核酸提取儀器怎麼啟動

① 核酸pcr步驟

一、個人三級防護穿戴

帶一次性帽子、佩戴醫用N95、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性隔離衣、防護目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢後應盡快通過專用緩沖間或者走廊，進入核酸提取區（專業核酸提取實驗室）。


二、樣本滅活處理

核酸檢測須有兩名工作人員快速通過進入實驗室，進行滅活實驗操作。生物安全櫃內需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水檯布，對樣本溢灑時進行緊急處理；打開二級容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測樣本管密閉性後進行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，恆溫樣本滅菌儀等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全櫃內。

三、手工核酸提取

操作人員進入試劑配置區或者單獨的潔凈實驗室。

一、試劑區准備

根據說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計入無水乙醇後及時做好標記，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，並顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而後通過傳遞窗傳送到樣本處理區，或者由專人送到核酸提取實驗室中。

二、樣本的裂解

用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已滅活的待提取核酸的待測樣本，渦旋振盪15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。裂解完成後，加入560μl無水乙醇，振盪混勻15s，將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。

向離心柱加入裂解產物630μl，8000轉離心1min，若離心機在生物安全櫃之外，每次使用都需進行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機中小心取出離心柱，將上層離心柱轉移到新收集管中，繼續將剩餘裂解產物630μl加入離心柱中，若樣本體積大於140μl時需重復此步驟，直到全部裂解產物都過柱離心，8000轉離心1min，小心將離心柱轉移到新的收集管中。

取500μl AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內壁緩慢加樣），8000轉離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。

取500μl AW2加入離心柱中，14000轉離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置於離心機中使用最大高談轉速離心1min，以確保將AW2中的殘液完全離心干凈。

取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。

室溫靜止1min，將其虧行放入離心機中8000轉離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標記與登記。

四、用儀器提取核酸

首先按照說明說准備核酸提取試劑，將200μl滅活樣本添加到核酸提取試劑中，根據核酸提取儀的設置程序上機提取核酸，等儀器操作結束，提取核酸完成，回收核酸。

五、PCR體系配置

根據檢測樣本數量配製體系，將配製好的PCR體系充分混勻並離心銷念嘩後，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區，或單獨的樣本加樣實驗室。按照每孔分裝20μL反應體系，進行分裝，在各孔分別加入5μL待測樣本核酸或陰陽對照物（請注意每次檢測器包含1個陽性對照和3個陰性對照且陰性對照需隨機分布），密封PCR管，有條件時模板加樣盡量在單獨的生物安全櫃進行。

工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴增區，或由專人送至PCR擴增實驗室，上機檢測。

六、上機檢測及結果分析

工作人員進入基因擴增分析實驗室，從傳遞窗取出PCR反應管，上機前需混勻並離心反應體系，按試劑盒說明說設置擴增參數並分析判讀結果。分析結果時，嚴格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學局限性等綜合判讀實驗結果。

為防止擴增污染，反應結束後的PCR擴增管嚴禁開蓋並裝入密封帶中裝入指定的垃圾桶中。

七、檢測後的消毒處理

樣本處理完成後，工作人員應用75%的酒精消毒處理外層手套並脫下外層手套，放入生物安全櫃中的生物垃圾桶中。檢測完成後，生物安全櫃檯面和地面應用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進行擦拭。將安全櫃內產生的醫療垃圾用三層垃圾袋密封，並將其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需標記醫療垃圾信息。實驗結束後，生物安全櫃以及實驗室均要進行紫外燈照射消毒，時間至少30min。

實驗操作人員，應有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對一次性隔離衣均勻噴霧消毒處理，而後脫去隔離衣將檢測醫用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級實驗室後，應在緩沖區或走廊按順序摘脫個人三級防護用品，首先應帶新的外層手套，摘掉護目鏡並置於75%乙醇中消毒，自上而下、自內向外翻轉脫掉一次性防護服，脫去外層手套，摘除、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，病毒防護服均需進行高壓滅菌處理。高壓前後醫療垃圾嚴格區分。

