脂質體分析主要用什麼儀器

Ⅰ 求脂質體制備工藝的流程圖

1被動載葯法

脂質體常用制備方法主要有薄膜分散法、反相蒸發法、注入法、超聲波分散等。在制備含葯脂質體時，首先將葯物溶於水相或有機相中，然後按適宜的方法制備含葯脂質體，該法適於脂溶性強的葯物，所得脂質體具有較高包封率。

1.1薄膜分散法

此法最初由Bangham等報道，是最原始但又是迄今為止最基本和應用最廣泛的脂質體的制備方法。將磷脂和膽固醇等類脂及脂溶性葯物溶於有機溶劑，然後將此溶液置於一大的圓底燒瓶中，再旋轉減壓蒸干，磷脂在燒瓶內壁上會形成一層很薄的膜，然後加入一定量的緩沖溶液，充分振盪燒瓶使脂質膜水化脫落，即可得到脂質體。這種方法對水溶性葯物可獲得較高的包封率，但是脂質體粒徑在0.2～5μm之間，可通過超聲波儀處理或者通過擠壓使脂質體通過固定粒徑的聚碳酸酯膜，在一定程度上降低脂質體的粒徑。

1.2超聲分散法

將磷脂、膽固醇和待包封葯物一起溶解於有機溶劑中，混合均勻後旋轉蒸發去除有機溶劑，將剩下的溶液再經超聲波處理，分離即得脂質體。超聲波法可分為兩種「水浴超聲波法和探針超聲波法」，本法是制備小脂質體的常用方法，但是超聲波易引起葯物的降解問題。

1.3冷凍乾燥法

脂質體混懸液在貯存期間易發生聚集、融合及葯物滲漏，且磷脂易氧化、水解，難以滿足葯物制劑穩定性的要求。1978年Vanleberghe等首次報道採用冷凍乾燥法提高脂質體的貯存穩定性。目前，該法已成為較有前途的改善脂質體制劑長期穩定性的方法之一。

脂質體冷凍乾燥包括預凍、初步乾燥及二次乾燥3個過程。凍干脂質體可直接作為固體劑型，如噴霧劑使用，也可用水或其它溶劑化重建成脂質體混懸液使用，但預凍、乾燥和復水等過程均不利於脂質體結構和功能的穩定。如在凍干前加入適宜的凍干保護劑，採用適當的工藝，則可大大減輕甚至消除凍干過程對脂質體的破壞，復水後脂質體的形態、粒徑及包封率等均無顯著變化。單糖、二糖、寡聚糖、多糖、多元醇及其他水溶性高分子物質都可以用做脂質體凍干保護劑，其中二糖是研究最多也是最有效的，常用的有海藻糖、麥芽糖、蔗糖及乳糖。本法適於熱敏型葯物前體脂質體的制備，但成本較高。陳建明等［1］以大豆磷脂為膜材，以甘露醇為凍干保護劑，採用凍干法制備了維生素A前體脂質體，復水化後平均粒徑為0.6151μm，包封率98.5%。林中方等［2］採用凍干法制備了鬼臼毒素體脂質體，復水化後平均粒徑為1.451μm，包封率72.3%，但是這種方法仍然存在著不足之處，例如脂質體復水化後粒徑分布不夠均勻。

1.4凍融法

此法首先制備包封有葯物的脂質體，然後冷凍。在快速冷凍過程中，由於冰晶的形成，使形成的脂質體膜破裂，冰晶的片層與破碎的膜同時存在，此狀態不穩定，在緩慢融化過程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成脂質體。何文等［3］分別用反相蒸發法、乳化法和凍融法制備了甲氧沙林脂質體。通過研究發現，凍融法制備的脂質體的包封率最高，但是粒徑最大。反復凍融可以提高脂質體的包封率，王健松［4］制備了阿奇黴素脂質體，實驗發現，經3次重復凍融後，阿奇黴素脂質體的包封率從61.4%增加到78%，但是當凍融次數增加到4次，包封率變化很小。該制備方法適於較大量的生產，尤其對不穩定的葯物最適合。

1.5復乳法

此法第1步將磷脂溶於有機溶劑，加入待包封葯物的溶液，乳化得到W/O初乳，第2步將初乳加入到10倍體積的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，然後在一定溫度下去除有機溶劑即可得到脂質體。Kim［5］用乳化法製得脂質體的包封率比較高，但是粒徑較大。Tomoko等［6］通過研究發現，第2步乳化過程和有機溶劑的去除過程的溫度對脂質體的粒徑有比較大的影響，較低的溫度有利於減小脂質體的粒徑，通過控制溫度可以製得粒徑為400nm，包封率達到90%的脂質體。

1.6注入法

將類脂質和脂溶性葯物溶於有機溶劑中（油相），然後把油相均速注射到水相（含水溶性葯物）中，攪拌揮盡有機溶劑，再乳勻或超聲得到脂質體。根據溶劑的不同可分為乙醇注入法和乙醚注入法。

乙醇注入法避免了使用有機溶劑，丁麗燕［5］用乙醇法制備了司帕沙星脂質體，通過研究發現慢速注入可製得具有較高包封率的脂質體，其包封率為47%。

乙醚注入法制備的脂質體大多為單室脂質體，粒徑絕大多數在2μm以下，操作過程中溫度比較低（40℃），因此，該方法適用於在乙醚中有較好溶解度和對熱不穩定葯物，同時通過調節乙醚中不同磷脂的濃度，可以得到不同粒徑且粒徑分布均勻的脂質體混懸液［8］。

1.7反相蒸發法

最初由Szoka提出，一般的製法是將磷脂等膜材溶於有機溶劑中，短時超聲振盪，直至形成穩定的W/O乳液，然後減壓蒸發除掉有機溶劑，達到膠態後，滴加緩沖液，旋轉蒸發使器壁上的凝膠脫落，然後在減壓下繼續蒸發，製得水性混懸液，除去未包入的葯物，即得大單層脂質體脂質體。此法可包裹較大的水容積，一般適用於包封水溶性葯物、大分子生物活性物質等。

1.8超臨界法

傳統的脂質體制備方法，必須要使用氯仿，乙醚、甲醇等有機溶劑，這對環境和人體都是有害的。超臨界二氧化碳是一種無毒、惰性且對環境無害的反應介質。嚴賓等［9］用超臨界法制備了頭孢唑林鈉脂質體，將一定量的卵磷脂溶解於乙醇中配得卵磷酯乙醇溶液，與頭孢唑啉鈉溶液一起放入加入高壓釜中，將高壓釜放入恆溫水浴中，通入CO2。在其超臨界態下孵化30min，制備脂質體。採用超臨界CO2法制備的包封率高、粒徑小，穩定性增強。

