什麼pcr儀器能做探針的溶解曲線

❶ 如何作QPCR的標准曲線

作QPCR的標准曲線可以用PCR－ELISA法作。

具體如下：

PCR－ELISA法：

利用地高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合；

再加入抗地高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。

常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，加入內標，作出標准曲線，也可實現定量檢測目的。

通過測定一系列已知組分的標准物質的某理化性質，從而得到該性質的數值所組成的曲線。

(1)什麼pcr儀器能做探針的溶解曲線擴展閱讀：

實時熒光定量PCR技術，在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。

檢測方法：

1、SYBRGreenⅠ法：

在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射熒光信號。

而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖、PCR產物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性）。

2、TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；

PCR擴增時，Taq酶的5』-3』外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號。

即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。

PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號，熒光閾值的預設（默認）設置是3-15個循環的熒光信號的標准偏差的10倍，即：threshold = 10*SDcycle 3-15。

利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。