石景山实验室抽气装置

『捌』 如何用faa法染色固定，如何使用抽气装置

石蜡切片法——固定与包埋
一、实验目的

掌握石蜡切片法中固定、透明与包埋的基本操作步骤及要点。

二、实验材料

党参、秦艽或其它材的根

三、实验用具及试剂

福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(简称FAA)、各级酒精溶液、二甲苯、石蜡（熔点52～54℃）、恒温箱、电热板、解剖针等。

四、实验内容与步骤

1．取材

取培养在花盆中或用植物园中的党参根或秦艽根，用水冲去附在其上的木屑或泥土，切成5mm长的小段(亦可用带侧根的部分)。

2．固定

FAA固定液中固定24h以上。

3．脱水

将FAA固定液倒出后，转入70%酒精中浸泡1h后，再顺次转入83%和95%酒精中各2h，然后转入纯酒精中2～3h（中间换一次)。

4．透明

等量纯酒精及二甲苯中2h，二甲苯2h(中间换一次)。

5．透蜡

将已经透明的材料和二甲苯一起倒入包埋用的小杯中，此时可把写好的标签投入二甲苯中，然后轻轻倒入溶解的石蜡(熔点为52～54℃)，这样，石蜡就在二甲苯的上层凝固起来。小杯放在35～37℃的熔蜡炉内，使石蜡徐徐溶解到饱和为止，约需l～2d。

6．包埋

先将小杯移入56～60℃的恒温箱内(温度宜较石蜡熔点高3℃)，待石蜡熔化后，倒去含二甲苯的石蜡，换以熔化的纯石蜡，以后每隔lh左右换纯蜡一次，材料在恒温箱中的时间视不同材料而异，约为2～5h，共换纯蜡2～3次，即可进行包埋。

包埋时，先用道林纸摺成适当大小的纸盒，放在已经加热的电热板上。然后右手持解剖执针，左手从温箱中取出盛满石蜡的小杯，随手将温箱关好，迅速把石蜡连同材料和标签一起倒入纸盒中，再用烤热的解剖针轻轻拨动材料使之排列整齐。如发现材料附近有石蜡的凝块，则需用热针熔去，同时使标签上有字的一面朝外，以便识别。稍停，待盒中石蜡凝到不致动摇材料时，就将纸盒轻轻放入冷水中使它迅速凝固。半h后，即可取出贮藏备用。

五、实验注意事项

1．在材料选择和切割时应注意下列问题：

（1）选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料；

（2）先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料，立即固定；

（3）注意按季节和植物生长发育不同阶段取材；

（4）材料大小要适当。

2．固定时应注意的问题：

（1）标签的填写

必须将标签纸贴于标本瓶上，并写上以下内容：编号、采集时间、地点、处理者姓名。另外，在实验记录本上表明编号的详细情况：何种植物的何种器官，是横切还是纵切，用的是何种固定液等等。

（2）固定液的选择

根据所用材料的不同，选择不同的固定液。一般，各种器官，不论是根、茎、叶，还是花和果实，其组织切片均用FAA固定液，而根尖、茎尖、花等材料的压片（非切片法）用卡诺固定液。

（3）材料体积的影响

对于微小材料可直接投入固定液，对于较大材料，则须将其先解剖成较小材料，再迅速投入固定液。若材料外部超过固定液上线，达不到固定作用时，应须立即放入渗透力很强的固定液中，如醋酸酒精溶液；或利用超声波发生器处理数min。

（4）多毛芽或根茎的固定

对多毛的芽或根茎固定时，须先投入渗透能力很强的醋酸酒精溶液中数分钟，然后再投入其它固定液中固定。必要时配合抽气装置，其意义在于使固定液尽快渗入材料内部，并排除材料内气泡的干扰。

3．脱水时的注意事项

（1）脱水从低浓度开始逐渐替换高浓度酒精，否则发生细胞收缩。

（2）从同浓度（保存液中）酒精开始。例FAA从70%或50%酒精开始。注意要加盖，各级酒精停留时间因材料而定。

4．透明时的注意事项

（1）使用时材料必须脱尽水分，否则发生乳状混浊。
（2）要避免材料收缩