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豬抗體檢測所需儀器叫什麼

發布時間:2022-09-17 12:54:04

1. idexx豬瘟病毒抗體檢測試劑盒用的什麼抗原

概述

豬瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹瀉性病毒(BVDV)以及邊界病(BDV)都屬於黃病毒屬的成員。由於CSFV的高致病力和高致死率,它已給養殖業造成了巨大的損失。豬感染高致病力毒株後在潛伏期就可以造成傳染,經歷急性豬瘟或亞急性豬瘟臨床症狀的豬在出現症狀前大量排毒,但耐過後的豬只體內有明顯的CSFV抗體,且不再排毒。感染溫和性毒株的豬呈慢性感染,在病死前會長期或間歇性地排毒。懷孕母豬可以通過胎盤感染胎兒導致流產、木乃伊化或產出弱豬、畸形胎等。先天性感染低毒力病毒的結果是產出持續性感染的仔豬,仔豬出現免疫耐受,不表現任何症狀向外排毒。豬也有可能感染BVDV或BDV。盡管這些感染通常呈溫和過程並且是自限性的,但有效的將它們同豬瘟病毒區分是很重要的。

原理

豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒是用來檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的檢測試劑盒。該試劑盒是用豬瘟病毒抗原包被的微量反應板,利用阻斷ELISA原理來檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體。如果被檢樣品中存在豬瘟病毒抗體,它們就會阻斷辣根過氧化物酶標記(HRPO)的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的結合可以通過辣根過氧化物酶與底物的顯色程度進行判定,即用酶標儀在單波長450nm或雙波長450nm與620nm測定該反應體系的吸光度。當被檢樣品中含有豬瘟病毒抗體(陽性結果)時,顯色就會變淺,當被檢樣品中不含有抗豬瘟病毒抗體(陰性結果)時,顯色就會變深。樣本的阻斷率可以通過450nm波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值來確定


試劑

一個ELISA反應板可以檢測92份樣品(另加兩個對照,每個雙孔),或46個未知樣品,每個樣品加雙孔。雙孔檢測法有利於檢測結果的准確性。

1.用豬瘟病毒抗原包被的ELISA反應板

2.洗滌液(10×)

3.陰性對照

4.陽性對照

5.樣品稀釋液

6.辣根過氧化物酶標記(HRPO)的抗豬瘟病毒的單克隆抗體

7.TMB底物

8.終止液

自備器材

1.微量移液器,50μl和100μl。

2.一次性微量移液器使用的吸頭。

3.蒸餾水或去離子水。

4.洗板用的洗瓶或洗板機。

5.溫箱或微量反應板用的封條。

6.酶標儀。

注意事項

1.要認真閱讀操作說明,按操作說明進行操作。

2.試劑盒及試劑盒中的所有試劑要保存在2~7℃。

3.沒有用過的微量反應板必須密封於塑料袋中並保存在2~7℃。

4.不同批次的試劑或說明書不可混合使用。

5.使用處理各個試劑時要小心,嚴防細菌和真菌對試劑的污染。

6.禁止使用過期的試劑。

7.在處理樣本和試劑盒中的試劑時禁止吃食物、喝水和吸煙等。

8.各個樣本使用不同的吸頭,以防污染。

9.每次檢測都要加陽性對照和陰性對照。

10.稀釋各種試劑組分時只能使用超純水。

11.底物溶液對眼睛、皮膚以及呼吸系統都有刺激作用,在使用過程中要防止該溶液接觸眼睛和皮膚。

12.終止液中含有強酸HCl,容易引發燒傷,處理該溶液時一定要小心謹慎。

13.用吸量管吸取液體時禁止用嘴。

14.該試劑盒僅用於體外檢測。

試劑准備

包被的微量反應板,樣品稀釋液,陽性對照,陰性對照,酶標二抗,底物溶液和終止液使用前無需處理。

洗滌液(10×)濃縮的洗滌液在使用前必須用超純水進行10倍稀釋。被稀釋了的洗滌液可以在4℃的條件下保存3天,或冰凍條件下保存一年。如:250ml的洗滌液需用25ml的濃縮洗滌液和225ml的超純水充分混合配成而成。注意:如果濃縮液中含有結晶,在使用之前必須將它融化,應將該液溫水浴30分鍾以上。

