❶ 高效液相色譜儀器使用方法
一、脫氣
流動相脫氣對於避免HPLC系統出問題，順利得到一個理想的數據是一個很有效的措施。HPLC系統內是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產生很大的力量，由於氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低於預先設定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉。
當一個氣泡通過輸液泵時，由於系統壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統壓力又恢復到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現，在色譜圖上會出現不規律的毛刺。為解決這個問題，有些儀器公司設計一個反壓控制器，這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動相中直到它們流出檢測器。當然，這個壓力不能超過流通池所能承受的壓力極限，否則可能損壞檢測器。
紫外/可見光（UV/VIS）檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進入並通過流通池的徵兆。有些檢測器對空氣的存在也非常敏感，但表現出的徵兆與UV/VIS不同，例如有報導說，當使用熒光（FL）檢測器時，流動相中溶解氧的存在可能會使一些化合物失去熒光性。此外，對於利用待測物質在電極表面發生氧化還原反應引起電流變化而進行檢測的電化學（EC）檢測器，對流動相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時還會導致保留時間不重現。
所以，必須注意消除流動相中的空氣，並且還應避免空氣由管路（如PTFE管）滲透進流動相中。
如果適當地關注在使用之前脫去流動相中溶解進的空氣，上述這些問題均能避免，或把影響降至最低。常用的脫氣方法有如下幾種：
1、吹氦脫氣法：利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa壓力下，以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。採用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國內氦氣價格較高，很少有實驗室採用此方法。
2、 加熱迴流法：此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、 抽真空脫氣法：此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由於真空脫氣會使混合溶劑組成發生變化，從而影響到實驗的重現性，因此多用於單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法：將欲脫氣的流動相置於超聲波清洗器中，用超聲波震盪10～20min。此法的脫氣效果zui差。
5、 在線脫氣法：現在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應與公司確認。
二、過濾
任何顆粒物進入HPLC系統後都會在柱子入口端被篩板擋住，zui後的結果是將柱子堵塞，表現出的特徵是系統壓力增加並使色譜峰變形。因此，要採取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，並提高數據的可靠性。在HPLC系統中，顆粒物的主要來源有三個途徑：流動相、被測樣品和儀器系統部件的磨損物。
1、流動相如果流動相均由高效液相色譜級溶劑組成，流動相沒有必要過濾。這是因為高效液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈、甲醇等，在製造的工藝過程中都已經過了0.2 µm微孔濾膜過濾。同樣的，無論你是買的HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統制備的水，最後一步也是通過0.2 µm微孔濾膜。
