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流式cba檢測用的什麼儀器

發布時間:2022-11-16 03:53:41

㈠ 採用流式檢測方法中哪種儀器可以檢測到外泌體的細小顆粒

運用流式檢測方法的有很多種檢測儀器,其中納米流式檢測儀是相對於其他儀器檢查中檢測精度最高也最精確的一款儀器,對外秘體及細胞外囊泡、細菌病毒都有很好的檢測效果。而這個儀器是廈門一家公司研發生產。

㈡ 四色通道的流式細胞儀如何測多個細胞因子

每個抗體分別標記不同的,你機器可別識別的熒光染料。細胞固定,通透後就可檢測了。要有嚴格的對照。你如果問的再具體點,我可以給你提供指導。

㈢ 測細胞因子含量常用的 elisa 方法為

有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題,他之前用ELISA 檢測細胞因子的話,發現樣本量需求很多,然而有些樣本量又比較少怎麼辦呢,那麼接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優缺點,供各位大大們閱讀參考啦~

細胞因子(cytokine,CK):是由免疫細胞(如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等)和某些非免疫細胞(內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)經刺激而合成(一般是免疫細胞)、分泌的一類生物活性物質分泌的蛋白質,在體內廣泛參與免疫調節及炎症反應、組織修復、刺激造血系統、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動,在抵抗外來病原及維持機體內環境平衡中均起重要作用。

細胞因子的作用方式:自分泌作用、旁分泌作用、內分泌作用。

細胞因子的作用特點:多效性、重疊性、協同性、拮抗性和雙重性。

根據產生細胞因子的細胞種類不同分類:白細胞介素(interleukin, IL)、干擾素(interferon, IFN)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)、轉化生長因子-β家族(transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF)、趨化因子(chemokinefamily)、生長因子(growth factor,GF)等。

細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學(重點介紹)

1、生物學測定法 其原理是根據細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或對病毒的抑製作用進行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。

2、分子生物學測定法 目前採用的技術有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。

3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用於細胞因子的檢測。

細胞因子的檢測方法對比

1、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)

原理:使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。由於酶的催化頻率很高,故可放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。

優點:避免特異性抗體直接標記,便宜。

缺點:所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯反應所致的人工假象

2、流式細胞儀(CBA)

原理:利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒——待測物復合體所散發的熒光,從而測定待測物的數量。

優點:所需樣本量少、快速(實驗6-8h可以完成)操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效(同一個樣品可以同時檢測多個因子)、安全、接近生物體的分析條件(全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反應了體內狀況)。

㈣ 檢測方法:LIA. TBA. CBA分別是什麼方法,請教一下

摘要 CBA:利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒——待測物復合體所散發的熒光,從而測定待測物的數量。

㈤ 請問Luminex與CBA有何區別

博凌科為生物科技-為你解答:Luminex與CBA的比較Luminex和CBA是兩種最近幾年來比較熱門的檢測細胞因子的技術,兩者之間的大致區別: CBA: 可在流式細胞儀檢測。 可同時檢測一個標本中的6-8種細胞因子 可檢測50ml的標本(上清液) 檢測范圍:0-5000 pg/ml Luminex: 只能運行在Luminex機器上(or Bioplex from Biorad) 可檢測20-22種細胞因子 可檢測25-50 ml的標本 檢測范圍:0-1667pg/ml

㈥ 納米粒子能夠在流式細胞儀中表現出來嗎

觀察納米粒子需要特殊的手段。如果用流式觀察,需要先用定製的微球珠吸附後,在通過抗體染色,可以觀察到。

另外就是使用特殊的儀器,比如nanosight,可以直接觀察到

㈦ CBA法檢測原理

CBA能夠基於應用層智能地過濾TCP/UDP包,甚至過濾的連接可以從被保護的網路發起.所以CBA可以檢測防火牆任意一邊發起的流量.