2主動載葯

對於兩親性葯物，如某些弱酸弱鹼，其油水分配系數介質pH和離子強度的影響較大，用被動載葯法製得的脂質體包封率低。

主動載葯是利用兩親性的葯物，能以電中性的形式跨越脂質雙層，但其電離形式卻不能跨越的原理來實現的。通過形成脂質體膜內、外水相的pH梯度差異，使脂質體外水相的葯物自發地向脂質體內部聚集。

此法通常用脂質體包封酸性緩沖鹽，然後用鹼把外水相調成中性，建立脂質體內外的pH梯度。葯物在外水相的pH環境下以親脂性的中性形式存在，能夠透過脂質體雙層膜。而在脂質體內水相中葯物被質子化轉為離子形式，不能再通過脂質體雙層回到外水相，因而被包封在脂質體中。主動載葯法廣義上就是指pH梯度法。人們把其細分為：（1）pH梯度法；（2）硫酸銨梯度法；（3）醋酸鈣梯度法。其中硫酸銨梯度法和醋酸鈣梯度法只是pH梯度法的兩種特殊形式。

2.1pH梯度法

pH梯度法通過調節脂質體內外水相的pH值，形成一定的pH梯度差，弱酸或弱鹼葯物則順著pH梯度，以分子形式跨越磷脂膜而使以離子形式被包封在內水相中。

趙妍等［10］用以pH梯度法制備硫酸長春新鹼脂質體，其包封率大於85%，而被動載葯法制備的硫酸長春新鹼脂質體的包封率最高為14.4%。Jia等［11］用pH梯度法內水相pH0.5%外水相pH4.0制備了卡苯達唑脂質體，包封率高於95%。杜松等［12］用pH梯度法制備鹽酸去氫駱駝蓬鹼脂質體，包封率大於80%，研究表明，雖然製得的脂質體沒有加強葯物的抗癌活性，但是大大降低了其毒副作用。

跨膜pH梯度是影響包封率的最主要因素，通常pH梯度越大，載入脂質體內的葯物越多，包封率也越高。制備伊立替康脂質體時［13］，當pH梯度≥3.7時包封率達97%以上，當pH梯度＜2時，包封率不到5%；Mamyer等［14］在研究中發現通過跨膜pH梯度法制備多柔比星脂質體，pH梯度達到3.5時包封率達98%，降低內水相緩沖液的pH可增大pH梯度，但會加劇磷脂的水解，降低脂質體的穩定性。

此外，葯物自身性質如油水分配系數、膜滲透性等亦可影響包封率。Quan等［15］用pH梯度法制備多巴胺脂質體，由於多巴胺親水性較強，無法直接克服能量壁壘穿過脂質雙分子層進入內水相，但與拉沙洛西（lasalocid)結合形成復合物可暴露出親脂性表面，即可穿過脂質膜進入脂質體，包封率提高到85%。氧化苦參鹼水溶性較大，脂溶性較弱，因此採用pH梯度法制備脂質體包封率只有50%［16］。

希望您能夠採納！！

Ⅱ 制備脂質體為什麼要用pbs不直接用去離子水

、脂質體離

適化結構親脂性葯物鑲嵌雙層膜內包裹脂質體其包封率取決於所用脂質濃度種情況包封率達90％定要除未包裹葯物水溶性葯物言包裹葯物僅總量部必須脂質體懸液除未包裹葯物由於脂質體比包裹葯物要利用同離除未包裹葯物些凝膠濾柱層析滲析等；若包裹物質蛋白質或DNA或者未包裹葯物能形較聚結物則利用與脂質體浮力、密度同採用諸離等進行離

()柱層析

凝膠滲透層析技術廣泛用於脂質體懸液離除未包裹葯物用於懸液脂質體組技術實驗室效且快速規模產雖用凝膠濾純化技術較困難且價格昂貴另外脂質體洗脫介質稀釋能需要增加濃縮步驟
柱層析填料用葡聚糖Sephadex G-50其步驟與規致必須指：①葡聚糖表面存著能與脂質體膜結合並相互作用微部位雖種作用並影響脂質體凝膠柱流特徵仍導致少量脂質損失使膜穩定性增加導致膜滲透性改變及包裹物質滲漏種現象脂質濃度較低情況特別應予注意般通加脂質體品柱量或用空脂質體預先柱飽解決通使用20mg脂質制單層脂質體飽10g凝膠；②若凝膠顆粒太細較脂質體能滯留凝膠柱層脂質體宜選用粗級凝膠(粒徑50～150μm)單層脂質體則用任何級別凝膠

(二)滲析

簡單用除未包裹葯物(化合物除外)需要復雜技術須昂貴儀器且能夠擴產通斷改換滲析介質除所游離葯物費般室溫條件要除95％游離葯物至少需要更換三滲析介質間10～24h外滲析介質滲透強度應與脂質體懸液致否則滲析改變脂質體懸液體積且能引起包裹物質滲漏

(三)離

同離力離離除同種類脂質體游離葯物效完全除游離葯物需重復懸浮離使脂質體沉所需離力取決於脂質體某種程度取決於混懸液絮凝狀態脂質體且布窄需要高速離及冰凍條件低速(2000～4000r／min)離能使脂質體沉降
顯於量脂質體利用高速冰凍離極其耗能昂貴適於離脂質體於比較脂質體低速離縮短操作間並且同較稀脂質體懸液濃縮所需濃度避免脂質體遭破壞必須注意保證重復混懸介質滲透壓與脂質體懸液滲透壓相致

二、脂質體包封率測定

()百包封率測定

顯考查包裹物質物體內行前必須測定該物質脂質體量採用述離除未包入脂質體游離物質利用式計算百包封率(Encapsulation percentageEN％)

EN％=(1Cf／Ct)×100％

式Cf游離葯物量；Ct脂質體懸液葯物總量
再介紹兩種快速、用量少且適應性廣離游離物質並測定EN％

1．微型柱離(minicolumn centrifugation method)

取塑料注射針筒填濾膜作襯片裝入用理鹽水溶脹Sephadex G-50再針筒置離管低速離(2000r／min3min)除余理鹽水凝膠柱變干並能與針筒內壁離精確定量加入脂質體品注意勿滴入柱床邊緣離(2000r／min3min)使脂質體進入離管待測再凝膠柱加入少量理鹽水依離離液能再脂質體或仍含少量主要取決於脂質體及組游離葯物程葡聚糖吸附離凝膠柱再加理鹽水離使柱干游離葯物洗脫進入離液反復幾直至全部游離葯物均柱離洗脫別測定包封葯物及游離葯物濃度計算EN％(圖20—10)

