非洲豬瘟全血檢測儀器怎麼用

Ⅰ 非洲豬瘟檢測方法是什麼

1、紅細胞吸附試驗：將健康豬的白細胞加上非洲豬瘟豬的血液或組織提取物，37℃培養，如見許多紅細胞吸附在白細胞上，形成玫瑰花狀或桑椹體狀，則為陽性。

2、直接免疫熒光試驗：熒光顯微鏡下觀察，如見細胞漿內有明亮熒光團，則為陽性。

3、動物接種試驗。

4、間接免疫熒光試驗：將非洲豬瘟病毒接種在長滿Vero細胞的蓋玻片上，並准備未接種病毒的Vero細胞對照。試驗後，對照正常，待檢樣品在細胞漿內出現明亮的熒光團核熒光細點可被判定為陽性。

5、酶聯免疫吸附試驗：對照成立時（陽性血清對照吸收值大於0.3，陰性血清吸收值小於0.1），待檢樣品的吸收值大於0.3時，判定為陽性。

6、免疫電泳試驗：抗原於待檢血清間出現白色沉澱線者可判定為陽性。

7、間接酶聯免疫蝕斑試驗：肉眼觀察，或顯微鏡下觀察，蝕斑呈棕色則為陽性，無色則為陰性。

(1)非洲豬瘟全血檢測儀器怎麼用擴展閱讀

非洲豬瘟急性病例臨床症狀以高熱、病程短、死亡率高、內臟器官廣泛性出血以及呼吸系統和神經系統功能紊亂為主要特徵。

在無本病的國家和地區應防止ASFV的傳入，在國際機場和港口，從飛機和船舶來的食物廢料均應焚毀。對無本病地區事先建立快速診斷方法和制定一旦發生本病時的撲滅計劃。

Ⅱ 非洲豬瘟檢測曲線怎麼看

非洲豬瘟簡稱ASFV，很多人尤其是養豬專業戶提起非洲豬瘟就臉色大變，非洲豬瘟發病快、發病急、傳染快，非洲豬瘟會導致養殖戶錢財損失，非洲豬瘟是一種動物疫病，我們可以利用非洲豬瘟檢測儀來檢測，提前做好防範預防措施。非洲豬瘟檢測儀是用於運行病毒檢測實驗，並對實驗數據進行分析；儀器既可在實驗室內操作，又可用於野外科學實驗，配合相應試劑，對取自待檢測樣本的分析物或其他分析物中的目標核酸進行快速、准確的定性檢測。

非洲豬瘟檢測

免疫電泳試驗抗原於待檢血清間出現白色沉澱線者為陽性直接免疫熒光試驗：在熒光顯微鏡下觀察細胞，若細胞漿內有明亮的熒光團，則為陽性。間接酶聯免疫蝕斑試驗：直接用肉眼觀察蝕斑，若顏色為棕色，則表示為陽性酶聯免疫吸附試驗：對照成立後，若待檢樣品的吸收值大於0.3，則可以判定為陽性。