樣品准備

新鮮的、冷藏(4°C少於8天)的、冰凍的血清或血漿都可以用於檢測。

操作步驟

1.在使用時,所有的試劑盒組分都必須恢復到室溫18~25℃。使用前應將各組分放置於室溫至少一小時。

2.分別將50μl樣品稀釋液加入每個檢測孔和對照孔中。

3.分別將50μl的陽性對照和陰性對照加入相應的對照孔中,注意不同對照的吸頭要更換,以防污染。

4.分別將50μl的被檢樣品加入剩下的檢測孔中,注意不同檢樣的吸頭要分開,以防污染。

5.輕彈微量反應板或用振盪器振盪,將反應板中的溶液混勻。

6.將微量反應板用封條封閉或於濕箱中(18~25℃)孵育2小時,也可以將微量反應板用封條封閉或於濕箱中孵育過夜。

7.吸出反應孔中的液體,並用稀釋好的洗滌液洗滌3次,注意每次洗滌時都要將洗滌液加滿反應孔,棄去反應孔中的洗滌液並拍干反應板。也可以用洗板機洗滌3次,每個反應孔應加300μl左右的洗滌液。注意洗板時要小心,以免樣本之間的交叉污染。

8.分別將100μl的抗-CSFV酶標二抗(即取即用)加入反應孔中,用封條封閉反應板並於室溫下或濕箱中孵育30分鍾。

9.洗板(見6)後,分別將100μl的底物溶液加入反應孔中,並於避光、室溫條件下放置10分鍾。加完第一孔後即可計時。

10.在每個反應孔中加入100μl的終止液終止反應。注意要按加酶標二抗的順序加終止液。

11.在450nm處測定樣本以及對照的吸光度值,也可用雙波長(450nm和620nm)測定樣本以及對照的吸光度值,空氣調零。

12.計算樣本和對照的平均吸光度值(見計算)。

計算方法

計算被檢樣本的平均值OD450(=ODTEST)、陽性對照的平均值(=ODPOS)、陰性對照的平均值(=ODNEG)。

根據以下公式計算被檢樣本和陽性對照的阻斷率;(陽性對照阻斷率以同樣方法計算)

ODNEG-ODTEST

阻斷率=————————×100%

ODNEG3

試驗有效性

陰性對照的平均OD450應大於0.50。陽性對照的阻斷率應大於50%。

結果判定

如果被檢樣本的阻斷率大於或等於40%,該樣本就可以被判為陽性(有CSFV抗體存在)。如果被檢樣本的阻斷率小於或等於30%,該樣本就可以被判為陰性(無抗CSFV抗體存在)。如果被檢樣本的阻斷率在30~40%之間,就應在數日後再對該動物進行重測。

2. 一套獸用抗體檢測設備多少錢

其實,目前多數用於檢測抗體的方法都是酶聯法,一般包括,試劑盒、一般試驗器具、酶聯檢測洗板機(可省略),分光光度計,溫箱,冰箱、振盪器。全部算起來高級一些也不過幾萬元,一般水平,一兩萬余元差不多。

3. 豬場中,什麼是抗體監測和凈化。該怎麼做

抗體監測,是利用血清學方法,現在常用ELISA檢測試劑盒,對豬場的不同群體、不同階段的豬,進行每個季度1次的血清抗體常規監測,通過分析群體抗體滴度、群體離散度和群體轉陽率,綜合評價豬群整體免疫效果和穩定性,從而進行疫病預警和免疫等工作的調整。
凈化,是通過一系列的方法(免疫、監測,封群、馴化、自繁自養、全進全出等生物安全措施方法),將豬場中存在的某種致病因子去除,達到豬場中不再有某種疫病的存在。
針對不同的豬場、不同的疫病,採用不同的監測和凈化方案。

4. 目前豬場自建實驗室使用的檢測技術有哪些

豬場自建實驗室一般可以用的檢測方法如下:
1、用顯微鏡檢查公豬精業火力
2、葯敏試驗(需要高高壓菌器、恆溫培養箱、超凈工作台、冰箱以及各種培養基和平皿、接種棒等)
3、抗體檢測技術(如1、偽狂犬乳膠凝集試驗、2、金標卡試紙條檢測豬瘟、藍耳、圓環等抗體的試驗、3、ELISA試驗用於檢測豬瘟抗體,藍耳抗體等)
4、條件好,學歷高的豬場可以開展PCR檢測(聚合酶鏈式反應).檢測各種動物疫病的病原
5、有些豬場還可以做細菌分離培養及鑒定工作。
6、部分豬場可以做自家苗,有製作自家苗的技術
其他的技術就不多見了