微型柱離優點脂質體懸液幾乎沒稀釋於實驗室規模試驗較用離除未包裹葯物快速測定包封率

2．魚精蛋白凝聚(protamine aggregation)

用於任何組脂質體性或帶負電荷脂質體(圖20－11)：

取0.1ml脂質體懸液於10ml錐形離管加入0.1ml魚精蛋白溶液(10mg／ml)攪勻靜置3min再加3ml理鹽水室溫條件離吸取2ml清液測定游離葯物濃度剩餘清液棄沉澱物0.6ml 10％ Triton X-100重新混懸使脂質體膜材溶解再補充理鹽水至總體積3.2ml測定包封葯物濃度便算EN％

(二)包裹容積測定

包裹容積(entrapped volume)指制脂質體相於每毫克磷脂所佔內水相體積般微升(μl)表示包裹容積計算通測定包裹脂質體內葯物總量推測假設脂質體內水性介質葯物濃度與始制備所用葯物濃度經離除未包裹葯物沒物質脂質體滲漏則容易計算許情況假設往往能立例用二乳化制備脂質體乾燥除機溶劑內水相能失；另外由於內外滲透壓差異水進入或逸脂質體測定內部容積辦直接測定水量例利用具光譜性液體代替內相介質利用核磁共振(NMR)測定測水量脂質體高速離(200000g6h)沉降緊密沉澱除盡清液沉澱物D20(deuterium oxide)重新混懸由於膜於水滲透性使整體系H20D20快達平衡取少量用於磷脂量測定剩餘部作水NMR掃描峰高與D20含水濃度比與標准溶液照即求水量計算脂質體包裹容積

三、脂質體穩定性

脂質體放置程能發種同變化磷脂質氧化水解短鏈磷脂並膜形具溶解性衍物；另外脂質體發凝聚、融合等物理變化導致包裹物質滲漏脂質體制劑若要發展產品應市必須貯藏期間具良穩定性；體內達靶組織前或發揮其緩釋作用前亦須保持定及完整性已證明脂質體血液比較穩定隨磷脂化性質、膽固醇比例脂質體、雙層數目等同脂質體體內穩定性所同若貯存程葯物脂質體迅速滲漏則必限制脂質體應用價值

()化穩定性

脂質體組磷脂氧化降解應制備即加防止採用些措施盡能降低氧化程度例使用新鮮提純磷脂新鮮蒸餾溶劑盡量避免高溫並充氮氧條件完制備程脂質體貯存於惰性環境等
膜材組加入抗氧劑種效目前用抗氧劑α-育酚種毒食用脂質據認蛋卵磷脂氧化解α-育酚加入減緩另選擇降低氧化程度使用飽磷脂代替飽磷脂源磷脂其飽度隨植物、蛋黃、哺乳物依增加於蛋黃磷脂飽度取決於物飼料及所用提純
論飽飽磷脂脂質體水性懸液都能水解形溶血磷脂脂肪酸溶血磷脂進步水解形甘油磷脂脂肪酸甘油磷酸間酯鍵難水解所產游離磷酸甘油精製豆磷脂脂質體水性懸液水解力已研究結表明豆磷脂水解主要受H+OH+催化作用pH6.5左右水解速率體系加入緩沖離醋酸、枸櫞酸緩血酸銨輕度增加豆磷脂水解

(二)物理穩定性

脂質體包裹葯物滲漏凝聚、融合團塊等物理穩定性問題脂質體研究工作難題些研究表明單層脂質體貯存體積增葯物滲漏與脂質及包裹葯物性質關由性磷脂制備脂質體凝聚主要由於范德華力相互作用所致膜材加入少量負電荷磷脂(10％PA或PG)克服膜材加入微量1,3-二乙醯-2-磷脂醯膽鹼阻止較脂質體融合
較脂質體制備適條件般發融合於40nm單層脂質體由於膜曲率易於發融合特別相變溫度更易發
採用前體脂質體等重建脂質體較避免脂質體貯存發化物理變化重建脂質體三種類型：含葯或含葯干脂質膜；含葯或含葯凍干脂質混合物：含葯凍干脂質體於干脂質膜或凍干脂質混合物重建所獲葯物包封率限特別親水性葯物包封率高懸液含較游離葯物實際應價值於具適結構親脂性葯物重建產品達較滿意包封率重建程所需條件例攪拌程度要求高溫超聲處理等實際應用甚便
於親水性葯物選擇含葯凍干脂質體重建形式報道冰凍程若加入親水性聚合物葡聚糖能產自由流能利於凍干脂質體水性介質重建例含胰島素凍干脂質體用種處理其重建包封率達原70％即冰凍重建程胰島素滲漏率約30％包裹低量葯物滲漏率能更高些種技術保證脂質體制劑貯存穩定性提供效

四、脂質體測定

脂質體影響脂質體體內處置脂質體重要質量指標測定脂質體激光掃描電顯微鏡或庫爾特粒度析疑電鏡測定準確直接觀察每脂質體並獲各范圍內脂質體外形精確信息要觀察量脂質體本非費相反．激光掃描非簡單且操作快速僅能測脂質體平均性質與類似採用庫爾特粒度析儀測脂質體布二種均難描述更精細結構關於粒度測定細節參見本書第十二章

五、脂質體析

()磷脂質析

1．含量測定

直接精確測定磷脂質濃度比較困難乾燥磷脂總含定量殘留溶劑或其雜質磷脂廣泛使用測定磷脂非直接例含磷量測定於制備脂質體數磷脂言每摩爾磷脂均含1mol磷僅別例外每摩爾磷脂含2mol磷品磷脂濃度通測定磷含量計算介紹二種磷測定

(1)Bartlett

磷脂機磷酸解機磷加入鉬酸銨使轉化磷鉬酸磷鉬酸用萘磺酸銨定量原藍色藍色強度由光光度測定與標准品(磷酸二氫鉀)照即計算含磷量該靈敏度較高且重現性若品含少量機磷則干擾測定

(2)Stewart

脂質體混懸於磷酸鹽緩沖液宜採用Stewart該利用磷脂機溶劑與亞鐵硫氰酸銨形色復合物受機磷存影響進行測定計算使用與磷脂結構關轉換吸收值換算磷脂毫克數該隨磷脂基同異利用磷脂標准液繪制標准曲線計算該適於測定含未知磷脂混合物特別須指該能用於甘油磷脂測定若脂質體含卵磷脂甘油磷脂則用該前者定量再通Bartlett測定總磷脂計算甘油磷脂量

