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測定病毒活性的儀器是什麼

發布時間:2023-04-07 13:07:38

Ⅰ 如何選擇酶標儀

2020年,新冠肺炎全球爆發,常規的核酸檢測判別是否感染新冠病毒,血清抗體檢測則可以揭示中國人群新冠病毒的感染情況,隨著疫情防控常態化,大規模血清檢測對於監控人群免疫情況十分必要。如此看來,作為酶聯免疫檢測的核心儀器,酶標儀的采購情況被業內看好。

酶標儀作為一個常用的儀器,其基本功能不外乎一個比色測定,與比色計所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟體功能等方面的差異,當然全自動酶免疫分析系統還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。那麼,實驗室在選購酶標儀的時候都要注意哪些關鍵信息呢?

濾光系統

酶標儀最簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標儀裡面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵並不能同時完成同一個檢測,本質上還只是把濾片和光柵放在了一起,並沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。光柵型濾光系統具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優點。當然,濾光片系統也有其顯著的優勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統,在化學發光檢測中光線的透過率高。目前,濾光片系統應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。

測定波長

一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有最大吸收,當pH值降為L 0時,最大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什麼情況下使用單或雙波長檢測。所謂的「單波長」就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而「雙波長」則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀最後列印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自於板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設空白孔。

測定的吸光度范圍

通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0~2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0~2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,並且能保持很好的精密度與線性。因此,對於酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。

光學系統

酶標儀的光學系統採用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和准確度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

檢測速度

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快,有利於提高檢測的精密度,即避免由於測定過程中,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非常快,通常在數秒鍾內。

震板功能

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振盪混勻,使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振盪幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑後,可不必振盪混勻,直接放人酶標儀上測定即可。

溫育功能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,溫育功能只是酶標儀的一個附加功能,是否具有並不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇,則可根據自己實驗室的條件及需要來決定。

軟體功能

軟體功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等數據的統計分析並報告結果的功能。軟體功能是中高檔酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬體方面區別不大,則軟體就成為判定酶標儀優劣的惟一指標。對於用戶來說,好的軟體功能,對實際工作會有較大的幫助。ELISA定性測定,酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定「灰區」(即指測定吸光度處於cut—off周圍的一定區域,此區域內結果應為「可疑」)的統計計算功能,不但方便了實驗室工作人員,而且在某些特定的情況下,有很高的實用價值。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟體功能中,最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用於微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。此外,酶標儀兼做酶標動力學、凝集反應測定所需的軟體是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由於此類軟體一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實驗室特殊需要,就不必強求這種軟體功能。

語言界面

通常進口的中高檔酶標儀人機對話多採用英文。這對於某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難,從而難以最大限度地發揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標儀採用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術人員的使用。綜上所述,盡管酶標儀的發展極為快速,種類繁多,功能也不斷加強,但其最根本的功用是不變的,即比色測定。大凡比色測定,其基本要求就是在一定吸光度范圍內要有好的測定準確性、線性和精密性。同樣的吸光度范圍,測定的准確性、線性和精密性越好則酶標儀亦越佳。而且,由於用於酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重復性,則測定速度也是一個較重要的性能指標。至於其他如震板、溫育及有關的軟體功能,則是選配功能,不影響酶標儀其他的使用性能。答案來自

Ⅱ 核酸檢測用什麼儀器檢測

數字式PCR儀。

能將每個樣品的反應體系分為12000個—20000個納升級的微滴。微滴生成速度:8個樣品:3分鍾。微滴分析儀可一次檢測96個樣品,全自動檢測,無需人工干預。具有溫度梯度功能,可進行96個樣本擴增,升降溫速度可達5度每秒。

檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒,病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後,中國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比,發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗室檢測過程中,如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列,應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。

Ⅲ 伊鴻健康掌中測是干什麼用的儀器能檢測哪些

掌中測是一款智能診斷設備,我們診所使用掌中測膠體金試紙分析儀快一年了,可以檢測CRP、SAA、肺炎支原體/衣原體、幽門螺旋桿菌、糖化血紅蛋白、手足口病、甲乙型流感等,一般半小時內就能檢測出准確的細菌感染、病毒感染等單位,輔助我們醫生精準用葯,病人也非常認可,而且診所醫生也可獲得更多的服務收入很好。