病毒相關垃圾需在120度，30min條件進行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而後作為普通醫療垃圾處理。

② 核酸檢測孵育箱的使用方法

主要分為采樣，留樣，保存，純昌塌滅活，檢測五步。
操作步驟為：
1、用咽拭子擦拭咽後壁及雙側咽扁桃體處各5-10次，且不斷旋轉拭子。
2、需要醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後文即旋緊管蓋。
3、保存，將樣本管放入密封袋中及時送檢，而送檢過程中需做圓要嚴格的運輸環境，2-8攝氏度保存。
4、對樣品進行滅活處理。
5、將樣品放入孵育箱進行檢測。
檢測前，還需要對病毒迅舉進行滅活，這樣的作用會使病毒蛋白的結構受到破壞，蛋白不再有生理活性，所以失去感染、致病和繁殖能力，但是常規的滅活不影響病毒蛋白的一級結構，意思就是病毒蛋白的序列沒有變化。四步操作核酸提取，將滅活病毒後的樣本進行核酸提取，用於後續檢測，可以採用自動化的設備，如核酸提取儀等。五步熒光PCR核酸檢測，也就是上機器檢測，將提取物進行熒光PCR擴曾反應，需要70-80分鍾。

③ 核酸檢測具體步驟

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方檔仔態法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片戚粗段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

(3)核酸提取儀器怎麼啟動擴展閱讀：

檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，

包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；

如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。

每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能行源確定本產品的陽性判斷值。

④ 全自動核酸提取儀第一步到2分組5秒時機器故障不運行

全六種黑山提起你第一不到兩分紙五秒系機器故障不運動不運行應該他害羞時間短了直接同意點就回運行

⑤ 全自動核酸提取儀程序設置都是統一的嗎

全自動核酸提取儀程序設置都是統一的。全自動核酸虛飢提取儀應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸提取工作，基於磁珠法原理，採用旋轉式核酸提取技術。廣泛應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全鄭譽譽、法醫學鑒定、環境喊段微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

⑥ pcr核酸檢測是什麼意思方法及步驟

核酸檢測是目前全球用來對是否攜帶新冠病毒進行確定的一種有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗體血清lgm進行參考。但是根據最新的新加坡入境要求是進行pcr核酸檢測，那麼pcr核酸檢測是什麼意思呢？

pcr核酸檢測是什麼意思

PCR的意思是聚合酶鏈式反應，能夠用來擴增DNA，從而將微量的DNA擴增到能夠檢測的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要採用這個方法進行檢測。所以PCR並不是進行的檢查，而是檢測DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量，用的就是這一種方法。檢查DNA的目的，一方面是可以診斷疾病，如果連病原體的DNA都能檢測到，就說明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復制的多少，從而判斷病情嚴重程度或者治療效果。

pcr核酸檢測方法與步驟

進行核酸檢驗，需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。

核酸檢測的第一步就是採集人體分泌物，用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處。

第二步醫務人員進行留樣，將試子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋。

第三部要將樣本放入密閉袋中，保存好並及時送檢。

第四步將樣本送進實驗室，提取核酸。

第五步，將提取物進行熒光PCR擴增反應。

核酸是什麼

核酸(nucleicacid)，是一類由核苷酸(nucleotide)構成的生物大分子，分為核糖核酸(ribonucleic
acid，宴前者RNA)和脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid，DNA)兩類，其中RNA多為單鏈結構，DNA多為雙鏈結構。除朊病毒(prion)外，核酸是構成生命所必需的生物大分子，其主要作用是構成生命體的遺傳信息載體，除此之外，還有部分核酸可作為及參與構成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子機器
。

核酸檢測是什麼

核酸檢測顧名思義就是針對核酸開展檢測。

核酸檢測有何獨特的優勢呢?為何能作為新冠病毒確診的「金標准」呢?