Ⅲ DG55155Tl設置方法

團體標准T/CVMA 5—2018
非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法
Real-time PCR assay for detection ofAfrican swine fever virus
中國獸醫協會發布
前言
本標准按 GB/T 1.1-2009給出的規則起草。
本標准由中國獸醫協會提出並歸口。
本標准起草單位： 中國動物疫病預防控制中心、中國獸醫葯品監察所、中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所、中國農業科學院蘭州獸醫研究所、北京海關。
本標准主要起草人： 倪建強、王傳彬、王琴、仇華吉、殷宏、楊林、辛盛鵬、劉艷華、劉洋、宋曉暉、趙啟祖、羅玉子、劉志傑、張乾義、喬彩霞、夏應菊、楊吉飛、徐璐、顧小雪、亢文華、李碩、畢一鳴。
1、范圍
本標准規定了非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法的試劑、儀器和耗材、操作步驟、結果判定、實驗室生物安全等技術要求。
本標准適用於豬脾臟、淋巴結、血液等組織和血粉中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
2、規范性引用文件
下列文件對於本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用於本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用於本文件。
GB 19489 實驗室 生物安全通用要求
NY/T 541 獸醫診斷樣品採集、保存與運輸技術規范
3、試劑
3.1 DNA提取試劑
DNA提取試劑的配製見附錄A，或選取商品化的病毒DNA提取試劑盒並參照說明書進行DNA提取。
3.2 2 × PCR緩沖液
2 × PCR緩沖液的配製見附錄A。
3.3 引物探針
3.3.1 採用針對非洲豬瘟病毒VP72基因（核苷酸序列見附錄B）的引物及探針：
上游引物ASF-CADC-rPCRF：5'-1528-ATAGAGATACAGCTCTTCCAG-1548-3'
下游引物ASF-CADC-rPCRR：5'-1660-GTATGTAAGAGCTGCAGAAC-1679-3'
熒光探針ASF-CADC-Probe：5'-1638-FAM-TATCGATAAGATTGAT-MGB--3'
3.3.2 可以使用世界動物衛生組織（OIE）在陸生動物診斷技術和疫苗手冊（Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals）第2.8.1章African Swine Fever中提供的引物和探針，並按照手冊中規定的檢測程序和判定標准操作：
上游引物ASF-OIE-rPCRF：5'-1627-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-1651-3'
下游引物ASF-OIE-rPCRR：
5'-1857-GATACCACAAGATCRGCCGT-1876-3'
熒光探針ASF-OIE-Probe：
5'-1761-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-TAMRA-1785-3'
3.3.3 使用國家農業行政主管部門批準的其他引物、探針，應對檢測程序和判定標准作相應調整。
3.4 陰性及陽性對照
陰性及陽性對照的制備方法見附錄C。
3.5 其他試劑
消毒液、5U/μLTaq DNA聚合酶、無菌無核酸酶水、0.01mol/L PBS（pH7.2）。
消毒液配製見附錄A， 0.01mol/L PBS配製見附錄A。
4、儀器和耗材
分析天平（感量0.1mg）、高速台式冷凍離心機（最高離心速度不低於12 000r/min）、冰盒、實時熒光PCR儀及配套反應管（板）、組織研磨器、-20℃冰箱、可調移液器（2 μL，20 μL，200μL，1 000 μL）、1.5mL離心管（無核酸酶）。
5、操作步驟
5.1 樣品採集及運輸
樣品採集及運輸按照NY/T541的規定執行，採集豬的脾臟、淋巴結、血液等組織材料或血粉用於檢測，樣品應在冷藏條件下盡快運輸至實驗室，避免反復凍融。采樣時應穿戴個人生物安全防護裝備，實施現場消毒和廢棄物處理。
5.2 樣品處理
檢測前樣品應在二級生物安全櫃中處理。取0.1g～0.2g組織或血粉，經研磨破碎後加1mL的0.01mol/L PBS（pH7.2）製成勻漿，經12 000 r/min離心2Min取上清；全血、血清樣品直接取1mL，置於1.5 mL離心管內蓋緊管帽。將上述處理的樣品置於60℃條件下滅活30min。
5.3 樣品保存
採集或處理好的樣品在2℃～8℃條件下保存應不超過24 h；如需長期保存，應放置-70℃冰箱，但應避免反復凍融（凍融不超過3次）。
5.4 病毒DNA提取
5.4.1 DNA提取應在樣本制備區內採用以下方法進行，若使用其他等效的病毒DNA提取試劑，則按照試劑說明書操作。
5.4.2 待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數總和用n表示，取n個滅菌1.5 mL離心管，逐管編號。
5.4.3 每管加入200μL DNA提取液1，然後分別加入待測樣品、陰性對照和陽性對照各200μL，1份樣品換用1個吸頭，混勻器上震盪混勻5s。於4℃～25℃條件下，13 000 r/min離心10 min。DNA提取液1見附錄A。