然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如磷酸鹽，流動相過濾將是必要的一個步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質，例如在蓋試劑瓶的塑料內蓋時，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會產生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能完全溶解了，但是少量雜質顆粒存在於流動相中成為殘渣。
流動相通過0.45 µm微孔濾膜過濾對於從流動相中除去所有顆粒物是一個有效方法。0.2 µm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個應用而言並不比0.45µm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會更慢，特別是當實驗室使用的試劑和水的質量不太好時。建議實驗室在編寫制定他們流動相制備標准操作程序（SOPs）時規定，可以借鑒國際上同類實驗室的規定，即：
流動相制備僅採用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有流動相組成在使用前必須過濾。
在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端入口採用下沉式過濾器（常見材質有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規格為≥10 µm的微孔物質，所以它不能取代流動相過濾步驟，但是它能除去系統中的塵土並保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2、被測樣品液相系統中的第二個顆粒物來源是被測樣品。一些實驗室在將他們的樣品放置在自動進樣器盤（或手動進樣）以前，所有樣品都先通過一個0.45 µm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。
但是這個過程也有一點需要關註：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過濾後液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？
這個問題一般需要通過實驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過濾器的使用是一種消耗，每個過濾器的價格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時，由於基質大多比較復雜，所以過濾這步已成為不可或缺的一步。在實際分析工作中，一般檢測每一組樣品會帶一個外標、一個添加回收或是質控樣品，所以，只要zui終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統誤差而忽略。
3、儀器系統部件的磨損物最後，在HPLC系統中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關於輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
一種建議認為，在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實驗室應基於上述觀點制定定期預防性維護計劃。該觀點認為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。
另一種建議則認為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以後容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
兩種說法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。