2．磷脂質薄層層析

薄層層析檢查磷脂質純度主要手段與所層析磷脂質薄層層析利用磷脂液態機相親水性固定相同親性液相固定相展同磷脂具同保留間根據親水性強弱改變展劑組改變磷脂兩相配系數用固定相硅膠展劑則用含氯仿溶劑①氯仿：甲醇：水：(65：25：4 V／V)；②氯仿：甲醇：水：氨水(65：35：2.5：2.5 V／V)；③氯仿：丙酮：甲醇：醋酸：水(6：8：2：2：1 V／V)；④乙酸乙酯：環烷(1：1 V／V)等用顯色劑碘用50％硫酸 - 甲醇液或重鉻酸鉀液顯色

(三)磷脂氧化程度

1．磷脂氧化

磷脂脂肪酸氧化主要由於游離基作用電磁波輻射或者微量游離金屬離催化脂肪酸碳鏈首先脫氫原形游離基進與空氣氧發連鎖反應含雙鍵碳鏈更易受影響聚合飽磷脂特別容易氧化降解含單或飽脂肪酸脂質混合物磷脂氧化三階段進行：①單雙鍵偶合；②氧化物形；③形乙醛及鏈斷裂
值注意氧情況仍發游離基反應導致雙重或三重偶合形產氧化物另外降解步程要消耗偶合雙鍵終降解產物增加同笫步降解產物減少故難用種試驗評估磷脂氧化程度甚至即使應用幾同試驗仍僅能致估計氧化程相速率

2．氧化指數測定

氧化指數用檢測游離基偶合指標氧化偶合磷脂230nm左右具紫外吸收峰別於未氧化磷脂典型紫外吸收圖譜圖20－12

內提作制備脂質體膜材卵磷脂其氧化指數應控制0.2測定磷脂溶於水乙醇配定濃度澄明溶液別測定波233nm及215nm吸收值按式計算：
氧化指數 = A233nm／A215nm

3．氧化物測定

卵磷脂氧化產丙二醛及溶血磷脂等丙二醛(MDA)酸性條件與硫巴比妥酸(TBA)反應種紅色染料(TBA-Pigment)

該化合物波535nm處特異吸收吸收值即反映磷脂氧化程度丙二醛量與溶血間關系進行研究實驗證明每毫升含卵磷脂理鹽水丙二醛含量超2.3μg37℃放置1～2h即產溶血
除述估計磷脂氧化程度外根據聚合飽脂肪酸鏈氧化階段發斷裂或縮短用氣 - 液色譜解些醯基鏈變化

(四)膽固醇析

與磷脂質類似膽固醇純度及其氧化產物用氣 - 液色譜進行檢測另外由於膽固醇論游離型酯化型都能與含高氯酸鐵乙酸乙酯硫酸試劑反應鐵復合物波610nm處紫外吸收採用標准膽固醇溶液照計算膽固醇量

六、脂質體滅菌

許研究論文都認脂質體宜用加熱滅菌辦且各類輻射及各種化滅菌劑敏所能使用濾滅菌或採用菌操作進行制備影響脂質體廣泛應用於臨床重要原
近內採用100℃ 30min濕熱滅菌獲功滅菌前脂質體形態及均明顯變化滲漏率約5％另採用輻射滅菌即用60鈷發γ射線三磷酸腺苷脂質體甲氨蝶呤脂質體作輻射滅菌照射劑量15～20kGy菌試驗結均由試驗前陽性轉陰性脂質體粒徑滅菌前顯著變化滅菌所致滲漏率較
滅菌實用性能與混懸介質種類、磷脂組及純度等關採用121℃加熱20min滅菌處理幾種脂質體發現理鹽水脂質體發凝聚等滲糖溶液羥基化合物溶液發凝聚加熱滅菌具較高氧化物值含蛋卵磷脂散液稍變黃改用具低氧化物值蛋卵磷脂、氫化蛋卵磷脂或DPPC則變化性pH充入氮氣阻止顏色變化加入α-育酚效經0.4μm膜濾由蛋卵磷脂組脂質體變變化介質類型明顯影響加熱滅菌期間包裹羧基熒光素陰離負電荷脂質體(PC／chol／PG)發滲漏使用電荷脂質體(PC／chol／十八胺)僅加熱滅菌期間發滲漏且貯存間滲漏
感覺這樣的提問是沒有意義的
還是自己找下資料吧

Ⅲ 如何制備氯硝柳胺脂質體,用薄膜分散法或者乙醇注入法可以么,需要用到什麼儀器

分別採用薄膜分散法、逆相蒸發法、乙醇注入法、乙醚注入法和熔融法制備新疆紫草提取物（AEE）脂質體,以包封率、形態、粒徑分布等為指標比較5種方法的適用性。結果：薄膜分散法、逆相蒸發法、乙醇注入法與乙醚注入法製得的脂質體形態較完整,大小較均勻;其中乙醇注入法制備的AEE脂質體包封率最高,為（63.53±0.71）%。結論：乙醇注入法適合於AEE脂質體的制備。

Ⅳ 關於制備脂質體的問題

美國Genzyme人工合成磷脂在中國的長期供應商是西安瑞禧生物科技有限公司，以下資料由西安瑞禧科技提供。
美國Genzyme公司磷脂類產品列表：
DLPA,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-121
DMPA,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-024
DPPA,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-025
DSPA,Na 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-026
DLPG,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)(Sodium Salt)
DMPG,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DMPG,NH4 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)Ammonium Salt)
DPPG,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DSPG,Na 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3[Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DPPS,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoserine (Sodium Salt)
DSPE 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DPPE 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DOPE 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DMPE 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DPPC 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
DPPC 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
註：以上磷脂純度≥99%
公司：西安瑞禧生物科技有限公司

Ⅳ 急!!!脂質體粒徑怎麼測比較准確啊

一、脂質體的分離

適當化學結構的親脂性葯物是鑲嵌在雙層膜內而被包裹在脂質體中，其包封率取決於所用脂質的濃度。在這種情況下，包封率可達到90％，就不一定要除去未包裹葯物。但是對水溶性葯物而言，被包裹的葯物僅是總量中的一部分，就必須從脂質體懸液中除去未包裹葯物。由於脂質體比被包裹的葯物分子要大得多，因此可利用它們的不同大小來分離除去未包裹的葯物，這些方法有凝膠過濾柱層析法，滲析法等；若被包裹的物質是蛋白質或DNA，或者未被包裹的葯物可能形成較大的聚結物，則可利用它們與脂質體浮力、密度的不同而採用諸如離心等方法進行分離。

