超聲波破碎為什麼要加溶菌酶

① 蛋白質分離提純方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

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吸附層析

1、吸附柱層析

吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。

2、薄層層析

薄層層析是以塗布於玻板或滌綸片等載體上的基質為固定相，以液體為流動相的一種層析方法。這種層析方法是把吸附劑等物質塗布於載體上形成薄層，然後按紙層析操作進行展層。

3、聚醯胺薄膜層析

聚醯胺對極性物質的吸附作用是由於它能和被分離物之間形成氫鍵。這種氫鍵的強弱就決定了被分離物與聚醯胺薄膜之間吸附能力的大小。

層析時，展層劑與被分離物在聚醯胺膜表面競爭形成氫鍵。因此選擇適當的展層劑使分離在聚醯胺膜表面發生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續過程，就能導致分離物質達到分離目的。

② 我想知道細胞破碎的方法及各種方法的原理和優缺點

機械法：主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。

常用的細胞破碎方法有反復凍融法、超聲破碎法、酶處理法、自溶法和表面活性劑處理法 。

細胞破碎是提取胞內產物的關鍵步驟，破碎方法的得當與否，直接影響到所提取產品的產量、質量和生產成本。實驗室對組織細胞的破碎方法很多，有機械方法、物理方法、化學方法和生物化學方法等。

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細胞破碎條件

在破碎前，材料常需要預處理，如動物材料要除去與實驗無關甚至有妨礙的結締組織，脂肪組織和血污等，植物種子需要除殼，微生物材料需將菌體和發酵液成分分開等。

對同一實驗材料，由於實驗要求不同，採用的破碎方式也存在一定差異，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸，前者必須保持十分溫和的條件，以保持分子的完整性;後者可採用強烈手段。

不同實驗規模、不同實驗材料和實驗要求，使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織，如肌肉、植物的根莖等，常需要強烈的攪拌或研磨作用，才能把其組織細胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等，用普通的玻璃勻漿器即可達到完全破壞細胞的目的。

③ 細菌超聲破碎加入溶菌酶的目的是什麼

溶菌酶是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。它可以很好地把細菌分解溶解掉！

④ 細胞破碎技術的破碎阻力

高壓勻漿破碎法（homogenization）
高壓勻漿器是常用的設備，它由可產生高壓的正向排代泵（positive displacenemt pump）和排出閥（discharge valve）組成，排出閥具有狹窄的小孔，其大小可以調節。細胞漿液通過止逆閥進入泵體內，在高壓下迫使其在排出閥的小孔中高速沖出，並射向撞擊環上，由於突然減壓和高速沖擊，使細胞受到高的液相剪切力而破碎。在操作方式上，可以採用單次通過勻漿器或多次循環通過等方式，也可連續操作。為了控制溫度的升高，可在進口處用乾冰調節溫度，使出口溫度調節在20℃左右。在工業規模的細胞破碎中，對於酵母等難破碎的及濃度高或處於生長靜止期的細胞，常採用多次循環的操作方法。
振盪珠擊破碎法 (Skaking Bead)
將等體積的小量組織樣品與高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋蓋微量管中,再加入緩沖液與穩定成份到1.5ml的體積, 用6500RPM振盪機高速上下振動8秒,休息8秒,再振動8秒即可.此方法是目前最快且一次可處理最多樣品的方法. 一台機器最多可以在一天處理2400支樣品.對小量且多樣的人很方便.
高速攪拌珠研磨破碎法（fine grinding）

