查dna的儀器是怎麼樣的

『壹』 DNA合成儀的使用方法操作步驟

以亞磷醯胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷醯胺DNA合成的試劑有：保護鹼基的5/—DMT，A、G、C、T亞磷醯胺單體，四唑偶聯催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，三氯乙酸(TCA)脫保護溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。使用步驟如下：
1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因為該溶劑用量較大。
2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。
4)檢查選擇的合成步驟是否正確。
5)選擇結束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態，若打算以5，—DMT基團連接純化寡核苷酸，將其轉變為TritylOnAuto結束狀態。
6)選擇結束方法，一般為系統的原始狀態。
7)在每個柱監視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。
8)以代碼代蔽絕耐替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。
9)列印出每一個柱設置的詳細資料。
10)檢查列印出來的資料是否正確。
11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置，確保合成儀上合成柱處於正確的位置。
12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，並打開分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。
14)啟動循環，運行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑。
注意：宏或TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5』端核苷酸帶有一個DMT，並將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5』端核苷酸帶有一個DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有宏春保護基團，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中。

『貳』 dna親子鑒定的鑒定步驟

DNA親子鑒定步驟如下：
第一步：DNA提取
把樣本細胞核中所含有DNA提取出來，然後進行一定的純化，化除樣本中的雜質。
第二步：PCR擴增
PCR的中文名為聚合酶鏈式反應，簡單的說，PCR擴增這一步就是把我們所需要的片段通過酶促反應，在PCR儀上進行大量復制，放大到通過某些專用儀器可以看到的程度。
第三步：後PCR反應
這一步主要是上測序儀檢測的准備階段，將雙鏈的DNA打開，加一些檢測用的的內標，主要是用來標記檢測的片游裂盯段長度。
第四步：毛細管測序儀檢測
由於DNA帶有電荷，通過毛細管電泳的方法，不同片段DNA長度的電泳速度不同，在同樣的電壓，同樣的電泳時間下，泳動的距離不同，這些長短不同距離可以通過前期加入的內標測量分辨出來，同時可通過一定的軟體顯示在電腦源伍上，方便檢測人員處理和分析數據。
第五步：分析數據，出具報告
主要神和是檢測人員將所得結果進行分析匯總、計算，然後出鑒定結論和報告。

『叄』 『DNA 分離膠 POP系列』

DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學降陸悶解法。自動化測序實滾畝際上已成為當今DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型號。本實驗介紹的是ABI PRISM 310型DNA測序儀的測序原理和操作規程。

【原理】 ABI PRISM
310型基因分析儀(即DNA測序儀)，採用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯醯胺平板電泳，應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法)，因此通過單引物PCR測序反應，生成的PCR產物則是相差1個鹼基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物，使得四種熒光染料的測序PCR產物可在一根毛細管內電泳，從而避免了泳道間遷移率差異的影響，大大提高了測序的精確度。由於分子大小不同，在毛細管電泳中的遷移率也不同，當其通過毛細管讀數窗口段時，激光檢測器窗口中的CCD(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測，激發的熒光經光柵分光，以區分代表不同鹼基信息的不同顏色的熒光，並在CCD攝影機上同步成像，分析軟體可自動將不同熒光轉變為DNA序列，從而達到DNA測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或鹼基排列順序等多種形式輸出。

它是一台能自動灌膠、自動進樣、自動數據收集分析等全自動電腦控制的測定DNA片段的鹼基順序或大小和定量的高檔精密儀器。PE公司還提供凝膠高分子聚合物，包括DNA測序膠(POP 6)和GeneScan膠(POP 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一，避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。它主要由毛細管電泳裝置、Macintosh電腦、彩色列印機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集，分析和儀器運行等軟體。它使用最新的CCD攝影機檢測器，使DNA測序縮短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析為10～40min。

由於該儀器具有DNA測序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可進行DNA測序、雜合子分析、單鏈構象多態性分析(SSCP)、微衛星序列分析、長片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，臨床上可除進行常規DNA測序外，還可進行單核苷酸多態性(SNP)分析、基因突變檢測、HLA配型、法醫學上的親子和個體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定等。