5.4.4 盡可能吸取上清、棄去，吸頭不要碰到沉澱，再加入10 μL DNA提取液2，混勻器上震盪混勻5 s。於4℃～25℃條件下，2 000 r/min離心10s。DNA提取液2見附錄A。
5.4.5 100℃干浴或沸水浴10 min。
5.4.6 加入90μL無DNA酶的滅菌去離子水，13 000 r/min離心10 min，上清即為提取的DNA，-20℃保存備用。無DNA酶的滅菌去離子水見附錄A。
5.5 實時熒光PCR操作
5.5.1 在反應混合物配製區、樣品制備區和檢測區分別進行5.5.2～5.5.4。
5.5.2 每個檢測反應體系需使用20μL實時熒光PCR反應液。根據5.4.2中設定的n值，按附錄D配製反應液，充分混勻後分裝，每個PCR反應管20μL。轉移PCR反應管至 樣品制備區 。
5.5.3 在上述5.5.2的反應管中分別加入5.4中提取的DNA溶液5μL，使每管總體積達到25 μL，記錄反應管對應的樣品編號。蓋緊管蓋後，瞬時離心。
5.5.4 將5.5.3加樣後的反應管放入實時熒光PCR檢測儀內，記錄反應管擺放順序。選定5-羧基熒光素（FAM）作為報告基團，小溝結合物（MGB）為淬滅基團，反應參數設置如下： 預變性95℃/3 min；95℃/15 s，52℃/10 s，60℃/35 s，45個循環； 在每次循環的60℃退火延伸時收集熒光。試驗結束後，根據收集的Ct值和熒光曲線判定結果。
6、結果判定
6.1 結果分析條件設定
實時熒光PCR檢測閾值設定原則：閾值線超過陰性對照擴增曲線的最高點，且相交於陽性對照擴增曲線進入指數增長期的拐點，或根據儀器雜訊情況進行調整。每個樣品反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數即為Ct值。
6.2 結果描述及判定
當陽性對照Ct值≤28.0且出現典型擴增曲線，陰性對照無Ct值無擴增曲線時，實驗成立，實例參考附錄E。 當被檢樣品出現典型的擴增曲線且Ct值≤38.0時，判為非洲豬瘟病毒核酸陽性 ； 被檢樣品無Ct值，判為非洲豬瘟病毒核酸陰性；對於Ct值＞38.0的樣品且出現典型的擴增曲線，應重檢，重檢仍出現上述結果的判為陽性，否則判為陰性。
7、實驗室生物安全要求
7.1 本方法涉及非洲豬瘟感染性樣品的實驗操作應在（動物）生物安全三級試驗室中進行，實驗室生物安全管理要求見GB 19489。國家農業行政主管部門另有規定的，按其規定執行。
7.2 使用過的實驗器材和液體廢棄物應先經過消毒液浸泡處理，再經高溫高壓處理後廢棄。剩餘樣品等固體廢棄物應在生物安全櫃中密封包裝，經表面消毒後移出，再經高溫高壓處理後廢棄。
一
附錄 A (規范性附錄) 試劑的配製
A.1 DNA提取液1
PEG8000晶體20.74g，NaCL17.53g，加去離子水定容到100 mL。
A.2 DNA提取液2
1mol/LTris.Hcl 2 mL，2 mol/L KCL5 mL，0.5 mol/L EDTA 0.5 mL，NP-40 1 mL，加去離子水定容到100 mL。
即KCL14.912g，Tris鹼12.114g，1.2068 mL濃HCl，EDTA14.612g，NaOH 6g, 加去離子水定容到100 mL。
A.3 2×PCR緩沖液
滅菌去離子水 70 mL
三羥甲基氨基甲烷（Tri s） 0.79 g
氯化鉀 1.865 g
曲拉通X-100 0.5 mL
dATP (100mmol/L) 2.5 mL
dTTP (100mmol/L) 2.5 mL
dGTP (100mmol/L) 2.5 mL
dCTP (100mmol/L) 2.5 mL
六水氯化鎂 0.61 g
鹽酸 調pH至9.0
滅菌去離子水 加至100 mL
A.4 消毒液
8‰氫氧化鈉或3‰福爾馬林或3%鄰苯基苯酚或碘化合物等其他消毒試劑均可。
A.5 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配方
A.5.1 A液
0.2mol/L磷酸二氫鈉水溶液：NaH2PO4·H2O 27.6 g，溶於蒸餾水中，最後定容至1 000 mL。
A.5.2 B液
0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液：Na2HPO4·7H2O 53.6 g（或Na2HPO4·12H2O 71.6 g或Na2HPO4·2H2O 35.6 g），加蒸餾水溶解，最後定容至1 000 mL。
A.5.3 0.01 mol/L、pH 7.2 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配製
取A液14 mL、B液36 mL，加NaCl 8.5 g，用蒸餾水定容至1 000 mL。經過濾除菌後，無菌條件下分裝。
A.6 無DNA酶的滅菌去離子水
無DNA酶的滅菌去離子水是用1 %DEPC處理後的去離子水，電阻應該大於18.2mΩ。
二
附錄B （資料性附錄）非洲豬瘟病毒VP72基因參考序列
1ATGGCATCAG GAGGAGCTTT TTGTCTTATT GCTAACGATG GGAAGGCCGA CAAGATTATA
61TTGGCCCAAG ACTTGCTGAA TAGCAGGATC TCTAACATTA AAAATGTGAA CAAAAGTTAT
121GGGAAACCCG ATCCCGAACC CACTTTGAGT CAAATCGAAG AAACACATTT GGTGCATTTT
181AATGCGCATT TTAAGCCTTA TGTTCCAGTA GGGTTTGAAT ACAATAAAGT ACGCCCGCAT
241ACGGGTACCC CCACCTTGGG AAACAAGCTT ACCTTTGGTA TTCCCCAGTA CGGAGACTTT
