㈠ 常用的血清蛋白質含量測定方法有哪些
四種血清總蛋白質的測定的方法:
1.基於蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法 由於各種蛋白質分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同,特別是白蛋白含色氨酸為0.2%,而γ-球蛋白中含量達2%-3%,導致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2+,集中原法和雙縮脲反應兩者的作用,使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴於Cu2+.反應產物最佳吸收峰在650-750nm,方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利於檢測較微量的蛋白質。但試劑反應仍易受多種化合物的干擾。
2.紫外測定法 採用280nm和215/225紫外吸收值,計算蛋白質含量280nm 是由於蛋白質分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和准確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區域其吸收值為280nm的10-30倍,將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質的影響。
3.採用沉澱反應進行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此方法甚為簡便,不需特殊儀器,技術關鍵在於:①選擇最佳試劑濃度及溫度;②混勻技術;③選用的標准;④待測標本中的蛋白濃度。
4.染料結合法 蛋白質可與某些染料特異結合,如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(comassive brilliant blue )。這一性質除了可以用於電泳後的蛋白質區帶染色,亦可用於總蛋白質的定量。缺點是多種蛋白質與染料的結合力不一致。考馬亮藍在與蛋白質結合後的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質可用分光光度法來定量檢測。
㈡ 醫學檢驗,APTT、T T、PT、分別是用什麼檢測的
凝血功能套餐不止PT、TT、APTT還有FIB有些大醫院還要加一項國際敏感度指數(international sensitivity index,ISI),以確保PT的標准化。測定方法有很多:手工法,半自動,全自動,所需方法還要和當下條件相符才行,有專賣試劑的廠家,像亞中啊,金域啊,多得很,有官方網址,網路上可以查到的~以下所說,僅供參考: 凝血酶原時間(PT)的推薦方法
[原理]
將組織凝血活酶(主要含組織因子和脂質)和鈣離子,加到枸櫞酸抗凝血漿中,在37℃保溫,測定血漿凝固時間,即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。
[標本來集和處理]
1、標本採集:用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血,按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中,輕輕混合均勻。
2、標本處理:以2000~2500g,離心15分鍾,分離乏血小板血漿,並在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿:選擇正常健康男性和女性各lO名以上,年齡在18~45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕葯的婦女,採取的血漿冰凍乾燥保存或-80℃保存。
[試劑]
1、抗凝劑:109mmol/L枸櫞酸鈉液(相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L)。
2、凝血活酶試劑:市售商品,應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣(CaCl2)溶液:為25mmol/L。(目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好,可不必另配CaCl2液)。
4、質控物:正常及異常對照血漿
5、配製試劑用水必須符合1級純水的標准。
[儀器]
1、手工法:秒錶,保持37℃±1℃的恆溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上,表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒錶。
2、儀器法:各種自動或半自動血凝儀,嚴格按說明書操作。
[操作步驟]
1、手工法
(1)測定溫度36.5~38.5℃,上述各試劑及被測血漿,均應預溫至此一溫度,但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鍾,血漿預溫一般不宜超過10分鍾。
(2)所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。