自動進樣器旋轉軸的密封隨著使用時間也會磨損，但是在我的經驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動進樣器系統有計數進樣閥轉動次數的功能，你可以設定一個警鈴當預設閥轉動次數已達到時提醒你。
曾有一種說法，進樣器最多轉動20,000次，這僅僅是進樣10000個；但這似乎不是實驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們的實際使用壽命會更長。旋轉軸密封磨損後會滲液，比較明顯的特徵是同一樣品多次進樣後，峰面積值差別比較大（RSD>5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動相中，加速對這些部件的損傷。
此外，如果你日常運行的流動相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會更快。無論顆粒物源於何物，實驗時都要將其除去。推薦在HPLC系統中採用一個0.45或0.5 µm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如採用一個玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鍾就可更換）。若採用在線過濾，HPLC系統檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以後沖洗幾分鍾系統將恢復到原來的壓力值。
三、沖洗
使HPLC系統良好運行的第三個要點是保持系統的清潔。你需要關注流動相流經該系統的所有地方，對於這些地方經常性的沖洗，將使你的系統保持在「Ready」狀態。
1、流動相儲液瓶首先要經常清洗流動相儲液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周，而有機溶劑使用時間不要超過一個月。
也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿，直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑（流動相組成發生變化）時，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝於將溶劑用完。但這對於分析樣品量少的實驗室而言似乎有些浪費。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換，每周瓶子還應該用異丙醇清洗一次。有的實驗室則在水裡加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長。這些做法看起來有些繁瑣，但卻能起到「磨刀不誤砍柴工」作用。
2、泵接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鍾後就停泵，特別是當流動相中含有難揮發的緩沖液（如磷酸鹽）時。如果儀器不是連續使用，當流動相蒸發時，難揮發物就會粘在活塞密封墊的表面，難揮發物將形成固形物沉澱。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無論使用長短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發緩沖鹽則建議沖洗的時間應該更長些。
3、自動進樣器自動進樣器也要按規定清洗。現在的儀器多配有自動進樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換、補充沖洗液即可。自動進樣器用的洗滌液也要採用與流動相相同的方式處理，並根據溶劑的有效期和規定，清洗儲液瓶或更換洗滌液。現在的自動進樣器設置、操作都很簡單，如果時間允許（特別是利用夜間運行），每次分析完後設置進1、2針純溶劑（如甲醇、乙腈），也是一個好做法。
4、色譜柱對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現是：運行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個問題的zui有效方法就是在每一批樣品分析結束後或准備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據柱子的說明書和性質而定。