301TTCCATGATA TGGTGGGCCA TCATATATTG GGTGCATGTC ATTCATCCTG GCAGGATGCT
361CCGATTCAGG GCACGTCCCA GATGGGGGCC CATGGGCAGC TTCAAACGTT TCCTCGCAAC
421GGATATGACT GGGACAACCA AACACCCTTA GAGGGCGCCG TTTACACGCT TGTAGATCCT
481TTTGGAAGAC CCATTGTACC CGGCACAAAG AATGCGTACC GAAACTTGGT TTACTACTGC
541GAATACCCCG GAGAACGACT TTATGAAAAC GTAAGATTCG ATGTAAATGG AAATTCCCTA
601GACGAATATA GTTCGGATGT CACAACGCTT GTGCGCAAAT TTTGCATCCC AGGGGATAAA
661ATGACTGGAT ATAAGCACTT GGTTGGCCAG GAGGTATCGG TGGAGGGAAC CAGTGGCCCT
721CTCCTATGCA ACATTCATGA TTTGCACAAG CCGCACCAAA GCAAACCTAT TCTTACCGAT
781GAAAATGATA CGCAGCGAAC GTGTAGCCAT ACCAACCCGA AATTTCTTTC ACAGCATTTT
841CCCGAGAACT CTCACAATAT CCAAACAGCA GGTAAACAAG ATATTACTCC TATCACGGAC
901GCAACGTATC TGGACATAAG ACGTAATGTT CATTACAGCT GTAATGGACC TCAAACCCCT
961AAATACTATC AGCCCCCTCT TGCGCTCTGG ATTAAGTTGC GCTTTTGGTT TAATGAGAAC
1021GTGAACCTTG CTATTCCCTC AGTATCCATT CCCTTCGGCG AGCGCTTTAT CACCATAAAG
1081CTTGCATCGC AAAAGGATTT GGTGAATGAA TTTCCTGGAC TTTTTGTACG CCAGTCACGT
1141TTTATAGCTG GACGCCCCAG TAGACGCAAT ATACGCTTTA AACCATGGTT TATCCCAGGA
1201GTCATTAATG AAATCTCGCT CACGAATAAT GAACTTTACA TCAATAACCT GTTTGTAACC
1261CCTGAAATAC ACAACCTTTT TGTAAAACGC GTTCGCTTTT CGCTGATACG TGTCCATAAA
1321ACGCAGGTGA CCCACACCAA CAATAACCAC CACGATGAAA AACTAATGTC TGCTCTTAAA
1381TGGCCCATTG AATATATGTT TATAGGATTA AAACCTACCT GGAACATCTC CGATCAAAAT
1441CCTCATCAAC ACCGAGATTG GCACAAGTTC GGACATGTTG TTAACGCCAT TATGCAGCCC
1501ACTCACCACG CAGAGATAAG CTTTCAGGAT AGAGATACAG CTCTTCCAGA CGCATGTTCA
1561TCTATATCTG ATATTAGCCC CGTTACGTAT CCGATCACAT TACCTATTAT TAAAAACATT
1621TCCGTAACTG CTCATGGTAT CAATCTTATC GATAAATTTC CATCAAAGTT CTGCAGCTCT
1681TACATACCCT TCCACTACGG AGGCAATGCG ATTAAAACCC CCGATGATCC GGGTGCGATG
1741ATGATTACCT TTGCTTTGAA GCCACGGGAG GAATACCAAC CCAGTGGTCA TATTAACGTA
1801TCCAGAGCAA GAGAATTTTA TATTAGTTGG GACACGGATT ACGTGGGGTC TATCACTACG
1861GCTGATCTTG TGGTATCGGC ATCTGCT
三
附錄C （規范性附錄）非洲豬瘟病毒核酸陽性及陰性對照
C.1陽性對照
陽性對照制備方法：人工合成非洲豬瘟病毒VP72基因片段，序列參見附錄B，將VP72基因連接於pMD20-T載體製成陽性質粒pMD20-T-VP72，使用非洲豬瘟病毒陰性豬的組織研磨液將質粒稀釋至濃度為10 000copies/L，保存於-20℃備用。
C.2 陰性對照
陰性對照為非洲豬瘟病毒陰性豬的組織研磨液。
四
附錄D （規范性附錄）實時熒光PCR反應液配方
實時熒光PCR反應液配方見表D.1。
表D.1 實時熒光PCR反應液配方
組 分
1個檢測體系的加入量
2×PCR 緩沖液a
12.5μL
dNTP（2.5 mmol/L）
1.0 μL
上游引物（10 μmol/L）
1.0 μL
下游引物（10 μmol/L）
1.0μL
探針（10 μmol/L）
1.0 μL
Taq 酶b（5U/μL）
0.5μL
去離子水
3μL
總體積
20μL
2×PCR 緩沖液a: 參見附錄A.1配方。
Taq 酶b：具有5』→3』外切活性。
五
附錄 E （資料性附錄）非洲豬瘟病毒實時熒光PCR擴增實例參考
圖D.1給出了非洲豬瘟病毒實時熒光PCR擴增實例。
圖E.1 非洲豬瘟病毒核酸實時熒光PCR典型擴增曲線示意圖
(資料來源：中國獸醫協會）