(3)吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL,加入一小試管中:加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL,(也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合,加入0.2mL)。立即混勻並開動秒錶:試管仍浸於水浴中,至約10秒鍾時,自水浴中取出,在紗布上迅速擦去試管外水滴,在明亮處不斷傾斜試管,在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白(同時將出現液體流動減慢),立即停表,記錄時間。每次測定二管,按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2~7.3,大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配製。
(4)每批均同時做正常和異常對照,方法應與測定標本完全相同。
[報告方式]
1、以PT的秒(S)數報告(最接近的0.5秒)
2、以患者血漿(S)/正常對照PT(S)的比率(PRT)報告。
3、在口服華法令類抗凝葯物治療監控時,應報告國際正常化比率(INR)。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI,自動算出INR。手工法可根據下列公式,用一計算器直接計算:
Poller設計了一個簡便的列線圖,在取得PTR和ISI值後,即可從圖上直接查找出INR值,十分便利,國內已有介紹。
ICSH規定,不再用稀釋曲線或百分比(活動度)報告。
[參考值]
因儀器/試劑不同,會得出不同結果,故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件,自行測定一批健康人,建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時,根據新的條件,重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同(包括采血、容器、抗凝劑等)。健康供血者應選至少20個18~55歲的男性和非妊娠、月經期女性,不可服葯,在平靜休息狀態采血、以減少個體差異(有條件時,可測一批老年人和小兒,分開統計)。同時應分開幾天采血和測定,以減少天間差異。測定結果經統計學處理,計算標准差:以兩個標准差(2SD)或95%可信限作為參考范圍。對於三個標准差是正常還是異常,需結合具體情況進行評估。從統計學上講,其中有些人是正常的。用以上標准,病人(PT異常)則很少會遺漏。
三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
(一)活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗,也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣,不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如,檢測APTT的試劑中,所用活化劑(白陶土、硅藻土、鞣花酸)不同,他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。
迄今,ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標准化或試劑標准化的可行方案問世,僅NCCLS於1992年,提出一個編號為H29-T的暫行方案。
(二)活化的部分凝血活酶時間(APTT)的推薦方法
[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中,經過孵育後,加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間(以秒計),即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷,如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原(PK)、高分子量激肽原(HMWK)以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。
[儀器]
本實驗所用儀器、設備(包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等)以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。
[試劑]
1、部分凝血活酶試劑:由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起(或分開配製)常用的激活劑由硅藻土(商品名Celite)、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸(ellagic acid)或其它可用的激活劑,由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合,應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL(或<30%)的血漿,出現異常延長的結果。
2、氯化鈣溶液(25mmol/L)以及其它試劑與PT所用者相同。
[操作步驟]
1、樣品的採取、貯存、輸送與PT測定相同。注意,應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2、標本(去血小板的血漿)的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃,要經常檢查是否正確。
4、接觸活化時間:加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致;各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣,應嚴格按說明書要求進行。手工操作時,應用秒錶或類似的定時裝置計時。
