A. 做PCR实验需要准备哪些实验耗材
高压过哗老的超纯水，高压灭菌过的蓝色、白色和黄色枪头，100ul、乱弯升闹如500ul和1ml离心管，大量的话需要排管（12连管），放置离心管用的的架子（96孔板等）。PCR最好在冰上进行，所以准备冰盒。
B. PCR实验会用到哪些东西
仪器：PCR仪
耗材：PCR管
试剂：PCR Mix（购买）,H20,引物（公司合成）,模板（质粒模板,基因组模板或者RNA反转录的cDNA模板）
C. 做pcr需准备哪些实验器材
pcr仪，pcr管，移液枪，还有所加的试剂
D. 荧光实时定量PCR要购买哪些试剂和材料
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也拆团旁可以用水域做。旅橡
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且或册如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
E. pcr实验室都需要哪些仪器
除了PCR仪和凝胶成像仪，还有电泳仪、微型离心机、漩涡振荡器，当然，要是想精细，还得有制作纯水的设备
F. 做PCR实验要准备什么
PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作,PCR自动热循环中影响因素很多,对不同的DNA样品,PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致.现将几种主要影响因素介绍如下.
一、温度循环参数
在PCR自动热循环中,最关键的因素是变性与退火的温度.如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s,共25～30个循环,扩增片段500bp.在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算.在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30～60s,这一迟滞时间的长短取决于几个因素,包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差,在设置热循环时应充分给以重视和考虑,对每一仪器均应进行实测.
关于热循环时间的另一个重要考虑是两条引物之间的距离；距离越远,合成靶序列全长所需的时间也越长,前文给出的反应时间是按最适于合成长度500bp的靶序列拟定的.下面就各种温度的选择作一介绍.
1．模板变性温度变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链DNA模板,PCR也就不会启动.变性温度低则变性不完全,DNA双链会很快复性,因而减少产量.一般取90～95℃.样品一旦到达此温度宜迅速冷却到退火温度.DNA变性只需要几秒种,时间过久没有必要；反之,在高温时间应尽量缩短,以保持Taq DNA聚合酶的活力,加入Taq DNA聚合酶后最高变性温度不宜超过95℃.
2．引物退火温度退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,DNA扩增效率下降；温度低产量高,但过低可造成引物与模板错配,非特异性产物增加.一般先由37℃反应条件开始,设置一系列对照反应,以确定某一特定反应的最适退火温度.也可根据引物的（G+C）%含量进行推测,把握试验的起始点,一般试验中退火温度Ta(annealing temperature)比扩增引物的融解温度TTm(melting temperature)低5℃,可按公式进行计算：
Ta = Tm - 5℃= 4(G+C)+ 2(A+T) -5℃
其中A,T,G,C分别表示相应碱基的个数.例如,20个碱基的引物,如果（G+C）%含量为50%时,则Ta的起点可设在55℃.在典型的引物浓度时（如0.2μmol/L）,退火反应数秒即可完成,长时间退火没有必要.
3．引物延伸温度温度的选择取决于Taq DNA聚合酶的最适温度.一般取70～75℃,在72℃时酶催化核苷酸的标准速率可达35～100个核苷酸/秒.每分钟可延伸1kb的长度,其速度取决于缓冲溶液的组成、pH值、盐浓度与DNA模板的性质.扩增片段如短于150bp,则可省略延伸这一步,而成为双温循环,因Taq DNA聚合酶在退火温度下足以完成短序列的合成.对于100～300bp之间的短序列片段,采用快速、简便的双温循环是行之有效的.此时,引亏卜物延伸温度与退火温度相同.对于1kb以上的DNA片段,可根据片段长度将延伸时间控制在1～7min,与此同时岩告,在PCR缓冲液中需加入明胶或BSA试剂,使Taq DNA聚合酶在长时间内保持良好的活性与稳定性；15%～20%的甘油有助于扩增2.5kb左右或较长DNA片段.
4．循环次数常规PCR一般为25～40个周期.一般的错误是循环次数过多,非特异性背景严重,复杂度增加.当然循环反应的次数太少,则产率偏低.所以,在保证产物得率前提下,应尽量减少循环次数.
扩增结束后,样品冷却并置4℃保存.
二、引物引物设计
要扩增模板DNA,首先要设计两条寡核苷酸引物,所谓引物,实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段,两引物间距离决定扩增片段的长度,两引物的5’端决定扩增产物的两个5’末端位置.由此可见,引物是决定PCR扩增片段长度、位置和结果的关键,引物设计也就更为重要.
引物设计的必要条件是与引物互补的靶DNA序列必须是已知的,两引物之销枣穗间的序列未必清楚,这两段已知序列一般为15～20个碱基,可以用DNA合成仪合成与其对应互补的二条引物,除此之外,引物设计一般遵循的原则包括：
1．引物长度根据统计学计算,长约17个碱基的寡核苷酸序列在人的基因组中可能出现的机率的为1次.因此,引物长度一般最低不少于16个核苷酸,而最高不超过30个核苷酸,最佳长度为20～24个核苷酸.这样短的寡核苷酸在聚合反应温度（通过72℃）下不会形成稳定的杂合体.有时可在5’端添加不与模板互补的序列,如限制性酶切位点或启动因子等,以完成基因克隆和其他特殊需要；引物5’端生物素标记或荧光标记可用于微生物检测等各种目的.