【試劑與器材】
1．BigDye測序反應試劑盒 主要試劑是BigDye Mix，內含PE專利四色熒游標記的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA
polymerase FS，反應緩沖液等。
2．pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA對照模板 0.2g/L，試劑盒配套試劑。
3．M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT，3.2μmol/L，即3.2pmol/μl，試劑盒配套試劑。
4．DNA測序模板
可以是PCR產物、單鏈DNA和質粒DNA等。模板濃度應調整在PCR反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒DNA，濃度為0.2g/L，即200ng/μl。
5．引物
需根據所要測定的DNA片段設計正向或反向引物，配製成3.2μmol/L，即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物，如M13(-21)引物，T7引物等。
6．滅菌去離子水或三蒸水。
7．0.2ml或和0.5ml的PCR管 蓋體分離，PE公司產品。
8．3mol/L 醋酸鈉(pH5.2) 稱取40.8g NaAc•3H2O溶於70ml蒸餾水中，冰醋酸調pH至5.2，定容至100ml，高壓滅菌後分裝。
9．70%乙醇和無水乙醇。
10．NaAc/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/L NaAc混勻，室溫可保存1年。
11．POP 6測序膠 ABI產品。
12．模板抑制試劑(TSR) ABI產品。
13．10×電泳緩沖液 ABI產品。
14．ABI PRISM 310型全自動DNA測序儀。
15．2400型或9600型PCR儀。
16．台式冷凍高速離心機。
17．台式高速離心機或袖珍離心機。

【操作步驟】
1．PCR測序反應
(1) 取0.2ml的PCR管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑：
所加試劑 測定模板管 標准對照管
BigDye Mix 1μl 1μl
待大悉森測的質粒DNA 1μl －
pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA － 1μl
待測DNA的正向引物 1μl －
M13(-21)引物 － 1μl
滅菌去離子水 2μl 2μl
總反應體積5μl，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。

(2) 將PCR管置於9600或2400型PCR儀上進行擴增。98℃變性2min後進行PCR循環，PCR循環參數為96℃ 10s，50℃
5s，60℃4min，25個循環，擴增結束後設置4℃保溫。

2．醋酸鈉/乙醇法純化PCR產物
(1) 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5ml EP管中。
(2) 加入25μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振盪，置冰上10min以沉澱DNA。12 000r/min於4℃離心30 min，小心棄上清。
(3) 加70%(V/V)的乙醇50μl洗滌沉澱2次。12 000r/min於4℃離心5min，小心棄上清和管壁的液珠，真空乾燥沉澱10～15min。

3．電泳前測序PCR產物的處理。
(1) 加入12μl的TSR於離心管中，劇烈振盪，讓其充分溶解DNA沉澱，稍離心。
(2) 將溶液轉移至蓋體分離的0.2ml PCR管中，稍離心。
(3) 在PCR儀上進行熱變性(95℃ 2min)，冰中驟冷，待上機。

4．上機操作
按儀器操作說明書安裝毛細管，進行毛細管位置的校正，人工手動灌膠和建立運行的測序順序文件。儀器將自動灌膠至毛細管，1.2kV預電泳5min，按編程次序自動進樣，再預電泳(1.2kV，20min)，在7.5kV下電泳2h。電泳結束後儀器會自動清洗，灌膠，進下一樣品，預電泳和電泳。每一個樣品電泳總時間為2.5h。電泳結束後儀器會自動分析或列印出彩色測序圖譜。

5．儀器將自動進行序列分析，並可根據用戶要求進行序列比較。如測序序列已知，可通過序列比較以星號標出差異鹼基處，提高工作效率。

6．測序完畢按儀器操作規程進行儀器清洗與保養。

【計算】
測序反應精確度計算公式：100%－差異鹼基數(不包括N數)/650×100%
差異鹼基即測定的DNA序列與已知標准DNA序列比較不同的鹼基，N為儀器不能辨讀的鹼基。
【注意事項與評價】
1．ABI PRISM 310基因分析儀是高檔精密儀器，需專人操作、管理和維護。
2．本實驗測序PCR反應的總體積是5μl，而且未加礦物油覆蓋，所以PCR管蓋的密封性很重要，除加完試劑後蓋緊PCR管蓋外，最好選用PE公司的PCR管。如PCR結束後PCR液小於4～4.5μl，則此PCR反應可能失敗，不必進行純化和上樣。
3．作為測序用戶來說，只需提供純化好的DNA樣品和引物，一個測序PCR反應使用的模板不同，需要的DNA量也就不同，PCR測序所需模板的量較少，一般PCR產物需30～90ng，單鏈DNA需50～100ng，雙鏈DNA需200～500ng，DNA的純度一般是A260nm/A280nm為1.6～2.0，最好用去離子水或三蒸水溶解DNA，不用TE緩沖液溶解。引物用去離子水或三蒸水配成3.2pmol/μl較好。
4．本實驗使用的測序試劑盒是BigDye熒游標記終止底物循環測序試劑盒，一般可測DNA長度為650bp左右。本儀器DNA測序精確度為(98.5±0.5)
%，儀器不能辨讀的鹼基N＜2%，所需測定的長度超過了650bp，則需設計另外的引物。為保證測序更為准確，可設計反向引物對同一模板進行測序，相互印證。對於N鹼基可進行人工核對，有時可以辨讀出來。為提高測序的精確度，根據星號提示位置，可人工分析該處彩色圖譜，對該處鹼基作進一步核對。