5、操作:預溫(不超過30分鍾)APTT試劑一份與預溫(不超過10分鍾)的侍測血漿一份混合,立即開動秒錶計時;至規定的接觸活化時間終點時,加人預溫37℃的CaCl2液一份,混勻,同時開動秒錶。至出現血漿凝固時,停表,記錄血漿凝固時間(以秒計)。手工測定時應同時測定兩管,按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀,如果有適當的質控標准也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。 不好意思TT著實沒找到,不過聯繫到權威廠家,應該就不用自己去找了~
㈢ 蛋白電泳的檢測技術
血清蛋白電泳
新鮮血清經電泳後可精確地描繪出患者蛋白質的全貌,有助於許多臨床疾病判斷的參考,在各類教材書上已清晰的描述了各種病理現象所顯現的圖像,一般常見的是白蛋白降低,某個球蛋白區域升高,提示不同的臨床意義。如球蛋白多克隆(poly-clonal)增高,β-γ融合的橋連現象,在γ區呈現細而密的寡克隆(oligoclonal)區帶,及由單一克隆漿細胞異常增殖所產生的單克隆(monoclonal)免疫球蛋白區帶,又稱M蛋白(Monoclonal Protein)帶,血清蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法。
血清蛋白電泳目前最常用的檢查方法是醋酸纖維膜電泳法。
免疫固定電泳
血清免疫固定電泳(Immunofixation, IF)技術是血清蛋白質在瓊脂糖凝膠介質上經電泳分離後,應用蛋白質固定劑和各型免疫球蛋白及其輕鏈抗血清,加於凝膠表面的泳道上,經孵育和擴散後,若有對應的抗原存在,則在適應位置形成抗原抗體復合物並沉澱下來。染色後蛋白質電泳參考泳道和抗原抗體沉澱區帶被氨基黑著色,根據電泳移動距離分離出單克隆組份,可對各類免疫球蛋白及其輕鏈進行分型。血清免疫固定電泳技術用於M蛋白的型、亞型和輕鏈型,本周(Bence-Jonse)蛋白和游離輕鏈的分型和鑒別。
同工酶電泳
血清乳酸脫氫酶同工酶電泳
血清肌酸激酶及其亞型同工酶電泳
血清鹼性磷酸酶同工酶電泳
血清鹼性磷酸酶同工酶電泳具有三種不同結構的基因編碼或在轉移後修飾的結果,按其氨基酸序列可分為小腸型、胎盤型和組織非特異型(肝、腎、骨),它們各自表達產物可在血清中呈現,具有不同的意義。利用麥胚凝集素(wheat germ agglutinin, WGA)與ALP-L1和ALP-B糖鏈親和力的不同,血清與WGA作用再經電泳後可將ALP同工酶予以分離。肝外膽道阻塞轉移肝癌時,高分子ALP(ALP-L2)明顯增高,在原發性肝癌時肝型ALP(ALP-L1)明顯增高,骨轉移性癌時ALP-B增高。
脂蛋白電泳
應用自動電泳系統可將血清中脂蛋白組份進行分離,呈現LDL、VLDL和HDL條帶,輸入TC值,計算各種脂蛋白中膽固醇含量,LDL-C/HDL-C比值在正常人群組與冠心病患者組存在顯著差異(p<0.001);診斷臨界值(cut-off point)為3.89,診斷靈敏度76.7%,特異性79.8%。LDL-C/HDL-C比值是粥樣硬化性冠脈疾病重要的危險因子之一,明顯優於膽固醇或其它血脂的單個含量指標,且隨比值的增加,患冠脈疾病的危險性相應增大。
在凝膠中脂蛋白的等電點不同,不僅可區分α,前β和β區帶,又因介質中含有抗LP(a)抗體及陽離子存在,抗LP(a)抗體與患者血清中LP(a)結合形成復合物,陽離子則抑制其它脂蛋白的泳動速度,LP(a)便與其它脂蛋白分離開來。清晰的LP(a)條帶呈現在前β與γ區域之間,陽性條帶掃描後,可獲得區帶的面積及其百分含量,提高了對心、腦血管獨立的危險因子LP(a)檢測的敏感性和特異性。
血紅蛋白電泳
血紅蛋白電泳可使正常血紅蛋白HbA與HbA2分離,也可檢測出大部分異常血紅蛋白如:HbS、HbD、HbC和HbE。當HbA2、HbC和HbE>20%時,則難以分離和鑒別。應先用鹼性瓊脂糖凝膠血紅蛋白電泳進行正常和異常血紅蛋白的分離和檢測,通常用於孕婦的篩選,然後再進行酸性瓊脂糖凝膠血紅蛋白電泳,對異常血紅蛋白予以分離和鑒別。
血紅蛋白遺傳性分子病常分為異常Hb病和地中海貧血兩大類。異常Hb病如鐮狀細胞貧血,在鹼性緩沖液中異常HbS電泳區帶的位置呈現在HbA與HbA2之間,異常血紅蛋白的HbC和HbE電泳遷移率都十分緩慢,HbC和HbA2可重疊。在PH6.2的枸櫞酸緩沖液的是瓊脂糖介質電泳中,由於HbC不能與HbA分離,這樣就可檢測出HbE。異常血紅蛋白HbD是在鹼性緩沖液中其電泳遷移率如同HbS,而在PH6.2枸櫞酸緩沖液的瓊脂糖介質中,因HbS與HbA不能分離,這樣就可以分離和檢測出HbD。β-地中海貧血是HbA的合成受損,電泳圖譜可呈現HbA2與HbF區帶。
糖化血紅蛋白電泳
非濃縮尿蛋白電泳
腦脊液電泳

㈣ 血清蛋白小型試劑盒是做什麼用的那裡有賣的呀
血清蛋白小型試劑盒主要是用於去除血清中的白蛋白和免疫球蛋白。這種一般都是實驗室才會用到的,所以很少有賣的。你可以去學校的實驗室一類的地方打聽一下,或者打電話給一些生物科技類的公司,看他們有沒有賣的。因為這種產品品牌也很多的,所以每一家公司都不同吧,做的好一點的,我知道的是廣州譽維生物科技,丹利,雷得這類的公司都很不錯的。
㈤ 多發性骨髓瘤患者特異性最強的檢查是免疫電泳還是血清蛋白電泳
為什麼必須重視血清蛋白電泳和免疫固定電泳
許多骨髓瘤患者不是很清楚血清蛋白電泳(簡稱SPEP)和免疫固定電泳的重要作用,他們(當然,主要是指IgG型患者)往往只重視免疫球蛋白定量指標,以為只要根據這個指標的變動,就可以掌握病情,調整用葯方案,用葯或停葯。
其實,這個認識是不全面的。當然,在一些地區,尚無法進行上述檢測。不過,了解和掌握相關知識確實十分必要。
在國際骨髓瘤基金會網站公布的資料、美國國家綜合癌症(cancer)網路(NCCN)發布的《NCCN 指南——多發性骨髓瘤》(2014年第2版),以及國內專家學者的著作中,血清蛋白電泳和免疫固定蛋白電泳均屬於最重要的指標之一,居於檢測體系的核心地位。
那麼,為什麼血清蛋白電泳很重要?