5、檢測器如果是正常使用，檢測器將依據其性質並按照說明書規定進行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統進行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進行了清洗。但是蒸發光檢測器或質譜儀則需要按照說明書進行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發污染物沉積，如質譜儀離子源的噴針、毛細管、錐孔板、預四極等部件，因而需要定期清洗。而且對聯有這些檢測器的系統沖洗時，最好與這些檢測器斷開，以減少對檢測器的污染。
總之，實驗室日常使用的液相色譜儀要是能認真做好這三項工作——脫氣、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預防性維護，使用時就會感到比較順手。當然，在實際操作時遇到的問題並沒有這么簡單，但這三個良好習慣將是正確操作、使用HPLC系統的基礎。答案來自
❷ 如何清洗氮吹儀
琪摩 氮吹儀製造商為您解答：
建議用戶參照以下方式進行清洗維護。
1、加熱介質：最好使用蒸餾水和去離子水，這將防止在水浴壁上畢坦產生水垢。注意不要使用有機溶劑作加熱介質。
2、除藻劑：不加熱時，在水浴的水中加以除藻劑，可防止生物污染。不應使用酸性除藻劑，並應確保所用除藻劑不會影響所要處理的樣品。
3、換水：水浴中的水建議一周一換，最長不超過一月。
4、酸性桐數虛環境：當接觸或暴露於酸性材料、蒸局燃汽或樣品後，應當立刻清洗，用適度的碳酸氫鈉溶液或其它相似溶液中和，再用清水沖洗。長時間接觸酸性物質，將會損壞儀器。如必須長時間接觸酸性物質，則應採取保護措施。
5、針頭：每次使用完針後都應清洗，盡量減少針的污染。可使用有機溶劑沖洗、高壓消毒和索氏提取等技術。
6、浸沒：浴底耐水但不防水。絕不能將水浴浸泡在任何液體中，或放置在可能發生浸泡的地方。
❸ 離子源如何清洗
離子源的清洗方法為：對金屬的清洗和非金屬部件的清洗。對金屬部件來說，首先用棉簽濕水後沾上專門的氧蘆搏化鋁粉（菲林跟有配）來摩擦金屬部件。注意不要讓氧化鋁粉乾燥！氧化鋁粉洗完敏櫻後，用水浸泡金屬部件，然後超聲15分鍾，然後把水倒掉，用丙酮浸泡，再超聲15分鍾，烘乾就可。對於非金屬部件，就免掉吵聲這一步驟。
離子源是使中性原子或分子電離，並從中引出離子束流的裝置。它是各種陪拿祥類型的離子加速器、質譜儀、電磁同位素分離器、離子注入機、離子束刻蝕裝置、離子推進器以及受控聚變裝置中的中性束注入器等設備的不可缺少的部件。
❹ 大家實驗室的液相和質譜等精密儀器是如何除塵
儀器中的電路板或風扇積塵較重，
電吹風和吸塵器是解決不了問題的，
可以打開儀器外殼，用高壓氮氣吹。
❺ 電感耦合等離子體質譜儀的維護和保養
9.3.6.1 進樣系統(蠕動泵、霧化器、霧室、炬管)
試樣引入蠕動泵管的好壞直接影響信號的穩定性，所以應經常檢查、定期更換。建議一星期更換一次(工作時間大約為40 h)。排廢液管使用期限可能長一些，也必須經常檢查，以防排廢不暢，引起霧室內廢液聚集，影響信號並最終導致等離子體熄火。同時，如果蠕動泵管老化破裂，酸溶液會將其腐蝕。儀器運行期間可以觀察進樣管和排廢管內的氣泡以判斷進出是否正常。如果噴入高濃度的有機溶劑，應該換成有機溶劑專用泵管。分析完畢，切記要松開泵管。
霧化器和霧化室應定期清洗。注意同心氣動霧化器最好不要採用超聲波清洗或放在玻璃燒杯中煮沸清洗，以免損壞霧化器內的注入管。交叉氣動霧化器可以採用超聲波清洗，清洗液可根據情況採用一般清洗玻璃器皿的洗液，或一定濃度的熱王水或硝酸、鹽酸浸泡清洗，最後用去離子水充分洗凈。注意不要讓霧室的「O」形密封環接觸到酸液。如霧化室內壁出現掛水珠現象，一般可連續1min噴入1%的氫氟酸，但剛噴完後不能立刻分析硼、硅等元素。同心霧化器容易出現堵塞現象，儀器運行期間注意觀察內標元素的信號，如信號明顯降低，則可能是漏氣或霧化器損壞。
避免霧化器堵塞的途徑有：①在氬氣管路中安裝一個過濾裝置，在線過濾氬氣瓶或氣路中可能存在的顆粒物；②過濾有懸浮物的試樣溶液；③清洗霧化器，可用3%～5%的王水在線清洗。