具體的配置方法，你拿到產品說明書都有的，一般的實驗室都有相關的配方。

『肆』 無創dna怎麼做

1、無創DNA檢查不需要空腹：無創DNA檢查是需要抽取母體血液的，一般的人，一聽說要抽血檢查，可能第一時間想到的就是空腹。相反，伍掘在做無創DNA檢查時是不需要空腹的，孕媽媽們，只要保證正常飲食就可以了。

2、注意檢查時間：無創DNA產前檢測在孕12周便可進行，孕12周~26周是進行無創DNA產前檢測的整個時間段。准媽媽們若是想做這項檢查的話，一定要在這個時間段去做，這樣才不會影響檢查結果的，提高檢查精準率。

3、無創DNA檢查不等同於唐氏篩查：唐氏篩查僅是無創DNA檢查的其中一項，也就是說無創DNA檢查的范圍比較多，其中包括唐氏綜合征、愛德華氏綜合征、帕陶氏舉芹綜合征等染色體疾病檢查。因此孕媽媽們在做無創DNA檢查腔答核時，要堅持完所有檢查項目，全方位保證胎兒健康。

4、盡量到大醫院接受檢查：無創DNA基因檢測技術，於2010年開始進入臨床，主要是依靠胎兒的細胞通過胎盤會滲透到母血中，被母體免疫系統破壞，胎兒的DNA就會殘留下來。其檢測結果准確度高達99.70%，像這種高端技術一般大醫院才有。

『伍』 染色體微陣列分析和基因檢查一樣嗎

不一樣。

DNA微陣列(DNA microarray)又稱DNA陣列或DNA晶元，比較通俗的名字是基因晶元(gene chip)。是一塊帶有DNA微陣列(micorarray)塗層的特殊玻璃片，在數平方厘米之面積上安裝數千或數萬個核酸探針，經由一次測驗，即可提供大量基因序列相關資訊。它是基因組學和遺傳學研究的工具。研究人員應用基因晶元就可以在同一時間定量的分析大量(成千上萬個)的基因表達的水平，具有快速、精確、低成本之生物分析檢驗能力。

其中可以用來檢測基因表現程度之 cDNA微陣列(cDNA-microarray)，已開始商業化，市場主要以研發實驗室為主。此外，以光刻(photolithography)技術製作，可檢測基因多形式(Polymorphisms)之生物晶元，尚處於試驗好鏈階段而結合微流體學(microfluidics)之臨床診斷用晶元，則仍在研發階段。

DNA微陣列技術：

一 檢測基因表達水平及識別基因序列。

Schena等1996年用擬南芥光調基因微陣列，以不同器官中的mRNA為探針，檢測其基因表達水平，結果表明葉mRNA的表達水平是根的500倍。Shelon等1996年將釀酒酵母基因組DNA克隆製成微陣列，用6條最大染色體和10條最小染色體DNA探針分別標記上紅，綠熒游標記進行雜交檢測，結果表明95%的克隆在染色體上的定位與文獻報道一致。Milosaljevic等1996年將大腸桿菌基因組DNA的15328個克隆製成微陣列，用997眾寡核苷酸探針進行雜交檢測，匯總結果通過計算前銷機與E.coli序列資料庫相比較，用此技術一次可識別4.6MbDNA序列結構。

二 檢測表達狀況，發現新基因。

Wodicka1997年將覆蓋酵母基因組全部ORF的26萬種25mer探針，陣列於4張玻片，每張6.5萬個探針，將酵母分加富和低限兩組培養，研究不同生長條件下基因表達水平，結果表明90%的基因在兩種條件下慧襪游均表達，36種mRNA更多地在加富培養下表達，140種mRNA在低限培養中表達。此外，還發現了一批未見報道的新基因。

