⑴ 凝胶电泳的实验原理
凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳 是一大类技术,被科学工作者用于分离不同物理性质(如大小、形状、等电点等)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。 该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆技术操作。
凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:
1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者非变性凝胶电泳,或二维电泳。
3.毛细管电泳
4.酶谱法(zymography)
5.变性梯度胶凝电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)
琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:
1、 DNA的分子大小:
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。
2、 琼脂糖浓度
一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
3、 DNA分子的构象
DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。
4、 电源电压
在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段姆直媛蚀锏阶畲?所加电压不得超过5V/cm。
5、嵌入染料的存在
荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15%。
6、 离子强度影响
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
对于天然的双链DNA,常用的几种电泳缓冲液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配制成浓缩母液,储于室温。
⑵ 电泳实验能否说明Fe(oH)3胶体带正电荷
能 高中课本第三册上有
⑶ 氢氧化铁胶体的电泳实验是怎样的
电泳证明了胶体粒子带电,该实验中阳极颜色变浅,阴极红褐色变深,说明氢氧化铁胶粒带正电荷
⑷ 高中化学必修一的氢氧化铁胶体电泳实验
导电液实际上就是电解质溶液,一般加稀盐酸
⑸ 电泳实验怎么做
若是生物方面的:
1、实验样品的准备
2、电泳仪器及相关实验试剂准备
3、根据实验目的,设计实验方案
4、具体实验
可联系北京德元国际科技有限公司,他们做生物方面的电泳实验,应该比较清楚
⑹ 胶体示意图
(1)当一束光线透过胶体,从入射光的垂直方向可以观察到胶体里出现的一版条光亮的“通路”,这种现象权叫丁达尔现象,丁达尔现象是胶体特有的性质,空气不是胶体,不会产生丁达尔效应,所以该图中有一处明显错误是空气中也出现了光柱, 故答案为:空气中也出现了光柱;进入烧杯前,光穿过的空气不是胶体,不会产生丁达尔效应; (2)清晨,太阳升起,水被太阳加热,形成水雾,可能构成1~100nm的分散质,是胶体,阳光透过树叶间隙形成光束,穿过这些水雾会产生丁达尔现象, 故答案为:清晨;清晨水被太阳加热,形成水雾,可能构成1~100nm的分散质,阳光透过树叶间隙形成光束,穿过这些水雾会产生丁达尔现象; (3)打开暖瓶(加热水)看到的水汽,可能构成1~100nm的分散质,用一束光照射穿过这些水雾会产生丁达尔现象,该法是最简单、最环保观察丁达尔效应的方法, 故答案为:打开暖瓶(加热水)让水汽升腾起来,用一束光照射即可.
⑺ 有一胶体,在电泳实验中其胶粒向阴极移动,对这种胶体溶液进行下列处理,不发生聚沉的是()A.加硫
A.硫酸钠为电解质,能使胶体发生聚沉,故A不选;
B.加热能使胶体发生聚沉,故B不选;
C.硅酸胶体带负电,能使带正电荷的胶体发生聚沉,故C不选;
④Fe(OH)3胶体带正电,不能使带正电荷的胶体发生聚沉,故D选;
故选D.
⑻ Fe(OH)3的电泳实验能否解释Fe(OH)3胶体较稳定为什么
电泳实验能证明Fe(OH)3胶体带电,同种胶粒带同种电荷之间有排斥力,这样就不会聚集一起变成沉淀。
⑼ 哪些胶体能做出电泳实验
电泳是带电胶体粒子在电场中的运动,理论上说,凡是带电的胶体都可以做电泳实验.
但如果带电量少(Zata电位小),电泳不明显,不适合做电泳实验.