研磨是常用的一種方法，它將細胞懸浮液與玻璃小珠、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌，使細胞獲得破碎。在工業規模的破碎中，常採用高速珠磨機 。
超聲波破碎法（ultrasonication）
超聲波破碎法利用超聲波振盪器發射的15-25kHz的超聲波探頭處理細胞懸浮液。 超聲波振盪器有不同的類型，常用的為電聲型，它是由發生器和換能器組成，發生器能產生高頻電流，換能器的作用是把電磁振盪轉換成機械振動。超聲波振盪器以可分為槽式和探頭直接插入介質兩種型式，一般破碎效果後者比前者好。 滲透壓沖擊破碎法（osmotic shock）
滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法，將細胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由於滲透壓的作用，細胞內水分便向外滲出，細胞發生收縮，當達到平衡後，將介質快速稀釋，或將細胞轉入水或緩沖液中，由於滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內，引起細胞快速膨脹而破裂。
凍融破碎法（freezing and thawing）
將細胞放在低溫下冷凍（約-15℃），然後在室溫中融化，反復多次而達到破壁作用。由於冷凍，一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂，從而增加細胞的親水性能，另一方面胞內水結晶，形成冰晶粒，引起細胞膨脹而破裂。對於細胞壁較脆弱的菌體，可採用此法。
酶溶破碎法（enzyme lysis）
酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞，使細胞壁受到部分或完全破壞後，再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜，進一步增大胞內產物的通透性。溶菌酶（lysozyme)適用於革蘭氏陰性菌細胞的分解，應用於革蘭氏陽性菌時，需輔以EDTA使之更有效地作用於細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同於原核細胞，需採用不同的酶。
化學破碎法（chemical treatment）
採用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內組分。常用酸、鹼、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑
去垢劑破碎法（detergents）
蛋白質復性利用包含體與細胞碎片的密度差，用離心法將包含體與細胞碎片和可溶性蛋白質分開，獲得了干凈的包含體，再對包含體溶解復性。這樣首先就擺脫了大量的雜蛋白、核酸、熱原、內毒素等雜質，使後面的分離純化簡單了。從這個角度上講，包含體的形成對分離純化亦有好處。

⑤ 超聲波能破碎DNA嗎

我現在做原核表達一個融合蛋白,其中單鏈抗體基因是合成的（根據大腸桿菌的密碼子偏愛性設計的），表達載體是PET和pGEX，做了幾次表達好象蛋白都行成包涵體。
我想請教的問題是：
一 如何判斷是不是形成包涵體，我們實驗室那個破超聲波破碎儀壞了，再沒有超聲波破碎儀的情況下如何破碎菌體，我配了下面二種裂解液
裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100
裂解液：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml
再一起用我們那個破破碎儀超但根本打不動，最後我就用反復凍融法把其中二個在（37和-20反復凍融）感覺也不行，
請問大俠們，你們是如何破碎菌體的，反復凍融該怎麼搞了？我看別人判斷破碎是不是完全的標準是： 1，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的，超聲完全後變的透明、清澈。
這一項是一個比較常用的方法，以前我的師姐也這么告訴我的，但我超一個小時還沒有透明？
2，液體的粘滯性：超聲後菌液從槍頭滴下不粘連。
這一項跟沒有看到粘滯性，是不是我破碎時加的液體太多了，大家在超聲時加什麼緩沖液？比例是多少？
3，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉速高一點）。 沉澱是未破碎或破碎不完全的菌體。
高速離心檢測時6,000 g是不是轉速太低了，我們以前都20000g，離心後再跑膠檢測？
4，染色：破碎後的菌液塗片，革蘭氏結晶紫溶液染色0.5分鍾，鏡檢
染色後看什麼樣的結果說明破碎完全了？
二 我在做原核表達時，表達載體是PET和pGEX，表達條件是：
誘導溫度37度 [IPTG]=0.5mM 時間是3h
表達後檢測是包涵體
怎麼搞才能使蛋白形成可容性的蛋白？
下面的方法哪個更有效一些：
1 降低表達溫度。（20-30度表達）
2 增加誘導時細菌密度。（OD大於1.0）
3 降低表達啟動溫度。（先將菌株冷至20度左右再誘導）
4 降低誘導劑的濃度。（如IPTG可小於0.1mM）
5 增加通氣。（培養瓶中放入1/3左右的培養基，猛烈搖動，增加氧含量，抑制包涵體形成）
6 減少誘導時間。（2-4小時