三 檢測突變和多態性進行遺傳作圖。

Hacia等1996年用96600寡核苷酸陣列，檢測人癌基因BRCA1突變情況，將15個患者樣品和對照樣品分別用兩種熒游標記，發現14人的該基因發生了一個剪輯突變，共出現8種多態性，突變表現在該基因外顯子2的第22個密碼子內。利用SNP製作人類遺傳圖譜，將是第三代遺傳圖譜，此技術完全以DNA微陣列為基礎。 四，DNA序列分析。Donnel等1992，Pease等1994，Yershow等1996，Wallraff等1997都報道了採用DNA微陣列技術進行DNA序列分析。多數研究者採用先合成寡核苷酸序列製作微陣列，然後與標記的未知DNA序列雜交，通過熒光共聚焦顯微鏡掃描，計算機軟體分析得出數據，也有研究者將被測DNA片斷陣列，以標記的寡合苷酸為探針雜交測序。

『陸』 Ion Torrent 基因分析儀——介紹及原理

IonTorrent基因分析儀組件：

IonTorrent與Illumina原理的主要區別：

Illumina：熒光信號

Ion Torrent：電信號團瞎

IonTorrent 核心理念：

核心理念：晶元就是測序儀

特點：擴展性、簡捷、快速

半導體測序技術：

IonTorrent生物化學原理：

IonTorrent如何快速、直接檢測：

Ion系列測序平台適用的chips及數據產出情況匯總：

PGM Chip：

314 Chip：1.2M Wells

316 Chip：6.1M Wells

318 Chip：11M Wells

Ion torrent測序過程：

Follow 和Cycle的含義：

一個「Follow」：將一個特定的dNTP(T, A, C, or G)打入晶元，隨後進行洗脫；

一個「Cycle」：是由4個dNTP組成，例如：A-T-C-G= 1 Cycle。

測序時「Follow」的順序是怎樣的？

「Flow」的順序是以下dNTP順序的重復（參數可調）：

「TACG-TACG-TCTG-AGCA-TCGA-TCGA-TGTA-CAGC」

IonTorrent 測序記錄「Ionograms」：

An 「ionogram」代表信號的輸出

必須「從上到下」和「從左向右」讀

柱的高度代表在一個「Flow」中有幾個核酸結合上去

「Negative 」 或 「zero」 flows 代表沒有核酸結合上去

IonTorrent實驗流程匯總：

IonTorrent特點：

1.擴展性   :靈活高螞差效的Ion Torrent

2.簡捷：簡單而又真實的生物化學原理

3.快速：最快速的操作流程

IonTorrent應用與產品化：

提供快速鑒別與篩查食源性致病菌的整套工具

微生物全基因組測序— de novo 測序和重測序；

宏基因組測序（16S/18S…）—一項有效的工具；

RNA病毒測序：

1.純化的RNA病毒分型

–病毒RNA抽提

–長PCR擴增子

–短PCR擴增子(利用AmpliSeq技術)

–TargetSeq捕獲

2.未知的RNA病毒 denovo分析

–病毒RNA抽提

–反向富集，去除rRNA專有引物設計，去除宿主rRNA

Ion Total RNA-SeqKit (48 reactions)

•構建全外顯子或Small RNA文庫；

•維持原始單鏈並減少偏向性和錯誤；

•低起始量建庫：總RNA 200ng或5ngmiRNA。

目標區域：

1.擴增子測序

基於PCR目標序列的深度測序，用於檢測變異}擴增子的長度是可變的，

Ion Xpress™ 文庫制備試劑盒與現有的Sanger測塌物空序法的引物完全兼容

利用barcoding試劑盒（條碼試劑盒），可以實現多種樣品的擴增子同時測序

檢測生殖細胞和體細胞的突變

2.捕獲目標序列 (目標序列>100kb)