我們知道,產生單一的單克隆蛋白(簡稱M-蛋白)是多發性骨髓瘤的特徵性表現。蛋白質電泳是用於測定血液或尿液中單克隆蛋白量的檢測方法。該M-蛋白由惡性漿細胞(或骨髓瘤細胞)製造(合成)。在任意給定的時間,產生和釋放到血清(將血液中的血細胞去除後留下的液體部分)中或尿液中的M-蛋白量,反映人體內存在的骨髓瘤數量。釋放到血清或尿液中的該蛋白被稱為血清或尿液腫瘤標志物。只有極少數癌症(cancer)有這種類型的標志物。通過血清蛋白電泳,可在初步診斷時評估骨髓瘤負擔,以及在整個評估疾病過程中跟蹤骨髓瘤數量。人們可以通過測定M-蛋白的數量來觀察對治療的反應和緩解程度,如果有必要,還可以用確切的數字衡量患者的復發率,這是一個獨特的優勢。例如,我們可以確定一個治療反應是部分反應(PR)= 50%改善 (即M-蛋白降低50%);非常好的部分反應(VGPR)= 90%改善 (即M-蛋白降低90%);或者完全反應(CR)= 檢測不到M-蛋白。同樣,我們可以鑒定這種蛋白水平的增長, 當增長≥25%時,稱之為骨髓瘤復發。
M-蛋白的電泳測定
作為多發性骨髓瘤特徵的M-蛋白如果存在於血清中,對它的電泳試驗即稱之為血清蛋白電泳(簡稱SPEP)。同樣,當M-蛋白存在於尿液中對它的電泳試驗則稱之為尿蛋白電泳(簡稱UPEP)。為了測定單克隆或M-蛋白的量,需要以下兩條信息:
n 血清或尿液的蛋白總量是多少?
n M-蛋白占總量的百分比是多少?
關鍵的信息來自SPEP和/或UPEP。通過計算用於描述M-蛋白量的「峰」的大小(通過測定圖中峰的頂部與基線之間的面積),就能夠得到M-蛋白占總蛋白的百分比。
例如:
n M-蛋白占總蛋白的60%
n 總蛋白=12克/分升(g/dL)
n M-蛋白含量=7.2 g/dL(12的60%)
總蛋白和單克隆蛋白的百分比都會隨著時間變化。例如,隨著對治療的反應,M-蛋白占總蛋白的比例可以下降到40%,總蛋白可以下降到9 g/dL。這時可得出M-蛋白含量為3.6 g/dL,下降了50%,或者說治療達到了「部分反應」的水平。
此類系列測定和評估是所有骨髓瘤疾病監測的關鍵因素。這就是為什麼SPEP和UPEP如此重要的原因。
免疫固定電泳(IFE)用於確定M-蛋白的類型。這在基線診斷時以及對治療產生最大反應的時間點而言至關重要。如果達到完全反應,免疫固定試驗為完全陰性,即沒有可識別的單克隆蛋白。單克隆蛋白通常會與一種抗重鏈抗血清和一種抗輕鏈抗血清反應(雖然有時漿細胞只產生輕鏈,在這種情況下,單克隆蛋白與抗血清的反應將針對自由輕鏈)。免疫固定方法對微量單克隆蛋白的存在更敏感,甚至在血清蛋白電泳或尿蛋白電泳不顯示任何可見的異常時也能檢測到。但是,免疫固定不能對M蛋白進行定量。因此,這兩種方法應結合使用:電泳用來檢測單克隆蛋白並定量,免疫固定用來確定其類型。
下一個問題,電泳如何幫助治療決策?