㈧ 用流式細胞儀檢測細胞凋亡

請看維基網路相關記述:

流式細胞術
維基網路,自由的網路全書
(重定向自流式細胞儀)
Jump to: navigation, search
Image:03wiki-zn-frontpage-icon.gif流式細胞術正在翻譯。
目前已翻譯90%,原文在en:flow cytometry。希望您積極翻譯與修訂。

流式細胞術(英文flow cytometry)是一種生物學技術,用於對懸浮於流體中的微小顆粒進行計數和分選。這種技術可以用來對流過光學或電子檢測器的一個個細胞進行連續的多種參數分析。
目錄
[隱藏]

* 1 原理
* 2 流式細胞儀(flow cytometer)
* 3 應用
* 4 參見

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原理

一束單色光(通常是激光)照到流體力學聚焦的一股流體上。若干個檢測器瞄向流束和激光相交的這個點,其中一個和激光在同一直在線(稱作前散射(FSC)),其它幾個和激光垂直(旁散射(SSC)和一個或幾個熒光監測器)。當每個懸浮顆粒通過光束時會按某種方式把光散射,同時所帶有的熒光化合物被激發並發射出頻率低於激發光的熒光。這些散射光和熒光的組合數據被檢測器記錄,根據各檢測器亮度的波動(每個細胞會顯出一個散射或熒光的峰)就能夠推算出每個顆粒的物理和化學性質。前散射與細胞體積相關,而旁散射取決於顆粒的內部復雜程度(比如核的形狀、胞質內顆粒的種類或者末的粗糙程度)。

可以檢測的參數有:

* 細胞的體積和形態復雜程度
* 細胞中的色素
* DNA(細胞周期分析、細胞動力學、細胞增殖等)
* RNA
* 染色體分析和分選(文庫構建、染色體塗染)
* 蛋白質
* 細胞表面抗原(CD標記)
* 胞內抗原(各種細胞因子(cytokine)、次級媒介等)
* 核抗原
* 酶活性
* pH,胞內離子化的鈣、鎂,膜電勢
* 膜流動性
* 細胞凋亡(apoptosis)(定量檢測DNA降解、線粒體膜電位、通透性變化)
* 細胞存活能力
* 監測細胞電通透性
* 氧爆作用(oxidative burst)
* 研究癌細胞中的多重耐葯性(multi-drug resistance, MDR)
* 谷胱甘肽
* 各種組合(DNA/表面抗原等等)

這個列表非常長,而且在不斷地擴展。
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流式細胞儀(flow cytometer)

流式細胞儀又稱熒光激活細胞分選器、熒光活化細胞分類計(FACS,Fluorescence Activated Cell Sorter)。

現代的流式細胞儀每秒可以實時檢測幾千個顆粒,並且可以主動分離具有不同特性的顆粒。

流式細胞儀和顯微鏡比較像,但能夠對大量的單個細胞利用一組參數進行高通量的自動量化。固體組織需要在檢測前制備成單細胞的懸浮液。

一個流式細胞儀包括五個組成部分:

* 細胞流動系統:液流(鞘液(sheath fluid))攜帶細胞,使顆粒以串流形式通過光束。
* 光源:有通常的燈(汞或氙)、高功率水冷的激光源(氬、氪、染料激光)、低功率氣冷激光(氬(488nm),紅氦氖(633nm),綠氦氖,氦鎘(紫外))、偶極激光(藍、綠、紅、紫)。
* 檢測和模數轉換(analogue-to-digital conversion, ADC)系統:產生前散射、旁散射光和熒光的信號。
* 放大系統,線性或對數放大。
* 計算機,用於分析信號。

早期的流式細胞儀主要是實驗設備,但目前儀器和相關的試劑有了很廣的市場。不同廠商的儀器特性也不同,主要的廠商和品牌如下:

* Beckman-Coulter (ex-Coulter): Epics XL/XL-MCL; Epics Altra (Hypersort) (IBM-PC compatible platforms)
* Becton, Dickinson: (FACS's): FACSCAlibur, FACScan, FACSort, FASCSVantage (Mac OS platform) FACS Canto, LSRII, Aria, DiVa (PC PLatform)
* Cytomation: MoFlo, Cyan (IBM-PC platform)
* Partec/Dako: Galaxy; PAS; CCA; PA (IBM-PC compatible platforms)

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應用

流式細胞術在很多領域中都有應用,包括分子生物學、病理學、免疫學和海洋生物學等。在分子生物學中,它主要用於熒游標記的抗體。特異性的抗體與靶細胞上的抗原結合,能夠通過流式細胞儀研究這些細胞的特別信息。這在醫學(尤其是器官移植、血液學、腫瘤免疫學和化療、遺傳學)中具有很廣泛的應用。