Ⅳ 如何利用電鏡技術測定病毒粒體的特徵

隨著科學的發展,電鏡已成為一種綜合的分析儀器,在植物病毒的診斷和鑒定中發揮著重要作用。植物病毒學上用得較多的是透射電鏡。

1 透射電鏡的成像原理

顯微鏡的解析度與其使用光源的波長呈負相關,即波長越短分辨本領越大。可見光的波長范圍為0.4~0.7μm,它決定了光鏡的分辨極限為0.2μm,有效放大倍數不能超過2000倍。電鏡用的光源為電子槍產生的高速電子束,其波長比可見光短十萬倍以上,因而大大地提高了解析度。電鏡解析度接近0.lnm,有效放大倍數在百萬倍以上。

在電子顯微鏡下可觀察病毒粒體外形、大小以及在寄主細胞中的位置等。植物病毒粒子常見的有球形、長桿狀、線形和彈狀。

2 制樣技術

樣品處理技術多種多樣,適用於不同的材料和觀察目的。如金屬投影和復型技術,主要用於病毒或其他大分子的表面結構和大小觀察;冰凍蝕刻用於細胞化學、生物膜等研究;另外還有放射自顯影電鏡技術、免疫電鏡技術等。而植物病毒學上廣泛應用的是負染技術和超薄切片技術。負染制樣操作簡單,所需時間少;而超薄切片制樣方法操作復雜,所需時間長,但這種方法可以觀察到病毒粒子在組織中的情況。

2.1 負染技術

負染是相對正染而言的。是指在樣品的周圍包被高電子密度的染料,背景呈深色,而樣品呈白色,反襯出樣品的輪廓。病毒負染後能很清楚地看到其大小和細微結構。此法簡便、易行、快速,為病毒診斷提供了一種可靠手段。現在鑒定病毒,一般先用病汁液做負染觀察,根據看到的病毒的大小和形狀等,能為進一步研究提供許多有用信息,如採用什麼方法提純、病毒的分類地位如何等。其中有六個病毒屬的形態特徵非常典型,幾乎可以憑此特徵就能確定它們屬於哪個病毒科、屬,見表1。

表1 六個典型特徵病毒屬

pH調節用1mol/L HCl或1mol/L NaOH,而鉬酸銨用醋酸銨調,甲酸鈾用氫氧化銨調。

強大電子束的轟擊,是造成病毒變形和失去結構細節的另一重要原因,觀察時要採用盡量低亮度光斑,動作迅速,以減少轟擊時間。Forvmor膜等在電子束照射下,容易漂移,這樣病毒會被拉長或拉寬,因此,在測量病毒顆粒大小等精確觀察時,最好使用碳膜,或在Forvmor膜上加噴一層碳膜。

(5)病毒粒體大小測量 目前病毒學工作者已經注意到,同一病毒的大小不一樣,有些甚至相差甚遠。這可能是由於不同分離物或不同株系本身就不同,但大部分可能是由於實驗誤差或方法上的差別造成的。測量病毒大小,一般不宜提純病毒,而要用病株粗提液。因為病毒在提純過程中的形態結構,會由於提純過程中離子環境等的變化和物理因素的影響發生而變化。染色要用兩種以上染料,測量病毒顆粒的數量要盡量多,尤其是線狀病毒容易斷裂,數量應在100個以上。

2.2 超薄切片技術

根據電鏡成像原理可知,用於電鏡觀察樣品其厚度要求在數十納米,而通常單個細胞的厚度在數十微米,比要求厚度大100倍,而徒手切片或用於光鏡的切片機,其切片厚度一般在單個細胞水平,所以電鏡觀察必須做超薄切片。

超薄切片一般程序為:取材—固定—脫水—包埋—切片—染色—電鏡觀察。

(1)取材 取材要求典型、迅速,機械損傷小。材料切成1mm3大小,離體後1min之內進入固定液。應取不同寄主材料、同一寄主的不同組織和不同接種時期的樣品。

(2)固定 是用物理的或化學的方法迅速將細胞殺死,並且盡可能地使保存和固定細胞內各種結構、生物大分子生活時的狀態和位置。電鏡中常用的固定方法是化學固定。常用四氧化鋨、戊二醛、高錳酸鉀或重鉻酸鉀等固定劑。在病毒學中一般採用2%~3%戊二醛—1%~2%四氧化鋨(用0.2mol/LPBS,pH7.2配製)雙固定法,這樣細胞中的多種成分,如蛋白質、脂類、多糖、核酸等,大部分都能固定下來。戊二醛固定12~24h,四氧化鋨固定2~4h。戊二醛遇到鋨酸會形成沉澱,因此戊二醛固定後一定要用緩沖液充分清洗後再進行四氧化鋨固定。固定在超薄切片中很關鍵,固定液的種類、濃度、pH、滲透壓、離子組成、固定時間、溫度和方式都與固定的質量密切相關。因此,整個固定過程應該在4℃下進行。固定劑一定要用緩沖液配製。固定好的材料,電鏡下細胞內各種膜系統應該完整,沒有斷裂,雙層膜要基本平行,細胞質呈精細顆粒狀,沒有空白。固定後緩沖液要充分清洗後再進行下面的步驟。