5. 一般食品出現問題,比如魚裡面含有孔雀石綠、豬身上有瘦肉精,這些都是通過什麼檢測出來的

目前,孔雀石綠的檢測方法以理化檢測法和免疫學檢測法為主。其中理化檢測法包括:薄層層析法、分光光度法、高壓液相色譜法、液相色譜質譜聯用法、氣相色譜質譜聯用法等。酶聯免疫檢測法
酶聯免疫法(ELISA)的基本原理是將酶分子與抗體分子共價結合,結合產物不會改變抗體的免疫學特性,也不影響酶的生物學活性。此種酶標抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。底物可在酶的作用下使其所含的供氫體由無色的還原型轉變成有色的氧化型,出現顏色反應,顏色反應的深淺與樣品中相應抗體或抗原的量呈一定的比例,顯色反應可通過酶標儀進行定量測定。ELISA方法是一種既特異又敏感的檢測方法,可分為:間接競爭抑製法、抗體/抗原包被直接競爭法和夾心法。
而對於豬肉中的「瘦肉精」,檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)和高效液相色譜一質譜聯用法(HPLC-MS),這些都是比較傳統的辦法,由於這些方法對儀器設備、操作人員的要求較高,耗時較長,在檢測過程中往往是作為確認檢驗方法。目前,實驗室中最常用的是酶聯免疫吸附法,它是運用抗原抗體反應的原理對豬肉中「瘦肉精」作出定量定性的分析,一般實驗只需2~3小時,具有成本低、速度快、檢測靈敏度高、儀器設備簡單等優點。另外有一些快速檢測方法。

6. 哪些設備可以檢測豬病尤其是常見的豬病。

豬場的常見病主要是傳染病和寄生蟲病,尤以前者最為嚴重。因此,實驗室檢測的重點主要是豬傳染病。豬傳染病分為細菌性傳染病和病毒性傳染病,細菌性疾病的實驗室檢測方法主要有塗片鏡檢、分離培養、生化試驗、動物試驗、血清型鑒定及葯敏試驗等,屬於傳統的實驗室檢測方法,操作繁瑣,需要的時間長。
病毒性疾病檢測常用方法主要有 3 種 :
一是膠體金檢測卡試紙條,如豬瘟、豬偽狂犬病、豬藍耳病等,分為抗原檢測卡和抗體檢測卡,檢測所需時間短,但其敏感性較低,且檢測結果只能提供陽性、弱陽性、陰性的半定量結果,無法提供數值性的檢測結果。因此,該方法目前只能作為初篩診斷試劑,用於疾病的輔助診斷。同時,也無法區分是疫苗抗體還是野毒抗體 ;
二是抗體(抗原)檢測 ELISA試劑盒,目前,常用的豬瘟、豬偽狂犬病、豬藍耳病、豬圓環病毒病、豬口蹄疫等,既有國產的,也有進口的,操作方便,檢測結果快,但需要酶標儀,並且抗體ELISA 檢測試劑盒,除豬偽狂犬病等少數試劑盒外,其他大多無法區分疫苗抗體和野毒抗體,往往需要根據抗體水平升高的幅度和抗體離散度、臨床表現等來進行判斷,並且有些國產試劑盒與進口試劑盒檢測結果存在一定差異。
三是PCR 檢測方法,科研院所、大專院校及部分畜牧局系統應用較多,檢測結果准確,但需要配套儀器,如 PCR 基因擴增儀、電泳儀、凝膠成像系統等,投入費用高,操作條件要求高,需要專業人士才能操作。
其他,如血凝試驗、中和試驗、凝集試驗及瓊脂擴散試驗等,要麼操作復雜、技術要求高,需要昂貴儀器,需要一定條件的實驗室才能開展,要麼特異性較低,也不適合大批量樣品的檢測。

7. 豬病檢測hc ab是什麼意思

HC 表示豬瘟,ab表示抗體
檢測HC-ab 就是檢測豬瘟抗體,也就是檢查豬是否感染豬瘟病毒或注射過豬瘟疫苗。

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