通過雜交法或大量並行的PCR，實現目標序列的富集

•TargetSeq™定製富集試劑盒，可根據客戶應用需求實現特定序列的富集

•可與其他富集方法兼容

Ion DNA 條碼接頭（Barcode Adaptor ）1-96試劑盒

1.Ion半導體測序技術採用優化的barcodes可以 一次進行多達96種文庫的同時測序。

2.支持多種文庫的目標序列或全基因組的再測序，可以降低成本，節省樣品。

3. 最少的接頭序列和強大的校正功能確保樣品種類的確認

4. 兼容自動化操作

微生物測序

准確，快速的細菌和病毒的從頭測序和重測序

線粒體測序

多重線粒體測序用於科研，臨床和法醫等應用

擴增子測序

•多重擴增子測序用於快速的檢測生殖細胞和體細胞的突變

•與毛細管電泳測序的引物完全兼容

•利用測序進行基因分型

•細菌和病毒的分型質粒測序

大片段目標序列（>100kb）的在測序

快速，簡單的操作流程適用於所有的大片段目標序列的富集方法

驗證全基因組和顯子組的突變

正交技術驗證SOLiD®System/Illumina的全基因組和外顯子組的測序結果

文庫評估

在進行高通量的測序之前，對構建的文庫進行快速的復雜性驗證或QC質控

RNA測序

快速，簡單的RNA測序解決方案（最初主要針對於小RNA&低復雜度的轉錄組）

IonTorrent數據處理：

Ion Torrent下機數據格式（SFF、BAM、Fastq）

默認下機文件類型為：BAM；

通過插件FastqCreator可下機直接生成：Fastq；

原始下機數據路徑：

Fastq格式文件：/results/analysis/output/Home/（ReportName）/plugin_out/FileExporter_out.*

BAM格式文件：/results/analysis/output/Home/（ReportName）

IonTorrent測序質控：

Positive-controlKit，上機制備模板時加入；

可自行設置，占據上樣量；

IonTorrent上機情況反饋

機器運行及分析的日誌文件壓縮包（Support文件）。

『柒』 毛細管電泳是用來檢查親子鑒定嗎

毛細管電泳是一種常見的分離和分析瓊脂糖電泳技術。它可以用於分離DNA和RNA分子，並且在分子量、電荷、大小和形狀等維度上進行分析。

在DNA分析中，毛細管電泳可以被段賀弊用於親子鑒定。利用毛細管電泳技術，可以將DNA分子分離成不同的大小和形狀，並對分離後的DNA分子進行比較。通過比較來自不同個體的DNA樣本之間的差異，可以確定親子關系。

雖然毛細管電泳是用於DNA分析的一種拍鍵重要技術，但在親子鑒定中，毛細管電泳通常作為一種初步篩選方法，用來握族篩選出同父異母和非親緣關系的個體，而不足以確定親緣關系。在親子鑒定中，還需結合其他分析方法，如SNP基因分型、STR基因分型等技術綜合分析，才能確立親子關系。

『捌』 怎麼驗DNA

1、驗DNA也就是DNA親子鑒定，利用醫學、生物學和遺傳學的理論和技術，從子代和親代的形態構造或生理機能方面的相似特點，分析遺傳特徵，判斷父母與子女之間是否是親生關系。

2、也叫親權擾寬鑒定。人的血液、毛發、唾液、口腔細胞及骨頭等都可以用於親子鑒定，十分方便。根據國家規定，做親子鑒定需要填寫司法鑒定書。

3、司法鑒定書具有法搭李團律效力，能夠被法院、司法機關、知橘律師事務所認可。然後填寫《DNA委託鑒定申請表》和《委託書》，採集血液或血痕樣品，才能進入DNA檢測程序。

『玖』 基因檢測是怎麼做的流程是什麼樣的

基因檢測是一種通過血液、其他體液或細胞來檢查DNA是否正常的技術。流程基本是檢測機構或者醫院采樣完成後進行檢測，購買者只需要配合採樣就可以。

基因旦首檢測是需要提取含有遺傳物質的樣本進行檢測，任何含有人類細胞核含有遺傳物質的組織都可以作為檢測的樣本。抽血是最常用最簡單的程序方法，也可以用皮膚組織、懷孕期間的羊水組織、絨毛組織或頭發上帶有的毛囊等，都可以作為基因檢測的樣本。還有一些特殊情況，比如腫瘤病人也可以選取切下來的腫瘤作為標本，甚至於石蠟包埋的組織包塊，或者抽取的胸腔積液、腹腔積液等都可以作為基因檢測的標本。實灶遲逗際上，也是目前臨床比較常用的方式。

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『拾』 流式細胞儀測DNA含量具體步驟怎麼調

流式細胞儀測DNA含量具體步驟怎麼調
流式檢測DNA含量，是通過DNA熒光染料，比如PI染色，然後和已知DNA含量的商品化標准品（比如雞紅大搜細胞）比對，得姿局到含量。

比如下面這個圖，做的是肝癌患者活檢後的檢查。橫坐標代表的是DNA染色後的相對熒光強度，縱坐標是細胞計數。第一個峰是雞紅細胞，第二個峰是正常的肝細胞。第三個峰是跡仿讓DNA含量多於正常細胞（也就是癌細胞，是正常細胞的1.2倍），最後一個峰，是正在分裂的正常細胞處於G2期，所以有兩倍的DNA