其實每一種檢測方法都有其擅長的應用場景。以病毒檢測為例，通常的免疫學檢測方法(膠體金、ELISA、化學發光等)的檢測對象是病毒的抗原或抗體，相當於「側面描繪」。由於從感染到可檢測存在一個時間窗口期，因此免疫學檢測方法一般不合適作為早期診斷。

假陽性與假陰性

1、假陽性

假陽性通常比較少。一般實驗室人員操作不當會導致樣本間交叉污染或擴增產物的遺留污染，該種情況下可能會導致假陽性。

不過假陽性可以通過嚴格控制檢測流程、以及執行若干個陰性樣本隨機參與檢測的策略而有效規避。

2、假陰性

在這里需要說明的是，PCR檢測的假陰性與臨床的假陰性實際上不是一個概念。

以網路上激烈討論的新冠病毒的診斷為例，臨床假陰性是指臨床症狀和影像學高度疑似被感染、但PCR檢測卻多次或始終為陰性的情況;而PCR檢測假陰性是指所採集樣本中存在足夠量的新型冠狀病毒但卻沒有檢出悔簡的情況。

避免核酸檢測的假陰性，主要需要解決：(1)被感染者的細胞中有足量的病毒、(2)採集樣本中可以採集到含有病毒的細胞、以及(3)檢測出樣本中的病毒這三個環節。

其中PCR試劑盒的技術參數優劣主要影響第三個檢測環節。

僅針對第三個檢測環節，若樣本中病毒數量低於一個程度(低於最低檢測限)，PCR試劑盒就無法檢出。從這個角度看，PCR檢測的假陰性是無法完全避免的。這也是為何需要補充開發病毒的特異抗體檢測的原因所在。

沈陽PCR核酸檢測實驗室

實驗室建設堅持高標准、嚴要求，嚴格按照國家《醫學生物安全二級實驗室建築技術標准》進行建設，建設面積100餘平方米，分為試劑貯存和准備區、標本制備與提取區、擴增和產物分析區三個區域。實驗室內配置全自動核酸提取儀、實時熒光定量PCR儀、擴增儀、高壓滅菌器、B2型生物安全櫃、超凈工作台、超低溫冰箱等儀器，消毒和防護設施齊全，符合相關生物實驗室安全標准。為防止實驗室外的區域被污染，實驗室的氣壓均為負壓，有效降低感染風險。此外，實驗室配備了污水處理系統，達到了廢液的合理排放和處理。

*目前我國多地區建設了PCR核酸檢測實驗室用以進行新冠病毒核酸檢測

⑦ 全自動旋轉式核酸提取儀的工作原理是什麼

以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高pH值下與核酸分離的原理，

⑧ 從核酸采樣到出結果，中間需要經歷哪些過程

01、采樣

首先我們得到指定的地點去進行核酸的采樣，在做核酸采樣時需要注意排隊的間距，一般間距都要達到一米以上。現在正常情況下都是採集咽拭子，但情況特殊的時候也會直接捅鼻子。

06、上機檢測

檢測的時間大概是在一個小時到兩個小時之間，儀器啟動擴增程序之後，不可以中途停下來添加新的樣本。所以一般都是要等到同一批的結果擴增結束之後，才可以進行下一批的擴增。當擴增結束之後，檢測結果自然也就出來了，這個時候我們就可以取到自己的核酸檢測報告。