炬管也應定期清洗，如炬管是可拆卸的，可將內管取下，用熱王水浸泡或煮沸，最後用去離子水充分清洗，炬管洗凈後可自然晾乾或用吹風機吹乾後使用。清洗時間可根據潔凈程度而定。如炬管內管的嘴部明顯燒蝕，則應該更換，否則鈉和其他一些元素的背景值會增大。可採用放大鏡檢查霧化器的內管出口處是否損壞，如發現任何細小的損壞，都必須更換，否則影響試樣霧化效率和信號的穩定性。
9.3.6.2 介面(采樣錐和截取錐)
采樣錐和截取錐的條件影響信號的靈敏度和背景水平。注意盡量不要將高酸度或高鹽度試樣溶液引入等離子體，要保證錐基座和水冷板之間的熱接觸良好。若想延長錐的壽命，必須小心選擇酸的類型和酸度。如果錐的表面出現凹痕或不光滑，則易於產生氧化物粒子，所以介面錐必須定期清洗，清洗周期取決於運行時間以及分析試樣的含鹽量程度。監測第一級真空可得知錐孔情況，如果工作量較大，最好每日檢查清洗。
采樣錐和截取錐的清洗方法有以下幾種：①採用超聲波在大約5%的洗滌液中清洗15min，然後再用去離子水超聲清洗15min；②采樣錐的正反表面都應使用專用的金屬拋光細研磨粉與去離子水混合製成的糊劑，用一塊軟布清洗，再用水沖洗，然後在HNO3(2∶98)中超聲清洗2min，用去離子水充分洗凈，最後用丙酮或空氣使其乾燥。如果錐明顯損壞，則必須更換。應避免使用任何粗糙的研磨材料或稀酸來清洗錐，因為它們將在采樣錐表面產生凹窩和劃痕。錐表面的變形將引起采樣過程中等離子體氣流的散射和導致高水平干擾離子的生成。另外，一些物質更容易沉積在采樣錐表面。除了錐孔本身以外，應清洗的最重要的區域是靠近錐孔處的錐的內表面，這也是最難清洗的區域，而恰恰是在該區域中，被采樣的等離子體通過錐孔後形成自由噴射。因此，錐表面必須盡可能保持干凈和平滑，使氣流不致散射。
9.3.6.3 離子透鏡系統
離子透鏡系統應由專業維修人員維修檢查。如果儀器運行負荷很大，最好半年查一次，如有需要，則需進行清洗。提取透鏡最好每月檢查並清洗。
9.3.6.4 檢測器
電子倍增器的使用壽命通常是有限的，它取決於總的累積放電，即輸入離子增益。超過這個壽命，內表塗層耗盡，電子倍增器則需更換。所以，盡管新型檢測器可以測量高濃度信號，但為了保護檢測器的壽命，實際應用中要對高濃度試樣盡可能採取稀釋或其他方法，以盡量避免電子倍增器長時間測量高強度信號。
9.3.6.5 真空系統
前級真空系統的維護包括定期觀察油麵、定期更換泵油等。機械泵的泵油一般由專業維修人員視情況更換。一般是觀察泵油的顏色，如為深黃色則需更換。需經常檢查渦輪分子泵的冷卻系統。此外，正確的開機、停機步驟，避免誤操作，也是保證良好真空的必要條件。盡量維持真空系統連續運行，減少頻繁停機可減少發生故障的頻率。除非長期停運，否則應保持儀器的真空狀態。
9.3.6.6 冷卻水系統
冷卻水系統非常重要，一般採用去離子水，每日檢查冷卻水進出是否通暢。定期檢查液面，定期更換水。
9.3.6.7 環境(溫度、濕度、清潔度)
放置儀器的房間最好採用超凈實驗室設計，保持室內清潔。一般情況下，溫度保持在21.5℃左右，濕度為40%～70%。濕度大的季節，必須採用除濕機去濕。對於超純物質分析以及超痕量元素分析，要求在潔凈間處理和分析試樣，分析人員必須穿超凈服，佩戴帽子、一次性手套和口罩。
9.3.6.8 儀器的定期維護
儀器的正確使用和定期維護是延長其各部件的使用壽命，以及使其分析性能最佳化的重要因素。
❻ 質譜等待沖洗什麼意思
您好，質譜等待沖洗是一種化學分析技術，它可以用來分析物質的組成成分，以及每個成陸賀棗分的含量。它是通過將物質分解為其原子或分子組成，然後將這些原子或分子放入一個質譜儀中，利用質譜儀的電離質譜分析技術，來測定物質中每種原子或分子的含量。質譜等早拆待沖洗是指在質拍握譜分析過程中，為了清除前一次分析的殘留物，需要將質譜儀內的殘留物清洗干凈，然後再進行下一次分析。
❼ 氣相質譜儀清洗離子源後真空度是不是難降
不是。採用正確的清洗步驟不會存在真空度難降的問題，步驟如下。
1、首先進行離子源操作時需要戴清潔的手套，戴好手套後，停止真空，擰松真空艙旋鈕，拉開艙門，用鑷子拔下排斥極擋片，把導線移到左邊，把離子源安裝桿放在離子源上閉茄坦，用一字螺絲刀把離子源的兩個固定螺絲擰松一圈，再用鑷子把離子源的固定卡具先向右再向下移動到固定位置，用一字螺絲刀把兩個固定螺絲完全擰開，用安裝桿取出離子源。