(一)柱層析法

凝膠滲透層析技術廣泛用於從脂質體懸液中分離除去未包裹葯物，也可用於對懸液中的脂質體大小分組，這一技術在實驗室中很有效且快速。在大規模生產上，雖然也可用凝膠過濾來純化，但技術較困難且價格昂貴。另外，脂質體被洗脫介質稀釋後可能需要增加濃縮步驟。
柱層析填料常用葡聚糖如Sephadex G-50，其步驟與常規方法一致。但必須指出：①在葡聚糖表面存在著能與脂質體膜結合並相互作用的微小部位。雖然這種作用並不影響脂質體在凝膠柱上的流動特徵，但仍可導致少量脂質的損失，使膜的不穩定性增加，從而導致膜滲透性的改變及包裹物質的滲漏。這種現象在脂質濃度較低的情況下特別應予注意，一般可通過加大脂質體樣品上柱量或用空脂質體預先將柱子飽和來解決。通常使用20mg脂質製成的小單層脂質體可飽和10g凝膠；②若凝膠顆粒太細，較大的脂質體可能被滯留在凝膠柱上，因此對多層脂質體宜選用中粗級的凝膠(粒徑大小為50～150µm)，而對小單層脂質體則可用任何級別的凝膠。

(二)滲析法

此法是最簡單的也是最常用的除去未包裹葯物的方法(大分子化合物除外)。它不需要復雜的技術，也無須昂貴的儀器，且能夠擴大生產。通過不斷改換滲析介質可除去所有的游離葯物。但是此法很費時，一般在室溫條件下，要除去95％以上的游離葯物至少需要更換三次滲析介質，時間在10～24h以上。此外，滲析介質的滲透強度應與脂質體懸液一致，否則在滲析中就會改變脂質體懸液的體積，且可能引起包裹物質的滲漏。

(三)離心法

在不同的離心力下離心是分離除去不同種類脂質體中游離葯物的有效方法。為了完全除去游離葯物，常常需重復懸浮和多次離心。使脂質體下沉所需的離心力取決於脂質體的大小，在某種程度上還取決於混懸液的絮凝狀態。如果脂質體小且分布窄，就需要高速離心及冰凍條件。低速(2000～4000r／min)離心只能使大脂質體沉降。
顯然，對於大量脂質體利用高速冰凍離心是極其耗能和昂貴的，因此此法不適於分離小脂質體。對於比較大的脂質體，低速離心可縮短操作時間並且可同時將較稀的脂質體懸液濃縮到所需濃度。為了避免脂質體遭到破壞，必須注意保證重復混懸介質的滲透壓與脂質體懸液的滲透壓相一致。

二、脂質體包封率的測定

(一)百分包封率的測定

顯然，在考查包裹物質在生物體內的行為之前必須測定該物質在脂質體中的量，採用上述方法分離除去未包入脂質體中的游離物質，就可利用下式計算出百分包封率(Encapsulation percentage。EN％)

EN％=(1一Cf／Ct)×100％

式中，Cf為游離葯物的量；Ct為脂質體懸液中葯物的總量。
這里再介紹兩種快速、用量少且適應性廣的分離游離物質並測定EN％的方法。

1．微型柱離心法(minicolumn centrifugation method)

取一塑料注射針筒，填上過濾膜作襯片，裝入用生理鹽水溶脹的Sephadex G-50，再將針筒置一離心管中低速離心(2000r／min，3min)除去多餘的生理鹽水，此時，凝膠柱變干並可能與針筒內壁分離，精確定量加入脂質體樣品，注意勿滴入柱床邊緣，離心(2000r／min，3min)使脂質體進入離心管中，待測。再在凝膠柱上加入少量生理鹽水，依上法離心，此次離心液中可能不再有脂質體或仍含有少量，這主要取決於脂質體的大小及組成，但游離葯物在此過程中因葡聚糖吸附而不會被離出，然後可在凝膠柱上再加生理鹽水，離心使柱干，此時游離葯物被洗脫進入離心液中，反復幾次，直至全部游離葯物均從柱子上離心洗脫下來，分別測定包封葯物及游離葯物濃度，就可計算出EN％(圖20—10)。

微型柱離心法的優點是脂質體懸液幾乎沒有被稀釋，對於實驗室小規模的試驗，可較好地用來分離除去未包裹葯物和快速地測定包封率。

2．魚精蛋白凝聚法(protamine aggregation)

此法可用於任何組成的脂質體，如中性或帶負電荷的脂質體(圖20－11)。方法如下：

取0.1ml脂質體懸液於10ml錐形離心管中，加入0.1ml魚精蛋白溶液(10mg／ml)，攪勻，靜置3min，再加3ml生理鹽水，在室溫條件下離心，吸取2ml上清液，測定游離葯物的濃度。將剩餘上清液棄去，沉澱物以0.6ml 10％ Triton X-100重新混懸，使脂質體膜材溶解，再補充生理鹽水至總體積為3.2ml，測定包封葯物的濃度，就可方便地算出EN％。

(二)包裹容積的測定

包裹容積(entrapped volume)是指製成的脂質體相對於每毫克磷脂所佔的內水相的體積，一般以微升(µl)表示。包裹容積的計算可通過測定包裹在脂質體內葯物的總量來推測。假設在脂質體內水性介質中葯物的濃度與開始制備時所用的葯物濃度一樣，經分離除去未包裹葯物後沒有物質從脂質體中滲漏出來，則很容易計算。但是在許多情況下，這樣的假設往往不能成立。例如用二次乳化法制備脂質體時，在乾燥除去有機溶劑時內水相可能也會失去；另外由於內外滲透壓的差異，水分子可以進入或逸出脂質體，因此測定內部容積最好的辦法是直接測定水的量。例如利用具有光譜性的液體代替內相介質，利用核磁共振法(NMR)測定，然後測出水的量。將脂質體在高速離心(200000g，6h)下沉降成為緊密的沉澱，小心除盡上清液，將沉澱物以D20(deuterium oxide)重新混懸，由於膜對於水的滲透性使整個體系中H20和D20很快達到平衡，取出少量用於磷脂量測定，剩餘部分可作水的NMR掃描，峰高與D20中含水濃度成正比，與標准溶液對照即可求得水的量，從而計算出脂質體的包裹容積。

三、脂質體的穩定性

脂質體在放置過程中可能發生多種不同的變化。如磷脂質會氧化和水解，生成短鏈的磷脂，並在膜中形成具溶解性的衍生物；另外脂質體還可發生凝聚、融合等物理變化，從而導致包裹物質的滲漏。因此脂質體制劑若要發展為產品應市，必須在貯藏期間具有良好的穩定性；在體內到達靶組織之前或發揮其緩釋作用之前亦須保持一定的大小及完整性。已證明脂質體在血液中比較穩定，但隨磷脂的化學性質、膽固醇的比例和脂質體的大小、雙分子層的數目等的不同，脂質體在體內的穩定性也會有所不同。但若在貯存過程中，葯物從脂質體迅速滲漏，則必將限制脂質體的應用價值。