如前所述,SPEP和/或UPEP的精確測定單克隆蛋白的量和了解骨髓瘤腫瘤帶來負擔的確切水平的能力是一個巨大的優勢。缺乏SPEP或UPEP的尖峰時,疾病監測是相當困難的。
SPEP和UPEP上M-蛋白的水平反映了目前骨髓瘤的數量。但是,認識到每個患者各不相同至關重要。例如,在做出診斷時,某些患者的血清有一個很高的峰,但是在骨髓或骨中並沒有這樣高水平的骨髓瘤。同樣,也有相反的情況:某些患者有一個低的尖峰,但是有大量骨髓瘤細胞。因此,在診斷時,使單個患者的尖峰水平與骨髓瘤數量相關聯極其重要。若尖峰低,這可能顯得特別重要,因為小的變化在對治療的反應以及潛在的進展或復發方面更顯重要。
要求定期檢測以評估治療的影響。在治療期間,每月(或每個治療周期,正常為3-6周的時間)測定血液/或尿液中的M-蛋白水平。如果治療效果不佳,在2-3個月內,下述現象將是顯而易見的:SPEP/UPEP的M-蛋白水平下降<25%或升高≥25%(進展性疾病[PD])。此時可能需要改變治療。這對與醫生討論結果和治療方案來說,是一個重要的時間點。
㈥ 現在國內檢測蛋白質用什麼方法涉及到哪些化學儀器
目前食品中蛋白質的測定方法有蛋白質自動分析儀,近紅外自動測定儀,紫外分光光度法以及凱氏定氮法等。本文採用納氏試劑作為顯色劑測定食品中蛋白質含量,適用范圍廣,可用於各類食品及保健食品的檢測。用本法對標准品、質控樣品進行測定獲得滿意結果,對批量樣品的快速測定更具有實用性。現將結果報告如下。
材料與方法
儀器與試劑 WFZ800-D3型紫外分光光度計(北京第二光學儀器廠)。分析純硫酸、硫酸銅、硫酸鉀。(1)納氏試劑:稱取碘化汞100g及碘化鉀70g,溶於少量無氨蒸餾水中,將此溶液緩緩傾入己冷卻的32%氫氧化鈉溶液500ml中,並不停攪拌,再用蒸餾水稀釋至1L,貯於棕色瓶中,用橡皮塞塞緊,避光保存。(2)硫酸銨標准儲備溶液(1.0g/L):精確稱取經硫酸乾燥的硫酸銨0.4720g,加水溶解後移入100mL容量瓶中,並稀釋至刻度,混均此液每毫升相當於1.0mgNH3-N(10℃下冰箱內儲存穩定1年以上)。(3)硫酸銨標准使用溶液(0.01g/L):用移液管精密吸取1.0ml標准儲備液(1.0g/L)於100ml容量瓶內,加水稀釋至刻度,混勻,此溶液每毫升相當於10.0μg NH3-N。
方法
標准曲線繪制 取25ml比色管7支,分別准確吸取0.01g/L硫酸銨標准使用液0.00,0.5,1.0,3.0,5.0,7.0,10.0ml(相當於標准0.0,5.0,10.0,30.0,50.0,70.0,100.0μg),加水至10ml刻度,於標准系列管中各加2ml納氏試劑,混勻後放置10min,移入1cm比色皿內,以零管為參比,於波長420mm處測量吸光度,以標准管含量為橫坐標(μg),對應的吸光度(A)值為縱坐標繪制標准曲線。
樣品測定 選擇牛奶和奶粉為檢測樣品。精密稱取樣品0.1~2.0g置於250ml三角瓶中,加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml,先小火加熱,待內容物全部炭化,泡沫停止後,加大火力至液體呈藍色,使H2SO4剩餘量約為3ml左右為止,室溫放冷後,沿瓶壁慢慢加入10ml水,移入100ml容量瓶中,用少量蒸鎦水洗三角瓶3次,洗液全部並入容量瓶中,冷卻,加蒸餾水至刻度,混勻。測定時取0.5ml,加水至10ml刻度,以後操作同標准曲線。同時做空白試驗。
計算公式
X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000
式中:X-試樣中蛋白質含量(g/100g或g/100ml)
C-試樣測定液中扣除空白後氮的含量(μg)
V1-試樣消化液定容體積(ml)
V2-測定用消化液體積(ml)
m-樣品質量(g)或體積(ml)
F-氮換算為蛋白質的系數。
蛋白質的氮含量一般為15%~17.6%,按16%計算乘以6.25即為蛋白質,乳製品為6.38,麵粉為5.7,肉及肉製品為6.25,大豆為5.71。
結果
2.1 測定波長選擇 含氮量為30μg的標准管在顯色後,在波長400~440mm范圍內每間隔5nm進行測定,最大吸收波長為420mm。