2、其次把離子源放在潔凈的紙上，取下安裝桿，分開排斥極套裝和離子源盒。用研磨砂紙反復擦拭離子源盒的內部和兩側圓孔，擦拭排斥極的平面、側邊的圓周面，用洗耳球清除表面沙塵後，在丙酮溶液中超聲清洗30min，然後在400℃的馬弗爐中老化一小時。組裝排斥極套裝，將排斥極安裝在離子源盒上，把離子源安裝桿擰緊到離子源盒上。
3、最後把固定好的離子源安裝回儀器腔體中，先把離子源兩個固定螺絲擰緊，再擰松一圈，用鑷子按先向上再向左的順序把離子源卡具撥回，擰緊兩個固定螺母，卸下離子源安裝桿。用鑷子把導線裝回排斥極，確認排斥極導線接觸好，排斥極導線與其轎桐他導線不能納襪相互接觸，確認離子源卡具在初始位置，擰緊固定離子源的螺絲。關閉艙門，儀器正常啟動後，在工作站中，重置消耗品對話框，離子源使用時間清零。
❽ 質譜儀真空泵進水了如何處理
有點好奇，為什麼你覺得你隱搭並的泵漏水了？一進一出都是有管子連著的，不應該會從系統以外有水進去。你漏水的地灶跡方就在泵上面嗎？我覺得你可以先查一下電源有沒有問題。另外如果真的有水進去了，一點點水影響不大，很多的話就需要換掉泵油了枝激。
❾ 高效液相色譜法測糖精鈉最後儀器怎麼洗滌
轉載：《分析測試網路網》
清洗硅膠基質的色譜柱
恢復一根已受污染的高效液相色譜柱的關鍵在於了解污染物的性質，然後尋找一種合適的溶劑將其去除。如果污染物是由於一些強保留物質的多次進樣積聚而產生，一個除去這些污染物的簡單的沖洗過程往往會使色譜柱恢復性能。有時，在經過了等度操作之後，用20個柱體積的90％～100％的溶劑B（二元反相體系中較強的溶劑）將會除去這些污染物。（表二列出了各種型號的高效液相色譜柱的柱體積，所以讀者可以很輕易地確定色譜柱的沖洗體積。）例如，脂質類的化合物可以使用一些非水性的溶劑來去除，如甲醇、乙睛、四氫呋喃。如果你正在使用含水的緩沖流動相，則千萬不能將流動相直接跳到強溶劑中。將流動相猛然間改到高比例有機相的舉動會導致高效液相色譜流動體系的緩沖沉澱，這將會造成更加嚴重的問題，如使篩板堵塞，介面管路堵塞，泵的密封墊失效，刮傷泵的柱塞桿，使進樣閥轉子失靈。相反，應使用非緩沖的流動相來沖洗色譜柱（就是用水來代替緩沖液）。在經過了5～10個柱體積的非緩沖溶劑沖洗之後才能允許較強的溶劑流經色譜柱。
有時，流動相中的強溶劑組分是不能充分去除色譜柱中的污染物的。必須另外使用一種更強的溶劑或一系列的溶劑才能清洗色譜柱。假如污染物是非生物性的，則使用者可以通過一種或更多的其他有機溶劑來去除不需要的化合物。可以使用許多種的溶劑和溶劑組合方式。訪問一些色譜柱生產廠商的網站可以瀏覽到一些推薦使用的溶劑系統。
一般來說，所有的清洗都會遵循一個相似的模式。清洗過程中的溶劑濃度是增加的，通常最後都是使用一些非極性的溶劑（例如：乙酸乙酯，乃至碳氫化合物），它將會有助於溶解一些脂質類和油類化合物。重要的是要確保這一系列的每個溶劑都能與所使用的下一個溶劑互溶。一個清洗循環的結論是，在回到初始的流動相系統之前，可通過中間的可互溶的溶劑反向走。例如，異丙醇就是這個中間步驟的一個極好的溶劑，因為它能夠同有機溶劑互溶，如正己烷和二氯甲烷，而且同樣也能夠和水相溶劑互溶。因為異丙醇有很大的粘度，所以必須確保清洗時流速不能太高，否則會引起泵的壓力過載。同樣，如果使用了紫外檢測器，則需避免使用在紫外光譜區有吸收的溶劑，因為這樣會需要大量的清洗溶劑才能去除所有吸收的溶劑以得到一個穩定的基線。對於典型的鍵合硅色譜柱和無緩沖液的流動相的一個推薦使用的清洗系統就是：
l 100％甲醇；
l 100％乙睛；
l 75％乙睛——25％異丙醇；
l 100％異丙醇；
l 100％二氯甲烷；
l 100％正己烷；
當使用了二氯甲烷或正己烷作為沖洗溶劑後，由於溶劑的不互溶性，需要先用異丙醇沖洗色譜柱，而後才能使用含水的流動相。沖洗色譜柱的清洗溶劑的體積最小為柱體積的十倍。對於一根250mm×4.6mm的色譜柱，分析者可以使用經典的1～2mL/min的高效液相色譜流量。為了要回到原來的流動相，色譜工作者可以跳過顛倒使用該系列的型孝清洗溶劑。推薦使用異丙醇為中間的清洗溶劑，然後用不含緩沖液的流動相沖洗，最後再用最初使用的流動相進行沖洗。四氫呋喃是另一個使用廣泛的溶劑，它可以被用來清洗受污染的色譜柱。如果使用者懷疑色譜柱受到了比較嚴重的污染，則可以用二甲亞碸或二甲基甲醯胺與水以50：50的比例，以小於0.5mL/min的流速進行清洗。成功的反向液相色譜柱的再生需要花費相當多的時間，使用溶劑進行沖洗可以設置梯度程序來進行通宵操作。*