(一)化學穩定性

脂質體組分磷脂的氧化降解應在制備時即加以防止，可採用一些措施盡可能地降低氧化程度，例如，使用新鮮提純的磷脂和新鮮蒸餾的溶劑，盡量避免高溫，並在充氮和無氧的條件下完成制備過程，最後將脂質體貯存於惰性環境等。
在膜材組成中加入抗氧劑也是一種有效的方法。目前常用的抗氧劑是α-生育酚，為一種無毒的食用脂質。據認為蛋卵磷脂的氧化分解可因α-生育酚的加入大大減緩。另一可選擇的降低氧化程度的方法是使用飽和磷脂代替不飽和磷脂，在天然來源的磷脂中，其不飽和度隨植物、蛋黃、哺乳動物依次增加，對於蛋黃磷脂，不飽和度取決於動物的飼料及所用的提純方法。
但是，無論是不飽和還是飽和磷脂，在脂質體的水性懸液中，都可能水解而形成溶血磷脂和脂肪酸，溶血磷脂進一步水解而形成甘油磷脂和脂肪酸，甘油和磷酸之間的酯鍵很難水解，所以不產生游離的磷酸和甘油。精製天然豆磷脂在脂質體水性懸液中的水解動力學已有研究。結果表明，豆磷脂的水解主要受H+和OH+的催化作用，在pH6.5左右水解速率最小。體系中加入緩沖離子如醋酸、枸櫞酸和緩血酸銨也可輕度增加豆磷脂的水解。

(二)物理穩定性

脂質體中包裹葯物的滲漏和凝聚、融合成大的團塊等物理穩定性問題是脂質體研究工作中的一大難題。一些研究表明，小單層脂質體在貯存中體積增大，葯物滲漏與脂質成分及包裹葯物的性質有關。由中性磷脂制備的脂質體的凝聚主要是由於范德華力相互作用所致，可在膜材中加入少量負電荷磷脂(如10％PA或PG)來克服。在膜材中加入微量的1,3-二乙醯-2-磷脂醯膽鹼也可以阻止較小脂質體的融合。
較大的脂質體在制備方法適當的條件下一般不發生融合，而小於40nm的小單層脂質體由於膜的曲率大，易於發生融合，特別在相變溫度時更易發生。
採用前體脂質體等重建脂質體的方法可以較好地避免脂質體在貯存中發生的化學和物理變化。重建脂質體有以下三種類型：含葯或不含葯的干脂質膜；含葯或不含葯的凍干脂質混合物：含葯凍干脂質體。對於干脂質膜或凍干脂質混合物，重建時所獲得的葯物包封率是有限的，特別是對親水性葯物的包封率常常不高，懸液中含有較多的游離葯物，實際應成價值不大。對於具有適當結構的親脂性葯物，重建產品可達到較滿意的包封率，但在重建過程中所需的條件，例如攪拌程度和方法，要求在高出常溫下超聲處理等，實際應用不甚方便。
對於親水性葯物，可選擇含葯凍干脂質體這一重建形式，有報道在冰凍過程中若加入親水性聚合物，如葡聚糖能產生自由流動能，利於凍干脂質體在水性介質中重建。例如當含有胰島素的凍干脂質體用這種方法處理時，其重建後的包封率可達原來的70％，即在冰凍和重建過程中胰島素的滲漏率大約為30％。如果包裹的是低分子量葯物，滲漏率可能更高些。但是，這種技術為保證脂質體制劑在貯存中的穩定性提供了一個有效的方法。

四、脂質體大小的測定

脂質體的大小將影響脂質體在體內的處置，也是脂質體重要的質量指標之一。測定脂質體大小的方法有激光掃描法，電子顯微鏡法或庫爾特粒度分析法。無疑，電鏡測定法最為准確。因為人們可以直接觀察每一個脂質體，並獲得各個大小范圍內脂質體外形的精確信息。但是要觀察大量脂質體樣本非常費時。相反．激光掃描法非常簡單且操作快速，但僅能測出脂質體的平均性質。與之類似，採用庫爾特粒度分析儀也可測出脂質體的大小分布，但後二種方法均難以描述更精細的結構。關於粒度測定的細節可參見本書第十二章。

五、脂質體的成分分析

(一)磷脂質的分析

1．含量測定

直接精確測定磷脂質濃度比較困難，因為乾燥磷脂中總含有一定量的殘留溶劑或其它雜質磷脂，因此最廣泛使用的測定磷脂的方法是非直接法，例如含磷量的測定。對於制備脂質體的大多數磷脂而言，每摩爾磷脂均含1mol磷，僅有個別例外，如每摩爾心磷脂含有2mol磷。因此樣品中磷脂的濃度可通過測定磷含量來計算。這里介紹二種磷測定法。

(1)Bartlett法

將磷脂的有機磷酸解成無機磷後，加入鉬酸銨使之轉化成磷鉬酸，磷鉬酸可用萘磺酸銨定量還原為藍色，藍色的強度由分光光度法測定，與標准品(如磷酸二氫鉀)對照即可計算出含磷量。該法靈敏度較高且重現性好，但若樣品中含有少量無機磷則會干擾測定。

(2)Stewart法

當脂質體混懸於磷酸鹽緩沖液中，此時宜採用Stewart法。該法是利用磷脂在有機溶劑中與亞鐵硫氰酸銨形成有色復合物，而不受無機磷存在的影響進行測定。在計算時，使用一與磷脂結構有關的轉換因子將吸收值換算成磷脂毫克數，該因子隨磷脂頭基不同而異。也可利用磷脂標准液繪制標准曲線來計算。因此該法不適於測定含有未知磷脂的混合物。特別須指出的是，該法不能用於甘油磷脂的測定，若脂質體中含有卵磷脂和甘油磷脂，則可用該法對前者定量，再通過Bartlett法測定總的磷脂，就可計算出甘油磷脂的量。

2．磷脂質的薄層層析

薄層層析是檢查磷脂質純度的主要手段。與所有的層析法一樣，磷脂質的薄層層析也是利用磷脂在液態有機相中對親水性固定相有不同的親和性，當液相在固定相展開時，不同的磷脂具有不同的保留時間，可根據親水性的強弱改變展開劑的組成，從而改變磷脂在兩相中的分配系數。最常用的固定相是硅膠，展開劑則常用含有氯仿的溶劑。如①氯仿：甲醇：水：(65：25：4 V／V)；②氯仿：甲醇：水：氨水(65：35：2.5：2.5 V／V)；③氯仿：丙酮：甲醇：醋酸：水(6：8：2：2：1 V／V)；④乙酸乙酯：環己烷(1：1 V／V)等。最常用的顯色劑為碘，也可用50％的硫酸 - 甲醇液或重鉻酸鉀液顯色。