Ⅳ 非洲豬瘟怎麼檢測，潛伏幾天才發現

1、免疫電泳試驗：抗原於待檢血清間出現白色沉澱線者為陽性。2、直接免疫熒光試驗：在熒光顯微鏡下觀察細胞，若細胞漿內有明亮的熒光團，則為陽性。3、間接酶聯免疫蝕斑試驗：直接用肉眼觀察蝕斑，若顏色為棕色，則表示為陽性。4、酶聯免疫吸附試驗：對照成立後，若待檢樣品的吸收值大於0.3，則可以判定為陽性。

一、非洲豬瘟怎麼檢測

1、免疫電泳試驗

若抗原於待檢血清間出現白色沉澱線，則為陽性。

2、直接免疫熒光試驗

在熒光顯微鏡下觀察細胞，如果發現細胞漿內有明亮的熒光團，則表示為陽性。

3、間接酶聯免疫蝕斑試驗

直接用肉眼（或使用顯微鏡）觀察蝕斑，若顏色是棕色，則表示為陽性，沒有顏色則表示為陰性。

4、酶聯免疫吸附試驗

對照成立後（陽性血清對照吸收值＞0.3，陰性血清吸收值＜0.1），若待檢樣品的吸收值＞0.3，則可以判定為陽性。

5、紅細胞吸附試驗

將健康豬的白細胞加上病豬的血液（或組織提取物）放在37℃的環境中培養，若觀察到大量的紅細胞吸附於白細胞上面形成玫瑰花狀（或桑椹體狀），則表示為陽性。

6、間接免疫熒光試驗

在長滿Vero細胞的蓋玻片上接種非洲豬瘟病毒，並准備未接種病毒的Vero細胞對照。試驗後若對照正常，待檢樣品在細胞漿內出現明亮的熒光團和熒光細點，則可以判定為陽性。

