谱仪工作站自动完成，定量校准曲线也可由EXCEL工作软件完成。对自动积分的峰面积应逐一检查各峰基线，对不合理基线进行必要修正。

对含量接近检出限水平的试样，可以采用与其浓度相近的标准单点校正。对于含量超过校准曲线上限的试样应稀释或减小取样量，使其峰面积保持在校准曲线的线性范围内，重新测定。

6)方法性能指标。分别配制质量浓度为19.3ng/L的苯并［a］芘、40ng/L三联苯的空白加标试液1L，按试样分析步骤进行分析，获得方法精密度和加标回收率分别为2.07%和81.1%～93.0%(n=6)。

上述苯并［a］芘校准曲线的线性方程是y=55947x-5570.5，相关系数R²=0.9999。

将质量为3.86ng的苯并［a］芘标准分别加入到1.0L空白水样中，余下同试样分析，以3倍信噪比对应浓度作为方法检出限，其方法检出限为1.00ng/L。

色谱图的考察(图82.9):

图82.9苯并［a］芘标准高效液相色谱图(荧光检测)

质量控制

每批试样或至多20个试样必须至少进行一个全流程试剂空白、一个平行双样和基体加标分析，以监测分析流程中玻璃器皿、试剂、溶剂和其他硬件带来的干扰和与之相关的试样分析精度，加标浓度不得低于原始试样的背景浓度。

当分析超过 8h 或每分析 10 个试样后，应用标准曲线中等浓度的确证标准检查仪器的工作状态，确证标准与最初标准相比偏离大于 20%，需重新测定标准系列; 若偏离仍大于 20%，需重新配制标准曲线和分析试样。

替代物标准三联苯 (或 1-氟萘) 回收率: 应为 65%～130%; 若不在限值之内，需要重新检查并确认计算、替代标物准、仪器是否问题。

注意事项

苯并 (a) 芘是强致癌物，提取液浓缩及净化过程应在通风柜中进行，必要时戴防毒面具、手套以减少对人体的危害。

6. 固相萃取柱的固相萃取柱使用

固相萃取柱的使用
最简单的固相萃取可以通过手工方式完成，即在固相萃取柱上端连接一个注射器，通过对注射器的挤压将萃取柱内的液体排挤出萃取柱。另外，也可以使用正压或负压固相萃取装置对批量样品进行固相萃取操作。随着科技的发展和样品数量的增多，越来越多的分析实验室开始使用自动固相萃取仪，特别是多通道固相萃取仪对批量样品进行处理。

7. 固相萃取手动装置及操作步骤

琪摩科技公司是一家服务于生物、化工、医学工程等领域，主要生产氮吹仪 固相萃取 喷雾干燥机、冷冻干燥机、超声波细胞粉碎机、无菌均质器、超声波清洗机、常规实验设备等为实验室提供最好的仪器

8. 固相萃取仪的技术应用及特点

1、精确控速，单道流速0.01~10.85ml/min,支持大体积进样和正压洗脱，避免交叉污染；
2、无级数控操作、大屏幕显示、触摸屏与按键兼容操作，轻触按键、人体工程力学设计；
3、耐腐蚀顶板，机箱磷化和多层环氧树脂喷涂处理；
4、机箱结构方便维护，配有宝晶科技萃取工作软件模块，多种输出方式，可以选配电脑连接操作；
5、多通道，小柱接头耐酸、碱、有机溶剂、氧化剂腐蚀；
6、采用高精度数控技术电机，低耗能、低噪音，控速更精准；
7、数控泵管采用美国原装长寿命管材；
8、操作简单，单人操作可同时进行了1~8个样品的处理，大提高工作效率；
9、萃取速度一致性好、控制调整方便，密封性好，稳定性强；
10、采用人性化设计，每一条通道管路都配有原厂标记，通过标记可以实现直接对接，省时省力。

9. 固相萃取仪的概念及基本原理

SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相人物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。
SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。

10. 固相萃取柱的洗脱率一般在什么范围

固相萃取柱的洗脱率看具体情况而定。

固相萃取柱（英文, 简称SPE column，或Solid Phase extraction Cartridges，简称SPE cartridges）是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。主要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。固相萃取技术已经被广泛地使用在许多国标（GB/T）以及行业分析标准中。
原理：
SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。