現代的流式細胞儀具有多個激光和熒光檢測器(目前商業用儀器的記錄是4個激光和14個檢測器),可以用於多個抗體標記,以便在表現型中更准確地區別某個靶群體。

流式細胞儀也是很有用的分選儀器。當細胞/顆粒通過時,可以被選擇性地加上某種電荷,並在通過電磁場後偏轉,從不同出口流出。這樣就可以從一個混合物中高速(理論上可達到每秒大約9萬個細胞)准確地分離開四類細胞。

由流式細胞儀得到的數據可以畫成一維的柱狀圖或者二位或者三維的散點圖。

The data coming from flow-cytometers can be plotted in 1-D to proce histograms or seen in 2D as dot plots or in 3D with newer software. The regions on these plots can be sequentially separated by a series of subset extractions which are termed gates. Specific gating protocols exist for diagnostic and clinical purposes especially in relation to haematology. The plots are often made on logarithmic scales. Because of overlaping fluorescent dyes, emission spectrum generated interfering signals by detectors signals have to be compensated electronically.

海洋中主要的光合生物之一——占海洋浮游生物總細胞數將近1/3的原綠球藻(Prochlorococcus)就是通過流式細胞術發現的。因為其細胞小,葉綠素含量少,在通常的熒光觀察中被迅速漂白(bleach),但由於在流式細胞術中細胞通過光束的時間極短,胞內葉綠素的熒光可被觀察到。
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參見

* 熒光顯微鏡
* 熒光活化細胞分選

取自"http://wikipedia.cnblog.org/wiki/%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%A1%93"

頁面分類: 待翻譯文章 | 細胞生物學 | 實驗室技術 | 解剖病理學 | 血液學 | 醫學檢驗

㈨ 如何通過流式細胞術測定炎性因子的量

現在最常用的是採用熒光微球為基礎的系統,可以同時檢測數十種細胞因子。有好幾個廠家都有出品。
比如BD公司出的BD™ Cytometric Bead Array (CBA)

㈩ 流式細胞儀的原理是什麼

最近一直在了解流式細胞術和流式分選的知識,看到這個問題想回答一下:

流式細胞儀是以流式細胞術為基礎,快速精確的對單個細胞的理化性質進行定量分析和分選。分析流程為:制備單細胞懸液,用特異性熒光染料標記的抗體進行染色,經染色後的待測細胞在一定氣體壓力下被壓入流動室,在鞘液的包裹下細胞呈單行排列,依次通過檢測區域,在激光束的照射下細胞會產生散射光和激發熒光。這兩種信號會同時被光電倍增管( PMT) 接收。接收後可轉換為電信號,通過模/數轉換器,將連續的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號,進行分析。

如上所述,流式細胞儀是由液流系統、光路系統以及檢測分析系統三部分組成,部分儀器還具有分選功能,能對粒子進行充電和偏轉從而實現細胞分選。

  1. 液流系統:通過產生壓力使含有目的細胞的樣本快速進入儀器,在封閉的樣品管中利用樣品和鞘液之間的壓力差是樣本聚集到光學分析系統;

  2. 光路系統:由不同的激光器發射出的激光照射到細胞表面產生光信號,而後經過不同的光路系統被接收。在流式照射室的分析點,激光照射到細胞表面發生散射和折射,並發射出散射光包括前向散射光(FSC)和側向散射光(SSC),同時細胞表面的熒光素被激發發射出熒光。前向散射光和側向散射光檢測器收集散射光轉變為電信號;熒光則被聚光器收集,不同顏色的熒光被雙色反光鏡轉向不同的光電倍增檢測器,將熒光信號也轉變成電信號。FSC和SSC是流式分析中兩個非常基本的參數。FSC的值能代表細胞的大小,細胞的體積越大則FSC就越大。SSC則代表細胞的顆粒度,細胞內細胞器和顆粒度越大則SSC越大。

  3. 檢測分析系統:熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原強度或細胞內物質的濃度,光信號轉換為可被計算機識別的電信號。計算機把所測量的各種信號進行處理分析。

  4. 流式細胞分選是在流式細胞術的基礎上進行的。在流動室的噴口上方配有一個超高頻的壓電晶體,產生的振動使噴出的液流形成均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷(對標有熒光素的細胞液滴帶以負電荷;未標記熒光素的細胞液滴帶以正電荷;而不含有細胞的液滴則不被帶電荷),當液滴流經偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,不帶電荷的液滴落入廢液容器,從而實現細胞的分離。

    第一次回答希望能幫到你,如有理解不當的地方,歡迎指正!

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