蛙心灌流实验装置

1. 双蛙心灌流实验的实验内容

他解剖了两只青蛙取出心脏，其中一个连接迷走神经，一个剥离或割断。他将两个蛙心用导管连接实施灌流试验。他先用电击了第一个心脏连着的迷走神经，第一个心脏受到抑制，当连着迷走神经的心脏的灌注液流到第二个心脏上时，第二个心脏的跳动变缓了！

2. 双蛙心灌流实验的研究背景

20世纪初，奥地利Graz大学的德国科学家Otto Loewi（奥托·洛伊）提出了一个大胆猜想，他猜想神经系统是通过化学物质对身体各部分控制的。
他研究迷走神经对于心脏跳动的控制，一直苦于无法证明究竟是电产生化学物质还是电直接作用于身体，这个问题一直苦恼了他17年。直到1921年复活节前夜，他突然从睡梦中醒来，在一片小纸上匆匆记录下来。第二天早上起来他想起来夜间写了一些重要的东西，但由于太潦草，无法辨认。第二个夜晚3点钟，这个想法又出现在梦里。醒后，Loewi立马赶往实验室完成了这个实验。
他正是用这个简介的实验成功的首次真出了神经系统对生命活动的调节的机制！他也因此得了1936年诺贝尔生理学或医学奖。

3. 蛙心灌流实验

[实验目的]
1．学习离体蛙心灌流的实验方法。
2．观察Na、K、Ca三种离子及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。

[实验原理]
1．心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境，内环境的变化直接影响着心脏的正常活动。本实验在蛙心的灌流液内人为地加入一些物质而改变心脏活动的内环境，观察心脏活动有何变化。

2．心肌细胞分类
收缩性 兴奋性 传导性 自律性
非自律细胞， 心房肌，心室肌细胞 有 有 有 无
自律细胞， p细胞，浦肯野细胞 无 有 有 有

快反应细胞：心房肌，心室肌，浦肯野细胞：主要由快钠通道被激活，Na快速内流引发动作电位，去极速度快
慢反应细胞：窦房结细胞，房室交界区细胞：主要由慢钙通道被激活，Ca内流引发动作电位，去极速度慢

3．心肌细胞的生理特征： 电生理特征：自律性，兴奋性，传导性
机械生理特征：收缩性

影响心肌细胞电生理因素
影响心肌细胞兴奋性因素
（心室肌细胞） 影响心肌细胞自律性因素
（窦房结细胞） 影响心肌细胞传导性因素
（房室交界区细胞）
静息电位水平与阈电位水平之间的差距 4期自动除极的速度 结构因素：直径
钠通道状态 最大复极电位水平与阈电位水平之间差距 动作电位0期去极速度和幅度
邻近部位膜的兴奋性

心肌细胞兴奋－收缩耦联过程所需的Ca要从细胞外液转运，细胞兴奋时，膜上Ca通道开放，因此：
细胞外液Ca浓度↑――细胞兴奋时内流Ca↑――心肌收缩力↑
反之亦然

4．1％KCl： 即134mmol/ L（正常：4mmol／L）
轻，中度高钾：
细胞外K↑――K与Ca在细胞膜上有竞争性抑制――K抑制细胞膜对Ca转运――进入细胞内Ca↓ ――心肌的兴奋收缩联过程减弱――心肌收缩力↓
[K] ↑――膜内外k浓度梯度减小――静息电位绝对值减小――兴奋性↑
[K] ↑――细胞膜对k通透性增加――K通道失活V↓――自动去极化V↓――自律性↓
[K] ↑――细胞膜对k通透性增加――K外流增加――最大复极电位↑――自律性↓
[K] ↑――Ca内流受抑制――0期去极速度和幅度降低――传导性降低

重度高钾：
[K]↑↑――RP↓――Na通道失活――兴奋性丧失

5．2％CaCl2： 即180mmol/L（正常：2mmol／L）
细胞膜外Na与Ca有竞争性抑制
细胞外液Ca浓度↑――细胞兴奋时内流Ca↑――心肌收缩力↑

快反应细胞：
高Ca――Na内流抑制――0期去极化速度及幅度下降――传导性↓
慢反应细胞：
高Ca――Ca易进入细胞，Ca内流增加――0期去极化速度增加――传导性↑

6． O. 65％NaCl ： 111mmol／L
细胞外Ca↓――2期内流Ca↓――胞浆Ca 浓度↓――心肌收缩↓

[Ca] ↓――Ca内流减少――0期去极化速度减慢――传导性↓

[Ca] ↓――Ca不易进入细胞――4期自动除极的速度减慢――自律性↓

7：肾上腺素 正性变化
肾上腺素与心肌细胞膜上的β1受体结合――心肌细胞和肌浆网膜Ca通透性↑――肌浆中Ca浓度增加――心肌收缩↑
使K通道，Na通道，Ca通道都开放，------
慢Ca通道-----
8：乙酰胆碱 负性变化
乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合――心肌细胞膜K通道的通透性↑――促k外流――
1：窦房结细胞复极时K外流↑――最大复极电位水平↑――自律性↓
2：复极时K外流↑――AP 2,3期缩短――Ca进入细胞内↓――心肌收缩↓