大家能給推薦一些進口超聲破碎儀的資料

⑥ 求助超聲波破碎細菌細胞的方法，條件

超聲波細胞破碎儀 工作原理 超聲波細胞破碎儀是利用超聲波在液體中的分散效應,使液體產生空化的作用,從而使液體中的固體顆粒或細胞組織破碎. 超聲波細胞破碎儀由超聲波發生器和換能器兩大部分組成.超聲波發生器電路將50/60Hz的市電轉換成18-21KHz的高頻高壓電能，該能量被輸到「壓電換能器」中，並被轉換成高頻機械震動，再經「變幅桿」的聚能和振幅位移放大後作用於液體中而產生強大的壓力波，這個壓力波則會形成千百萬的微觀氣泡，隨著高頻振動，氣泡將迅速增長，然後突然閉合，在氣泡閉合時，由於液體間相互碰撞產生強大的沖擊波，在其周圍產生上千個大氣壓的壓力（即超聲空化）。它使得變幅桿頂部產生強有力的剪切活動，並使得氣體中的分子強力地被攪動。該能量足以將細胞及各類無機物質破碎重組。 主要用途 超聲波細胞破碎儀具有破碎組織、細菌、病毒、孢子及其它細胞結構，勻質、乳化、混合、脫氣、崩解和分散、浸出和提取，加速反映等功能，故廣泛應用於生物、醫學、化學、制葯、食品、化妝品、環保等實驗室研究及企業生產。

⑦ 用溶菌酶處理細菌菌體之後不用超聲破碎可以么

細菌有堅硬的細胞壁,首先要破碎經胞.方
法有三種：①機械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法；②化學試劑法：用SDS處理細胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶,都可使細胞壁破碎.
由於高等動物DNA 主要存在於細胞核與線粒體中,所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）：
①破碎細胞難；從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長.在此時期間DNA 可能會被DN ase降解,而動物組織：特別是肌肉組織很難破碎,即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器,易造成DNA 斷裂.
②分子量大,一般比細菌的大2—3個數量級,比病毒的大4—5個數量.對不同生物材料,要根據具體情況選擇適當的分離提取方法.

⑧ 問題是:革蘭氏陰性菌細胞壁破碎的過程中,溶菌酶為什麼要和螯合劑edta一起使用

需在培養的時候加入，在此過程中若加入足夠多的EDTA，則能激活全部的細胞壁對酶的敏感性，此時再加入酶，則能充分的溶解細胞壁，使得原生質體的純度足夠高。。

⑨ 我的目的蛋白是包涵體還是細菌破碎不完全

細菌工程菌胞內表達主要分為兩種形式，一種是在強啟動子條件下的高效表達，由於蛋白的過度表達，使蛋白不能及時有效折疊而發生無規則捲曲，以固體顆粒的形式堆積於胞間質中，這就是所說的包涵體，另外一種是間質內的可溶性表達，即可以發生正常折疊，具有生物活性。一般情況下，細菌只要被正常破壁就可以通過離心的形式將包涵體和可溶性表達的蛋白分離開。
超聲破碎的條件一般是300w，10s/10s，20分鍾，具體條件可根據自身情況而定。
超聲前菌體的准備：菌液離心後，先用PBS將菌沉澱洗2-3遍，然後按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切記冰浴超聲！
如何判斷是否超聲完全：一般有以下幾個方面：
1，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的，超聲完全後變的透明、清澈。
2，液體的粘滯性：超聲後菌液從槍頭滴下不粘連。
3，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉速高一點）。 沉澱是未破碎或破碎不完全的菌體。
4，染色：破碎後的菌液塗片，革蘭氏結晶紫溶液染色0.5分鍾，鏡檢。
超聲後加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染。
一些需要注意的問題：
1，蛋白以包涵體形式表達，追求的是高破碎率，要求細胞碎片很小，而另一種蛋白是可溶形式表達，所以細胞碎片不能很小，兩種情況要求不同但目的相同，都是便於後期的固液分離。
2，如果超聲時出現黑色沉澱，說明超聲功率太強。
3，超聲時間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響。
4，盡量防止泡沫的產生。