⑨ 核酸提取儀的主要步驟及方法

1. 環境溫度：5℃～40℃；環境相對濕度；電壓：50%~80%范圍：100～240Vac，50/60 Hz。
2. 將儀器放在水平實驗台上。
3. 放置儀器時應保證儀器周圍10cm內無障礙物；多台儀器同時使用時，每台儀器之間的距離應不小於50cm。
4. 儀器主機通電之前，必須先用六角扳手取下磁棒架固定螺絲，否則通電運行將會損壞儀器。
5. 96孔板和磁力棒套的安裝必須與對應的卡槽完全契合。
6. 請勿將該儀器安放在過度潮濕、高溫或陽光直射等溫度變化劇烈的區域，這可能會影響儀器的性能。
7. 請勿和其它大功率器件如離心機、空調等共用同一電源插座以免電源電壓波動影響系統運行。
8. 請將適配器連接到儀器，把適配器與電源插座相連，並打開儀器開關。
9. 請勿在有潛在有害液體或氣體的環境中操作該儀器。
10. 本儀器詳細操作步驟，請參閱以下的說明。
1.5注意事項
1. 儀器應放在濕度低、灰塵少並遠離水源的地方，室內應通風良好，儀器後方勿緊靠牆壁或堆放其他物品，以免影響散熱。
2. 實驗運行過程中禁止直接關閉電源開關。如果需要提前停止實驗，請先在觸屏軟體上點擊停止運行並確認後再關閉電源。
3. 裂解孔、洗滌孔和洗脫孔的樣本體積應在50μL-1000μL，避免體積過多，溢出孔位。
4. 機器運行及測試進行時，請勿觸摸加熱條，以免燙傷。
5. 紫外燈開啟滅菌時，請勿直視紫外光。
6. 移動儀器之前，請先切斷電源，再用螺釘固定磁棒架。
7. 儀器長期不使用時，請拔掉插頭，並用軟布或塑料袋覆蓋儀器，以防止灰塵進入。
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BioG全自動核酸提取儀

⑩ 核酸提取儀原理

1. 根據儀器型號大小不同劃分 [1] 
1) 自動液體工作站
自動液體工作站是功能非常強大的設備，液體分液、吸液等自動完成，甚至能通過整合擴增、檢測等功能，實現標本提取、擴增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用，不太適合常規實驗室提取核酸，一般都應用在單一類標本並且一次提取標本量非常大(至少96個，一般幾百個)的實驗需求上。自動工作站的平台建立及平台的運作，需要比較大的資金。
2) 小型自動核酸提取儀
小型的自動化儀器是通過運行結構的特殊性來達到自動提取核酸的目的，可以在任何實驗室得到應用。
2. 根據提取原理不同劃分
1) 採用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要採用離心機和自動移液裝置相結合的方法，通量一般在1-12個樣本，操作時間和手工提取差不多，並不能提高實際工作效率，且價格昂貴，不同型號儀器的耗材也不能通用，僅適合經費充足的大型實驗室使用。
2) 採用磁珠法的儀器
以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高PH值下與核酸分離的原理，再通過移動磁珠或轉移液體來實現核酸的整個提取純化過程。由於其原理的獨特性，所以可設計成很多種通量，既可以單管提取，也可以提取8-96個樣本，且其操作簡單快捷，提取96個樣本僅需30-45min，大大提高了實驗效率，且成本低廉，因而可以在不同實驗室使用，是目前市場上的主流儀器。

磁珠法核酸提取儀的基本原理
磁珠法核酸提取儀一般分為抽吸法和磁棒法兩種 [2]  ：
1. 抽吸法，也叫移液法，是通過固定磁珠、轉移液體來實現核酸的提取，一般通過操作系統控制機械臂來實現轉移。提取過程如下:
1) 裂解：在樣品中加入裂解液，通過機械運動及加熱實現反應液的混勻及充分反應，細胞裂解，釋放核酸。
2) 吸附：在樣品裂解液中加入磁珠，充分混勻，利用磁珠在高鹽低PH值下對核酸具有很強親和力的特點，吸附核酸，在外加磁場作用下，磁珠與溶液分離，利用吸頭將液體移出棄至廢液槽，吸頭棄掉。
3) 洗滌：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗滌緩沖液，充分混勻，去除雜質，在外加磁場作用下，將液體移出。
4) 洗脫：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗脫緩沖液，充分混勻，結合的核酸即與磁珠分離，從而得到純化的核酸。