(三)磷脂氧化程度

1．磷脂的氧化

磷脂脂肪酸的氧化主要是由於游離基的作用。在電磁波輻射或者微量游離金屬離子的催化下。脂肪酸碳鏈上首先脫去一個氫原子形成游離基，進而與空氣中的氧發生連鎖反應。含有雙鍵的碳鏈更易受影響，因此聚合不飽和磷脂特別容易氧化降解。在含有單個或多個不飽和脂肪酸的脂質混合物中，磷脂的氧化分成三個階段進行：①單個雙鍵的偶合；②過氧化物的形成；③形成乙醛及鏈斷裂。
值得注意的是，在無氧情況下仍會發生游離基反應導致雙重或三重偶合的形成，但不產生過氧化物。另外，降解的最後一步過程要消耗偶合雙鍵，因此在最終降解產物增加的同時，笫一步的降解產物將會減少。故很難用一種試驗方法評估磷脂的氧化程度，甚至即使應用幾個不同試驗仍僅能大致估計氧化過程相對速率大小。

2．氧化指數的測定

氧化指數是用來檢測游離基偶合的指標，因為氧化偶合後的磷脂在230nm左右具有紫外吸收峰而有別於未氧化磷脂。典型的紫外吸收圖譜如圖20－12。

國內有人提出作為制備脂質體膜材的卵磷脂，其氧化指數應控制在0.2以下，測定方法是，將磷脂溶於無水乙醇，配成一定濃度的澄明溶液，分別測定在波長233nm及215nm吸收值。按下式計算：
氧化指數 = A233nm／A215nm

3．過氧化物的測定

卵磷脂氧化產生丙二醛及溶血磷脂等。丙二醛(MDA)在酸性條件下可與硫巴比妥酸(TBA)反應，生成一種紅色染料(TBA-Pigment)

該化合物在波長535nm處有特異吸收，吸收值的大小即反映磷脂的氧化程度。有人對丙二醛量與溶血之間的關系進行了研究，實驗證明，當每毫升含卵磷脂的生理鹽水中丙二醛含量超過2.3µg時，在37℃放置1～2h即產生溶血。
除上述方法可估計磷脂的氧化程度外，根據聚合不飽和脂肪酸鏈在氧化最後階段發生斷裂或縮短，也可用氣 - 液色譜法了解這些醯基鏈的變化。

(四)膽固醇的分析

與磷脂質類似，膽固醇的純度及其氧化產物可用氣 - 液色譜法進行檢測。另外，由於膽固醇不論是游離型還是酯化型都能與含高氯酸鐵的乙酸乙酯和硫酸試劑反應生成鐵復合物，在波長610nm處有紫外吸收，採用標准膽固醇溶液對照，就可計算出膽固醇的量。

六、脂質體的滅菌

許多研究論文都認為脂質體不宜用加熱滅菌的辦法，且對各類輻射及各種化學滅菌劑也敏感，所以只能使用過濾滅菌或採用無菌操作法進行制備。這也是影響脂質體廣泛應用於臨床的一個重要原因。
近年來，國內有人採用100℃ 30min濕熱滅菌法獲得成功，滅菌前後脂質體的形態及大小均無明顯的變化，滲漏率約為5％。另有人採用輻射滅菌法，即用60鈷發出的γ射線，對三磷酸腺苷脂質體和甲氨蝶呤脂質體作輻射滅菌，照射劑量為15～20kGy，無菌試驗結果均由試驗前的陽性轉為陰性。脂質體粒徑滅菌前後無顯著變化。滅菌所致滲漏率較小。
滅菌方法的實用性可能與混懸介質種類、磷脂組成及純度等有關。採用121℃加熱20min滅菌處理幾種脂質體，發現在生理鹽水中脂質體發生凝聚，而在等滲糖溶液和多羥基化合物溶液中不發生凝聚。加熱滅菌後，具有較高的過氧化物值的含蛋卵磷脂的分散液稍變黃，改用具低過氧化物值的蛋卵磷脂、氫化蛋卵磷脂或DPPC則無此變化。在中性pH時充入氮氣也可阻止顏色變化，但加入α-生育酚無效。經0.4µm膜過濾的由蛋卵磷脂組成的脂質體的大小變小。在這一變化中，介質的類型也有明顯影響。加熱滅菌期間，包裹有羧基熒光素陰離子的負電荷脂質體(PC／chol／PG)發生滲漏，而使用正電荷脂質體(PC／chol／十八胺)不僅在加熱滅菌期間不發生滲漏，且可貯存很長時間不滲漏。

Ⅵ 瑞芯智造高解析度納米單顆粒分析儀怎麼樣

瑞芯智造(深圳)科技有限公司推出的Nanocoulter Ⅰ 高分辨納米單顆粒分析儀為納米顆粒快速定量測量提供了一個平台。測量納米顆粒時採用電學性質識別電解質溶液中的粒子,而無需依賴其光學參數以及其他物理性質。該儀器可測量單個粒子並快速整合粒子尺寸與濃度的統計數據。這一特殊性能將Nanocoulter Ⅰ與市面上其他納米粒度儀區分開來。

Nanocoulter Ⅰ主要特性:

 單個檢測流體中的納米顆粒

 一次性檢測卡,避免交叉污染

 多維數據,測試過程可視化

 無需對標,全自動分析納米顆粒粒徑分布、濃度以及電位數據

 任何類型的納米顆粒(無機&有機,透明&不透明,導電&絕緣)

 粒徑測量范圍:40-2000nm

 濃度測量范圍:106-1012個/ml

 檢測速度:5分鍾之內完成測試

 樣本需求量:50μl以內

 台式大小,400(mm)×350(mm)×310(mm)

 重量:19kg

Nanocoulter Ⅰ技術原理:

庫爾特原理(亦稱:電阻感應脈沖RPS),懸浮在電解液中的顆粒隨電解液通過小孔時,取代相同體積的電解液,在恆電流設計的電路中導致小孔管內外兩電極間電阻發生瞬時變化,產生電位脈沖。脈沖信號的大小和次數與顆粒的大小和數目成正比。屬於對顆粒個體的測量和三維的測量,不但能准確測量物料的粒徑分布,更能作粒子絕對數目和濃度的測量。其所測粒徑更接近真實,並且不受樣本物理化學性質的影響。

光刻納米孔晶元:

庫爾特原理測量粒徑范圍依賴孔徑大小,通過使用最先進的光蝕納米孔硅基晶元,最高加工精度可達1nm,將傳統的庫爾特計數只能測量微米級別的顆粒下探到40nm。不同孔徑的晶元應對不同粒徑的顆粒,檢測范圍可從40nm-2000nm。