二、非洲豬瘟潛伏幾天才發現

1、非洲豬瘟的潛伏期

（1）一般情況下，非洲豬瘟的潛伏期為4-19天左右，潛伏期的長短與病毒的毒力、被感染豬群的抗病能力等因素有關。

（2）非洲豬瘟病毒的毒力可分為3個等級，即低毒力（潛伏期最長，發病最晚，可造成慢性、亞急性或不明顯的發病）、中等毒力（潛伏期中等，臨床症狀有所減輕，會造成慢性或不明顯症狀）、強毒力（潛伏期較短，臨床會表現出急性症狀，而且病豬的皮膚上會出現出血點，並伴有厭食或嘔吐、體溫升高的情況，病死率達到100%）。

2、防控方法

（1）避免外來人員、車輛、其他動物進入養殖場，場內的用具、飼料都要嚴格消毒。

（2）按時滅殺場內的昆蟲，避免傳播病毒，每年春秋季節要定期給豬群注射疫苗，斷奶仔豬和新購買的豬要做好防疫注射，成年豬要注射1次豬瘟兔化弱毒疫苗。

（3）新購買的豬要隔離觀察30天，待確定無病後為其注射豬瘟疫苗，注射後才能混群。若豬場處於豬瘟常發疫區，則仔豬達到21-30日齡便要注射1次，達到55-60日齡後再注射1次。

Ⅳ 非洲豬瘟的檢測方法有哪些非洲豬瘟疫情防控方法是什麼

熒光定量 PCR 方法，該方法是將光譜技術引入到PCR 反應中，通過熒光信號的強弱變化定量測定特異性擴增產物的量，解決了常規 PCR 方法敏感性低和電泳檢測中溴化乙錠對環境的污染問題。

等溫擴增法，該方法是一種新興的分子生物學檢測方法，等溫擴增方法不需要 PCR 中的變性、退火步驟，即可完成對靶序列的循環擴增，大幅縮短了時間，整個擴增反應時間一般少於 60 min，而常規PCR 方法的反應時間一般需要 2 h 以上。等溫擴增試劑盒適合現場檢測，靈敏度高，能夠大幅提高豬瘟防控的可行性。

要減少場外人員和車輛進入豬場，要對人員和車輛入場前徹底消毒，要對豬群實施全進全出飼養管理，要對新引進生豬實施隔離，要按規定申報檢疫。

非洲豬瘟防控注意事項

養殖場應該堅持全進全出，自繁自育的養殖模式，構建完善的封鎖隔離措施，避免豬和野豬直接接觸。養殖場在生豬調運過程中，盡量不要跨省引進種豬，必須引種時，一定要進行嚴格的產地檢疫、疫情檢測，嚴格執行落地報告制度和隔離觀察制度。

殖場內部如果發現非洲豬瘟可疑疫情，嚴格按照《非洲豬瘟疫情應急預案》進行處置，迅速採取應急措施，預防疫情傳播和蔓延。

Ⅵ 非洲豬瘟熒光PCR的檢測效果怎麼樣

熒光PCR檢測試劑盒市場上琳琅滿目，質量參差不齊，效果也不一樣。所以熒光PCR檢測的話我還是推薦使用大華農的，不僅穩定性好、靈敏度高，而且特異性強，深受廣大養殖場的喜愛。謝謝您採納並認可我的回答

Ⅶ 非洲豬瘟有沒有好的檢測方法

有，肇慶大華農生物葯品有限公司推出非洲豬瘟熒光PCR檢測試劑盒和非洲豬瘟抗原檢測試紙條，這兩種檢測方法均可使用。謝謝您能夠認可我的回答並採納

Ⅷ 非洲豬瘟的檢測方法有哪些非洲豬瘟疫情防控方法，附症狀

1、紅細胞吸附試驗：將健康豬白細胞與非洲豬瘟豬的血液或組織提取物混合，在37℃下培養，若觀察到許多紅細胞吸附在白細胞上，呈玫瑰花狀或桑椹體狀，說明為陽性。2、直接免疫熒光試驗：在熒光顯微鏡下觀察，若觀察到細胞漿內有明亮熒光團，說明為陽性。3、間接免疫熒光試驗：將非洲豬瘟病毒接種在長滿Vero細胞的蓋玻片上，並准備好對照組，如果待檢樣品在細胞漿內出現明亮熒光團核熒光細點，說明為陽性。