乙酰胆碱可直接抑制Ca通道――Ca内流↓――心肌收缩↓

[实验对象] 青蛙或蟾蜍
[实验器材和药品]
1．器材 生物信号采集系统、机械换能器、蛙类手术器械1套、蛙心插管、蛙心夹、试管夹、双凹夹、万能支架、滴管、150ml小烧杯4个、任氏液。
2．药品 O. 65％氯化钠、2％氯化钙、1％氯化钾、1：10 000肾上腺素、1，10 000乙酰胆碱等。
[实验步骤]
1 离体蛙心的制备
(1)取1只蟾蜍，破坏脑和脊髓，仰卧固定于蛙板上，用外科剪由剑突处向两锁骨肩峰端呈三角形剪开皮肤，用粗剪刀剪开胸壁，用图钉固定两前肢，用镊子提起心包膜，用眼科剪将其剪开，暴露心脏。
(2)在两个主动脉干下各穿两根细线（一根用来结扎腔静脉，另一根用来结扎蛙心插管和主动脉），并将其中一根打一活结备用。
(3)将心脏上翻，辨认心房，静脉窦，腔静脉，然后结扎腔静脉。
(4) 用左手提起结扎线，右手用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一“v”型口。将盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指将套管堵住，以防套管中的任氏液流出)从“v”型口插入动脉球底部，然后稍后撤套管，再将蛙心管尖端转向蟾蜍的背侧及左下方，于心缩期插入心室内。插管如已进入心室，可见管中液面随着心搏而升降，此时即可将预置线的活结扎紧，并固定于插管壁的小钩上。
(5) 小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支；将心脏连同静脉窦一起剪下。
(6)吸去管内的血液，并用任氏液反复冲洗心室内的余血，以防血液凝固而影响实验的
进行。用连有细线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部。（心尖大，夹组织少，不易损伤心脏）

2．实验装置
将蛙心插管用试管夹固定于支架上，蛙心夹的连线连接在机械换能器上。换能器的输出线与计算机的“输入”端相连。打开计算机，进入“蛙心灌流”界面。调节实验参数，开始记录心脏收缩曲线。

3．观察项目
(1)记录心脏在仅有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，作为正常对照。
(2)吸去管内的任氏液，换以等量0.65％Nacl，观察并记录心跳的变化。
(3)等量任氏液换洗，待心跳恢复正常后，加入2％Cacl 1—2滴，记录观察心跳的变化。
(4)等量任氏液换洗，待心跳恢复正常后，加入l％Kcl 1～2滴，记录观察心跳的变化。
(5)等量任氏液换洗，待心跳恢复正常后，加入1：l0 000肾上腺素1～2滴，记录并观察心跳的变化。
(6)等量任氏液换洗，待心跳恢复正常后，加入l：10 000乙酰胆碱1～2滴，记录并观察心跳的变化。

4．实验结果的处理 对正常心脏收缩曲线和各项实验所得结果均应在实验时进行标记，然后整理并附在实验报告单上，对实验结果进行理论上的解释。

收缩幅度 收缩频率
正常
KCL ↓ ↓
CaCl ↑ ↑
NaCl ↓ ↓
E ↑ ↑
Ach ↓ ↓

[注意事项]
1．蛙心夹应一次性夹住心尖，不宜夹多次，以免损伤心脏。
2．蛙心夹与换能器簧片的连线应呈一定的倾斜度，以防溶液滴入换能器。
3．当各项实验效果明显后，应及时将插管内的溶液吸出，至少用任氏液反复冲洗2～3次，待心跳恢复正常后，再进行下一项实验。
4．各种溶液的滴管应分开，不要混用。
5．在实验过程中，基线的位置、放大倍数、扫描速度一经调好后不要再变动。
6．在各项实验中，蛙心插管内灌流液的液面高度应始终保持一致，以保证心脏固定的负荷。
7．每一项实验，均应先记录一段正常对照曲线，然后再加入药液并记录其效应。
8．肾上腺素：加2-3滴，可多次使用 乙腺胆碱：必须最后一次滴加 NaCl：全换 其余：从一滴加起

[思考题]
1．给人体快速静脉注射钾离子，会有什么样的结果?
2．蛙心插管内灌流液是心脏的什么负荷?
3．正常体内肾上腺素、乙酰胆碱等化学物质来自何处?

