A. 能否用熒光計代替熒光分光光度計
熒光計,包括通過透鏡與激勵濾光片光學連接的光源,與記錄濾光片光學連接的樣品池和記錄系統,其中,光源是脈沖式的,記錄系統是三通道式的,每一通道都包含一光電接收器,光電接收器與選通積分器連接,選通積分器的輸出端與模數轉換器相連,所述光電接收器中之一經緩沖放大器與模數轉換器連接,所有的選通積分器都與測量選通脈沖整形器連接,模數轉換器及測量選通脈沖整形器與控制裝置連接,所述控制裝置與顯示裝置連接。
熒光劑的工作原理是光源氙弧燈發出的光通過切光器使其變成斷續之光以及激發光單色器變成單色光後,此光即為熒光物質的激發光,被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光後照射於測樣品用的光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀。
熒光分光光度計是用於掃描液相熒游標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是190~650nm,發射波長掃描范圍是200~800nm。可用於液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
B. 如何用流式細胞儀分析熒光強度
熒光信號由被檢細胞上標記的特異性熒光染料受激光激發後產生,發射的熒光波長與激發光波長不相同。每種熒光染料都有特定的激發波長,激發後又產生特定波長熒光。通過一些波長選擇通透性濾光片,可將不同波長的散射光、熒光信號區分開。選擇不同的單克隆抗體及熒光染料可以利用流式細胞儀同時測定一個細胞上的多個不同特徵。
(一)熒光信號測量與放大器
線性放大器用於測量信號強度變化范圍較小的信號或具有生物學線性過程的信號,如前向散射光的測量與CD3+細胞DNA指數的測量。
對數放大器用於測量信號強度變化范圍較大且其光譜信號較復雜的信號,在免疫測量中最常使用。
(二)熒光補償
依靠濾光片是不能完全阻擋干擾信號,在每兩種熒光的發射光信號中仍有不可避免的重疊現象。該重疊區越大,信號檢測的准確性越差。通常採用熒光補償的方法來消除重疊信號,保證檢測信號的准確性。
C. 熒光檢測器的類型
熒光檢測器類型:1、激發光譜。熒光屬於光致發光,需選擇合適的激發光波長(Ex)以利於檢測。激發波長可通過熒光化合物的激發光譜來確定。激發光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發單色器,使不同波長的入射光激發熒光化合物,產生的熒光通過固定波長的發射單色器,由光檢測元件檢測。最終得到熒光強度對激發波長的關系曲線就是激發光譜。在激發光譜曲線的最大波長處,處於激發態的分子數目最多,即所吸收的光能量也最多,能產生最強的熒光。當考慮靈敏度時,測定應選擇最大激發波長。2、發射光譜。一般所說的熒光光譜,實際上僅指熒光發射光譜。它是在激發單色器波長固定時,發射單色器進行波長掃描所得的熒光強度隨熒光波長(即發射波長,Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質,並作為熒光測定時選擇合適的測定波長的依據。
濟南東吉儀器有限公司是一家專業從事分析儀器研發、生產及銷售於一體的科技公司。公司RF-20A熒光檢測器高級靈敏度,水拉曼峰信噪比1200以上。快速響應和采樣頻率 (100 Hz, 10 ms)支持UFLC分析,從儀器前方更換燈和流通池,無需位置調節,可通過VP功能查詢使用時間及進行日誌管理。