Nanocoulter Ⅰ如何做到單顆粒檢測

液體樣本中的顆粒在電滲流的驅動下,單個通過納米孔,產生電脈沖信號(如下圖所示),可測量每個通過納米孔的粒子,提供實時的粒徑大小與濃度信息,是真正意義上的單顆粒檢測,不受制於顆粒的光學性質與其他物理化學性質,可用於任何材料的粒子的單顆粒測量。

Nanocoulter Ⅰ工作原理展示動畫

應用方向:

細胞外囊泡(外泌體)

外泌體近年來在基礎研究和臨床診斷治療等方向均展現出極大的潛力,受到廣泛關注。外泌體分離純化是所有研究工作的第一步,因此分離出來的外泌體的鑒定工作顯得尤為重要。Nanocoulter Ⅰ可快速得到樣品的粒徑分布情況和准確的濃度信息,是外泌體研究工作中的得力助手。

病毒

對於病毒的治療開發、葯物載體、以及常規研究而言,病毒及其團聚物的數量和尺寸變化非常重要,Nanocoulter Ⅰ可以快速的提供單個病毒的濃度、團聚物濃度、粒徑分布數據。細微的濃度差異(2倍),粒徑差異(10nm)都可准確的表徵,憑借超高的解析度現已成為很多許多病毒研發生產企業的質控指標。

脂質體

脂質體是由卵磷脂和神經醯胺等製得,是一種類似生物膜結構的雙分子層微小囊泡,可以與細胞膜融合,並且無免疫原性,是優良的葯物載體材料。Nanocoulter Ⅰ不僅可以對脂質體樣本進行粒徑和粒徑分布、濃度檢測,還可以對是否成功載葯進行分析,在脂質體的制備,載葯研究上有指導性的意義。

細菌

庫爾特原理,一直以來被行業作為細胞計數的金標准技術,Nanocoulter Ⅰ在此基礎上發展起來的納米庫爾特技術,搭載不同孔徑的納米晶元,可應對各種細菌的檢測,測試時間短、用量少、可活體檢測、無需復雜制樣,在細菌計數方面有著得天獨厚的優勢,並且可同時得到細菌的粒徑及粒徑分布、zeta電位數據。

納米材料

各種納米材料在醫療診斷、生物技術、工業生產等多領域都有極廣泛的應用,納米材料的濃度、粒徑、粒徑均一性影響納米材料產品的性能,Nanocoulter Ⅰ採用經典的庫爾特原理(電阻脈沖感應法),一個微球產生一個電阻脈沖,一次上樣即可測得納米全方位的信息,並且不受材料性質的影響,在納米材料的研發、生產、應用等領域發揮日益重要的作用。

多分散體系

多分散顆粒混合物是指組成顆粒大小、形狀或分子量不同的混合物。這種混合物的粒度分布很難確定;混合物的大量光學特性,例如不透明度,並不能提供關於總體分布的詳細信息。當顆粒尺寸減小到亞微米范圍時,這一點尤其明顯。典型的表徵儀器,如動態光散射(DLS)和光學粒子跟蹤不能分析高度多分散的混合粒子,而可以NanocoulterⅠ可以。

Ⅶ 制備脂質體的5種常用方法

目前，制備脂質體的方法較多，常用的有薄膜法、反相蒸發法、溶劑注入法和復乳法等，這些方法一般稱為被動載葯法，而H梯度法，硫酸銨梯度法一般被稱為主動載葯法。
脂質體是由磷脂分子在水相中通過疏水作用形成的，因此制備脂質體所強調的不是膜組裝，而是如何形成適當大小、包封率高和穩定性高的囊泡。制備的方法不同，脂質體的粒徑可從幾十納米到幾微米，並且結構也不盡相同。
脂質體常用制備方法主要有薄膜分散法、反相蒸發法、注入法、超聲波分散等。
在制備含葯脂質體時，首先將葯物溶於水相或有機相中，然後按適宜的方法制備含葯脂質體，該法適於脂溶性強的葯物，所得脂質體具有較高包封率。

Ⅷ 免疫脂質體的免疫脂質體

第一代免疫脂質體（IML)
是指連有單克隆抗體的脂質體。通過單克隆抗體與靶細胞的特異結合，將脂質體包載的葯物導向靶組織，賦予脂質體主動靶向性。
第二代免疫脂質體
此技術包括PEG含有的長循環脂質體，使抗體或配體結合到脂質體表面。
第三代免疫脂質體
為了增加長效脂質體的靶向性，將抗體或其它配體連接於長效脂質體表面上的聚合物（如PEG)鏈的末端上，從而避免了PEG鏈對靶位識別的干擾，得到一種新型脂質體。
免疫脂質體具有制備工藝簡便，無毒、無免疫原性及可被生物膜利用的特點，它攜帶、保護及釋放葯物的能力高於Mab（單克隆抗體），是現階段抗體靶向治療的研究熱點。
脂質體的製法
目前較為成熟的脂質體制備技術主要有以下兩種： 脂質體的高效低毒作用是通過體內實驗得以驗證的。採用葯代動力學/葯效動力學（PK/PD）模型系統，在這個系統中，PK參數用動力學實驗數據分析法描述包封於脂質體的葯物及未包封的葯物在治療部位的積蓄；而PD參數通過動物實驗用來描述成活率及致死率，這個模型能夠比較確切的預測和循環葯物的體內釋放率。

Ⅸ 請你利用所學的分子生物學知識設計一個實驗方案

查找人胰島素的基因序列，人工合成之後連接到酵母菌的質粒載體上，質粒上應有標記基因，培養並篩選連接成功的酵母菌，再進行培養，檢測其產物是否為胰島素，選擇產物是胰島素的酵母菌進行培養，收集所產胰島素，分離純化，實驗驗證，臨床應用。

首先克隆人的胰島素基因——與酵母載體連接構建酵母表達載體——將重組體轉入酵母細胞中——在30度條件下培養即可得到大量含胰島素的酵母細胞——破碎酵母細胞，提取胰島素——純化胰島素蛋白即可得到大量胰島素。

(9)脂質體分析主要用什麼儀器擴展閱讀：

①生物化學和生物物理學是用化學的和物理學的方法研究在分子水平，細胞水平，整體水平乃至群體水平等不同層次上的生物學問題。而分子生物學則著重在分子（包括多分子體系）水平上研究生命活動的普遍規律；

②在分子水平上，分子生物學著重研究的是大分子，主要是蛋白質，核酸，脂質體系以及部分多糖及其復合體系。而一些小分子物質在生物體內的轉化則屬生物化學的范圍；