(3)脫水 常用的包埋劑是疏水的,因此包埋前要用既親水又親脂的乙醇或丙酮進行脫水。從低濃度到高濃度的脫水劑脫水,最後用絕對無水的脫水劑脫水。

(4)包埋 包埋的目的是增強樣品的機械強度,使樣品具有一定的機械形狀,適於切片機工作;另一個重要作用是進一步固定細胞結構。包埋劑種類很多,有水溶性的,也有脂溶性的。常用的是Epon812等環氧樹脂。包埋過程中發生的化學反應,叫聚合過程。聚合過程中實際上發生了兩類反應,一類是環氧樹脂末端環氧基之間在胺類化合物(如DMP-30)催化下,化合生成長鏈;另一類是樹脂中間的羥基和交聯劑(也稱固定劑)的酸酐發生反應,生成橫向連橋,加固了樹脂分子之間的聯系。為了增強樹脂聚合形成的包埋塊的切割性能,常加入一些增塑劑,如樹脂、催化劑、固化劑。

(5)切片 准確、熟練地掌握切片機操作技術,包埋塊軟硬適度,修塊好,就能切出要求質量的片子來。這里技巧很重要。

(6)超薄切片的染色 也叫電鏡技術的正染色。觀察內容不一樣,採用染色方法不同,病毒內含體和細胞病理學研究則常用醋酸雙氧鈾—檸檬酸鉛染色法。切片在1%~2%醋酸雙氧鈾中染色20min,用50%乙醇沖洗後用檸檬酸鉛染色30min,0.01mol/L NaOH沖洗。染色的關鍵是要防止醋酸鈾和檸檬酸鉛生成沉澱。防止污染的主要措施是防止CO2和檸檬酸鉛反應。如用剛制備出的蒸餾水配製染料和沖洗劑,染色時在小室中進行,小室中放入吸收CO2的固體NaOH,防止人呼吸時CO2進入小室中,戴口罩等。染色和沖洗完畢,切片自然乾燥後就可以電鏡觀察。

電子顯微鏡的出現及各種電鏡技術的發展,為植物病毒的直接觀察起到了巨大的推動作用,使檢疫工作人員能得到受病毒感染的病毒粒子電鏡照片以作為直接證據。但電鏡觀察結果需要和其他方法的檢測結果相結合,才能確定病毒的分類地位。這是因為許多病毒都有類似的形態和結構。由於一些植物汁液中病毒濃度過低,在進行常規的電鏡觀察檢測中,很難發現病毒粒子,這樣就要求對一些植物病毒進行分離和提純,以便進行有效的電鏡觀察和其他理化檢測。病毒的分離和提純主要是採用差速離心、PEG沉澱的方法,進一步的純化則採用密度梯度離心和柱層析法。為了直接檢測植物體內的帶毒情況,常採用植物組織的超薄切片和電鏡觀察進行。超薄切片的電鏡觀察可以直接用於對植物組織內部的病毒形態、內含體形態、病毒所在的部位、受感染的植物組織發生的病理學變化等進行檢查。

Ⅳ 我們觀察病毒,應選用的儀器是()A.放大鏡B.光學顯微鏡C.電子顯微鏡D.解剖顯微

病毒是一類比細菌還要小的微生物,形體及其微小,放大鏡和光學顯微鏡放大倍數太小,不能觀察到病毒而解剖顯微鏡能形成正立像,立體感強.常常用在一些固體樣本的表面觀察,或是解剖、鍾表製作和小電路板檢查等工作上,也不能觀察到病毒,通常只能藉助於電子顯微鏡才能觀察到它們.
故選C

Ⅵ 南美白對蝦養殖中pcr技術是什麼概念

首先,PCR是一台儀器及反應機理的一種統稱,一般用作病毒檢測儀器,並不代表是什麼技術。專業點的說法:PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。
在對蝦生產中,PCR主要用於檢測對蝦在蝦苗期間、養殖中後期的白斑綜合征病毒(WSSV)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)、肝胰腺細小病毒(HPV)、桃拉綜合征病毒(TSV)、對蝦桿狀病毒(BP)和傳染性肌肉壞死病毒(IMNV)的檢測,提前預防或及時治療。

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