4. 怎样对蛙心灌流实验做出分析

(1)取一蟾蜍毁其脑和脊髓，仰位固定于蛙板上，暴露心脏的方法同实验9。
(2)心脏插管 分支前的主动脉下穿一线并打一松结备用 ，左侧主动脉穿一根线并结扎之，用左手提起结扎线，右手用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一“V”型口。将盛有少量任氏 液的蛙心套管(用拇指将套管堵住，以防套管中的任氏液流出)从“V”型口插入动脉球底部，然后稍后撤套管，再转向心室中央方向插入，可见液面随心搏升降即可。将分支前主动脉下的松结扎紧，并固定在套管的小突上。小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支；结扎与静脉窦相连的后腔静脉，并在结扎线以下剪断，将心脏摘出。

5. 急！！！蛙心灌流试验

解剖两只青蛙取出心脏，其中一个连接迷走神经，一个剥离或割断。将两个蛙心用导管连接实施灌流试验。先用电击了第一个心脏，当连着迷走神经的心脏的液体流到第二个心脏上时，第二个心脏的跳动变缓！

神经系统是通过化学物质对身体各部分控制
蛙心灌流实验的意思就是这样!

控制在同一个压强下吧

蛙心插管内灌流液的液面高度应始终保持一致，以保证心脏固定的负荷。

6. 蛙心灌流实验方法步骤谁能介绍下！

蛙心灌流实验方法 原理
作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋，因此，只要将离体的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动。心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性和收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时(高于7.9mmol/L)，心肌兴奋性、自律性、传导性、收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心肌收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快和心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。蛙心灌流实验方法步骤生物帮上面有详细的介绍
MTT方法 http://doc.bio1000.com/show-3390.html

7. 离体蛙心灌流实验ip是什么

离体蛙心灌流实验ip是动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。

1921年Otto Loewi通过离体双蛙心灌流实验证明递质的存在。当刺激甲蛙心使迷走神经兴奋时，甲蛙心受到抑制，这时将甲蛙心的灌注液注入乙蛙心，则乙蛙心也表现出抑制。这就说明甲蛙心迷走神经兴奋时，必定释放出一种抑制性物质，才能使乙蛙心也受到抑制。

实验注意事项：

1、每次换液时，液面均应保持一定的高度。

2、每次换入灌流液或滴加试剂出现明显效应后，应立即吸出全部灌流液，并以新鲜任氏液换洗2~3次，待心跳恢复正常后，再进行下一步骤。

3、每次加入 试剂 后，应立即用滴管轻轻搅匀，使之迅速发挥作用。

4、加试剂时，每次不宜过多，先加1~2滴，如作用不明显时可再补加。

5、随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润状态。

6、固定张力换能器时，应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入张力换能器内。

以上内容参考网络-化学传递学说

8. 蛙心灌流实验结果分析是什么

蛙心灌流实验结果分析

1、用0．65％Nacl溶液灌注蛙心出现心跳减弱

心肌的收缩活动是由Ca2+排触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外Ca2+浓度呈正比。用 0．65％NaCL溶液灌注心，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位二期内流Ca2+减少。

胞浆Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。如果长时间用0．65％NaCL溶液灌流蛙心，心脏最终会停止收缩，但心肌仍能产生动作电位（即产生兴奋），这种现象称为兴奋一收缩脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca2+后的表现。

2、用高K+任氏液灌注蛙心时，心跳减弱

用高K+任氏液灌注蛙心时，心跳明显减弱，甚至出现心脏停止于舒张状态的现象。因为细胞外K+浓度增高时K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+可抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进人细胞内Ca2+减少，心肌的兴奋一收缩耦联过程减弱心肌收缩力降低。

当细胞外K+浓度显著增高时，膜内外的K+浓度梯度减小，静息电位的绝对值过度减少，Na+通道失活，心肌的兴奋性完全丧失，心肌不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。

3、滴加2％CaCL2后，离体蛙心收缩力增强

用高Ca2+任氏液灌注蛙心，可见蛙心收缩力增强，但舒张不完全，以致收缩基线上移。在Ca2+浓度较高的情况下，心脏会停止在收缩状态。这种现象称为“钙僵”。

心肌的舒缩活动与心肌肌浆中 Ca2+浓度高低有关。当Ca2+浓度升高至10-5M水平时，作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的Ca2+，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而触发肌丝滑行，肌纤维收缩。

当肌浆中Ca2+浓度降至10-7时，Ca2 任氏液灌注蛙心,使得肌浆中Ca2+浓度不断升高，Ca2+与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合而不解离的程度，于时心肌将持续收缩，因而出现“钙僵”。

4、滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强

向蛙心滴加肾上腺素后，可见蛙心收缩增强，心脏舒张完全，其机理为肾上腺素与心肌细胞膜的β受体结合，提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌改缩增强。

另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力，促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加；提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，刺激Na+— Ca2+交换使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速。这样，将使心肌舒张速度增快，整个舒张过程明显加强。