在清洗過程中產生了是否應該將色譜柱顛倒過來沖洗的問題。因為大部分的強保留的污染物都會留在色譜柱的前端，將色譜柱顛倒過來清洗會減少已被溶解的污染物流出色譜柱的遷移距離純啟。就填料層的穩定性而言，大部分的現代高效液相色譜柱都是用比普通操作壓要高得多的壓力裝填的；因此，色譜柱的填料層應該不會受到反向的流速的干擾。然而，如做租如果色譜柱頂端的篩板的空隙要比底部的來得大，這種反向的方式則是有害的。比如說，如果底部篩板的空隙為2µm，則足夠容納裝填有平均填料粒徑為5µm的色譜柱。（含有粒徑5±2µm的尺寸分布）。然而生產商往往在色譜柱的頂端安裝空隙度比較大的篩板，以防止其被樣品或流動相顆粒所堵塞。如果這種篩板的空隙度要比粒徑大小分布的最小微粒大，部分填料會經篩板而流出色譜柱，這樣就會產生中空。如果色譜柱上有一個箭頭來提醒色譜柱的流向，我覺得應該在反向使用色譜柱之前參考說明使用書，瀏覽生產商的網站，或與技術支持組進行商討，以確定這是否是一個安全的舉動。無論你是否將色譜柱反向使用，最好要將色譜柱同高效液相色譜檢測器斷開，使污染物或者顆粒留在篩板上而不流經檢測池，因為這些物質會污染檢測池。
清洗污染的反相色譜柱的頻率依懶於有多少不明物質被注射到柱子中，因為反相色譜柱有時在解析度損失和外來物質的洗脫前可以忍受大量的污染物, 使用者往往等到他們觀察到一些異常現象才對柱子進行清洗。然而，長時間累積的污染物會使色譜柱的清洗工作變得更難。正因為如此，如果你知道自己的色譜柱很容易受到臟的樣品基體的污染時，我建議定期清洗你的色譜柱。清洗的次數越多，清洗條件也就越簡單。
反相硅膠基質色譜柱中殘留蛋白質的清洗
如果一些如血漿、血清的生物物質留在了反相液相色譜柱上，色譜工作者必須使用一些不同的清洗程序。在大部分情況下，一些比較純的有機試劑如乙睛或甲醇是不能溶解肽和蛋白質的，所以它們不能有效清洗反相液相色譜柱。然而加入了緩沖液、酸或者一些離子對試劑的混合有機溶劑能夠有效清洗這些物質。起初，可以嘗試含比較高濃度的溶劑B的流動相來沖洗色譜柱。
Freiser和他的同事（4）發現來回反復地梯度洗脫，使用三氟乙酸的水溶液和三氟乙酸—正丁醇可以使污染的反相液相色譜柱再生。Bhadway和Day（5）建議進樣100µL的三氟乙醇到250mm×4.6mm色譜柱可以達到清洗的目的。如果這些方案都失敗了的話，推薦使用Cunico和他的同事們（6）的強洗脫液和溶解性的試劑（見表三）。然而，在用這些試劑沖洗色譜柱之前，應該參考色譜柱的手冊，或和生產商進行商議，以確保其不會破壞色譜柱的填料。硅鍵合色譜柱的填料往往能夠與這些試劑共存，而聚合物色譜柱可能會因為與特定溶劑結合而使填料產生膨脹或收縮，從而影響到色譜柱的性能。
表三 用於HPLC反相色譜柱蛋白質物質除去的清洗溶劑
溶劑 組成
乙酸 1%的水溶液
三氟乙酸 1%的水溶液
0.1%三氟乙酸-異丙醇 40：60（V：V）（粘稠的，通常降低流速）
TEA-異丙醇 40：60（V：V）（在三乙胺混合前用0.25N的磷酸調節pH到2.5）
尿素或胍的水溶液 5-8M（調節pH到6-8）
NaCl，Na3PO4，Na2SO4水溶液 0.5-1.0M (Na3PO4 pH 7.0)
DMSO-水 或 DMF-水 50：50（V：V）
來自參考文獻6。
如果使用了早期的一系列溶劑，則必須確保表三中的溶劑與這個系列中的溶劑都是互溶的。異丙醇是一個良好的中間沖洗溶劑。在體系中的清洗體積最少為20個柱體積。由於一些溶劑清洗系統具有一定的粘滯性，所以必須調整沖洗流速以避免產生超壓。在清洗完一根含有胍和尿素的色譜柱後，需要用至少40～50柱體積的色譜級的水進行沖洗。
對於反相高效液相色譜柱來說使用一些如十二烷基磺酸鈉（SDS）和Triton的清洗劑來清洗是不妥的，因為這些化合物會強烈地吸附在硅膠基質的表面而難以去除。這些試劑會影響填料表層，改變填料的性質。然而，分離小組的研究發現，肽合成過程中保護基團和凈化劑產物對柱子的污染，可以通過在流動相中注射500µL的1％SDS溶液以1mL/min的流速進行沖洗（7）。如果接下來使用含0.1％(V/V)三氟乙酸的 5％～95％乙睛的梯度，在開始的條件下進行平衡，多肽的分離效果則可恢復。
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