有时引物不起作用,理由不明,可移动位置来解决.
2．（G+C）%含量引物的组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体.两个引物中（G+C）%含量应尽量相似,在已知扩增片段（G+C）%含量时宜接近于待扩增片段,一般以40%～60%为佳.
3．引物内部应避免内部形成明显的次级结构,尤其是发夹结构（hairpin structures）.例如：
4．引物之间两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3’端,即使无法避免,其3’端互补碱基也不应大于2个碱基,否则易生成“引物二聚体”或“引物二倍体”（Primer dimer）.所谓引物二聚体实质上是在DNA聚合酶作用下,一条引物在另一条引物序列上进行延伸所形成的与二条引物长度相近的双链DNA片段,是PCR常见的副产品,有时甚至成为主要产物.
另外,两条引物之间避免有同源序列,尤为连续6个以上相同碱基的寡核苷酸片段,否则两条引物会相互竞争模板的同一位点；同样,引物与待扩增靶DNA或样品DNA的其它序列也不能存在6个以上碱基的同源序列.否则,引物就会与其它位点结合,使特异扩增减少,非特异扩增增加.
5．引物3’端配对DNA聚合酶是在引物3’端添加单核苷酸,所以,引物3’端5～6个碱基与靶DNA的配对要求必须精确和严格,这样才能保证PCR有效扩增.
引物设计是否合理可用PCRDESN软件和美国PRIMER软件进行计算机检索来核定.
人工合成的寡核苷酸引于最好经过色谱（层析）纯化或PAGE纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质.纯化引物在25%乙腈溶液中4℃保存可阻止微生物的生长；一般情况下,不用的引物应保存在-20℃冰箱中,在液体中引物能保存6个月,冻干后可保存1～2年.
G. 我的实验室想开展微生物用PCR方法鉴定，请问需要哪些仪器、试剂，还有操作步骤和方法，全过程最好！谢谢！
步骤如下：
1. 细判或菌总DNA的提取
2. 16S rDNA序掘陵伍列的扩增(采用通用引物)
3. PCR产物的回收
4. 16S rDNA产物与T载体的连接
5. E.coli JM109感受态细胞的制作(CaCl2法)
6. 连接产物转化入E.coli JM109感受态细胞
7. 挑取转化子并验证汪扒
8. 测序以及序列比对
9. 系统发育树的构建
所需仪器及试剂：
PCR仪、冷冻离心机、核酸电泳仪、水浴锅
DNA提取试剂盒、常用培养基、CaCl2、PCR试剂盒
E.coli JM109菌种、T载体、氨苄青霉素（由你载体类型决定）
O(∩_∩)O~，希望对你有用
H. 逆转录PCR的实验步骤用到哪些试剂和仪器
一、实验器具与材料：
1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl
2、吸头：1ml、200μl、20μl
3、匀浆管：5ml
4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个
5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl
6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）
7、量筒：50ml、250ml、500ml
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml
9、试管架：5ml、1.5ml、20μl
10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水
11、铝制饭盒：4个
12、塑料小饭盒：1个
13、大瓷缸：2个
14、锡泊纸：一卷
15、卷纸：2卷
16、三角烧瓶：带盖，稍大
二、实验器具的处理与准备
1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）
先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）
2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡1‰DEPC过夜，再烤干）
3、匀浆器：（包括剪刀、镊子）先洗净后，再高压（不需要泡DEPC）
三、试剂配制：
1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml双蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中静置4小时备用。
2、75%乙醇：用无水乙醇DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高压）
3、异丙醇：放入棕色瓶中
4、氯仿：放入棕色瓶中
5、琼脂糖
仅供参考
I. 刚开始做PCR，要准备哪些东西
刚入门，用的SYBE green I ，需要PCR专用枪头，八连管，目标基因的引物，管家基因(β-actin或)，Trizol、逆转录试剂盒、荧光PCR试剂盒、引物等，
J. 要做（mRNA）RT PCR，需要的仪器有哪些
首先，RT不是证明RNA有无表达的很好方法，RT批不出来会有很多原因，并不仅仅是没有模板。建议你做northern。
做RT需要
1，很干净整洁的实验环境，RNA提取对操作环境的要求很高。
2，电动组织分散仪（IKA公司的T10那种）或研钵+液氮或玻璃组织研磨器，以上提取效果递减。
3，1.5ml管冷冻离心机。
4，移液枪1ml、200ul、10ul一套，最好专用。
5，紫外分光光度计、石英狭缝比色皿。
6，核酸电泳仪、电泳槽（电泳槽最好专用）
7，RNase
free的各式枪头、1.5ml离心管；RNase
free的双蒸水。
8，如果样品不会立即进入下一步实验，建议具备超低温冰箱。