一、非洲豬瘟的檢測方法有哪些，非洲豬瘟疫情防控方法

1、檢測方法

（1）紅細胞吸附試驗

將健康豬的白細胞與非洲豬瘟豬的血液或組織提取物混合，在37℃的環境條件下進行培養，如果觀察到許多紅細胞吸附在白細胞上，呈玫瑰花狀或桑椹體狀，說明為陽性。

（2）直接免疫熒光試驗

在熒光顯微鏡下進行觀察，如果觀察到細胞漿內有明亮熒光團，說明為陽性。

（3）間接免疫熒光試驗

將非洲豬瘟病毒接種在長滿Vero細胞的蓋玻片上，並准備好未接種病毒的Vero細胞進行對照，如果待檢樣品在細胞漿內出現明亮的熒光團核熒光細點，說明為陽性。

（4）酶聯免疫吸附試驗

待檢樣品的吸收值大於0.3時，說明為陽性，待檢樣品的吸收值小於0.1時，說明為陰性。

（5）間接酶聯免疫蝕斑試驗

使用肉眼或者是顯微鏡進行觀察，如果蝕斑呈棕色，說明為陽性，如果無色，說明為陰性。

（6）免疫電泳試驗

抗原於待檢血清間出現白色沉澱線者，說明為陽性。

2、疫情防控方法

（1）使用2%苛性鈉、2%次氯酸鈉、0.3%甲醛、3%鄰苯基苯酚和碘化合物等消毒葯劑對豬舍以及飼喂用具進行全面消毒。

（2）及時打掃豬舍衛生，避免蚊蠅滋生。

（3）在飼料或者是飲用水中添加免疫類動保制劑，增強豬群的免疫能力，降低豬瘟發生概率。

（4）及時消滅潛伏期隱性帶毒豬，無害化處理病死豬。

二、非洲豬瘟的症狀

1、超急性型

食慾不振，無力，高燒（41-42℃），沒有明顯症狀突然死亡。

2、急性型

體溫升高至40-42℃，精神沉鬱，食慾不振，嗜睡喜卧，耳、四肢、胸部、腹部、尾部皮膚有出血點，發紺，眼睛、鼻腔處有黏液膿性分泌物流出。嘔吐，便秘，糞便表面覆蓋有血液和黏液，或腹瀉，糞便帶血。步態僵直，呼吸急促、困難，病情較長時，出現神經症狀。

3、亞急性型

體溫波動無規律，一般在40.5℃以上。精神沉鬱，食慾不振，呼吸窘迫， 濕咳，關節疼痛、腫脹。

4、慢性型

輕度發燒，呼吸困難，身形消瘦或發育遲緩，體弱，關節腫脹，局部皮膚潰瘍、壞死。

Ⅸ 測非洲豬瘟為啥要用抗凝管

在非洲豬瘟檢測時，豬抗凝全血樣品在經過水浴滅活後有時會產生凝膠，影響實驗的開展。從保存時間及保存溫度兩個方面對380份豬抗凝全血樣品的檢測過程進行分析，發現樣品保存於零度及以下環境和水浴滅活過程會對凝膠的產生有顯著影響。

Ⅹ 等溫擴增法檢測非洲豬瘟的操作

1、6.1樣品的採集、前處理、存放與運輸
2、6.1.1采樣注意事項，採集樣品及樣品前處理過程中應戴一次性手套，樣本間不得交叉污染。
3、6.1.2采樣工具15ml離心管和1.5ml離心管經121，1攝氏度高壓滅菌20min，剪刀、鑷子經160攝氏度乾熱滅菌2h，無菌管（真空采血管）。
4、6.1.3組織病料的採集與前處理採集疑似非洲豬瘟病毒感染豬的肺臟、肝臟、腎臟、脾臟等組織樣品，用無菌的剪刀和鑷子剪取待。