顯色劑用量選擇 含氮量為30μg的標准管分別加入不同量的納氏試劑,在420mm的波長下分別測定其吸光度結果。納氏試劑顯色劑加入量為1.5~3.0ml時吸光度基本無變化,本法選擇加入納氏試劑2.0ml。
顯色時間及穩定性 含氮量為30μg的標准管經顯色後,分別在10,30min,1,2,4,8h進行測定。顯色後10min~8h內吸光度穩定無變化。本法選顯色10min後測定。
標准曲線 回歸方程:y=0.016X-1.5×10-3,r=0.9998,最佳線性范圍0.0~100μg。
精密度 牛乳和奶粉2種樣品分別取6份按本法重復測定6次,牛乳和奶粉精密度測定結果:平均數分別為3.06,23.50;標准差分別為±0.029,±0.073;相對標准偏差分別為0.31%,0.94%。
對2種樣品利用標准加入法作回收試驗(表1) 結果可見,回收率為95.50%~99.44%。
2種方法測定結果比較 分別用GB/T5009.5-2003凱氏定氮法與本法測定。結果顯示,2種分析方法的測定結果差異無統計學意義(t=0.026,P>0.05)。
測定標准物質 用本法測定4種不同的蛋白質標准物質,測定結果與標准物質含量一致。
以納氏試劑作為顯色劑快速測定食品中蛋白質的方法特點簡單、快速,適用於批量樣品測定。在鹼性條件下NH3-N與納氏試劑反應生成的黃色化合物穩定。本法與國標凱氏定氮法進行比較t=0.026,P<0.05,n=32,2種方法測定結果無明顯差異。測定范圍廣,線性范圍寬0.0~100.0μg;精密度高;相對標准偏差為0.31%~0.94%;回收率好,加標回標率為95.50%~99.44%。用本法測定標准物質結果一致,用於質量控制樣本測定結果滿意。本法儀器試劑簡單,易於基層普及,有利於推廣應用。
㈦ 都有哪些驗血器材它們各用在什麼樣的驗血類型中
1.血細胞分析儀:血細胞分析(血常規)
2.半自動/全自動生化分析儀:生化檢驗(如:肝功能、腎功能、血糖血脂...)
3.電解質分析儀:電解質檢測:鉀、鈉、氯、鈣
4.血凝儀:血凝項目:PT、APTT、TT、FBI...
5.酶標儀:免疫定性/半定量檢測:乙肝兩對半、丙肝抗體、HIV抗體...
6.化學發光分析儀:免疫定量:T3、T4、TSH、激素、腫瘤標志物等...
7.放射免疫分析儀:同上,因為有放射性廢棄物,已逐漸被化學發光免疫分析儀取代。
8.血氣分析儀:血氣分析:氧分壓、二氧化碳分壓
9.血液椎板粘度儀:血流變:高、中、低全血/血漿粘度。
10.PH計:血液酸鹼度:大部分血氣分析儀也有此功能
11.血沉儀:用於血沉測定,比手工法多一項血沉方程系數
12.血糖儀:用於急診末梢血糖檢測
13.免疫比濁儀:用於免疫項目檢測:ASO、RF、CRP、IG(G、D、E、M、A)、C3、C4...
15.電泳儀、分光光度掃描儀:用於:血清蛋白電泳、血紅蛋白電泳、同功酶分析...
16.基因擴增儀、電泳儀、時間分辨熒光分析儀:分子生物學診斷:乙肝DNA檢測、親子鑒定等
17.原子吸收分光光度計:微量元素檢測
...
其他廠用儀器設備:
顯微鏡:血細胞分析
離心機: 分離血清
水浴箱:模擬人體37度環境
培養箱:血液細菌培養、細胞培養
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㈧ 血清蛋白電泳應該加在哪個真空采血管中
血清蛋白電泳即用電泳方法測定血清中各類蛋白占總蛋白的百分比。對於肝、腎疾病和多發性骨髓瘤的診斷有意義。血清蛋白電泳 - 臨床意義 1.骨髓瘤:呈現特異的電泳圖形,大多在γ球蛋白區(個別在β蛋白區)出現一個尖峰,稱為M蛋白。
2.腎臟疾病:
(1)腎病綜合征:有特異的電泳圖形,噸球蛋白明顯增加,p球蛋白輕度增高,白蛋白降低,γ球蛋白可能下降;
(2)腎炎:急性腎炎時α2球蛋白可增高,有時合並γ球蛋白輕度增高;慢性腎炎時常可見到γ球蛋白中度增高。
3.肝臟疾病:
(1)肝硬變:有典型的蛋白電泳圖形,γ球蛋白明顯增加,γ和β球蛋白連成一片不易分開,同時白蛋白降低;
(2)急性肝壞死:白蛋白明顯下降,球蛋白顯著升高;
(3)傳染性肝炎患者血清白蛋白輕度下降,α2球蛋白增高並伴有γ球蛋白增高;
4.炎症、感染:在急性感染的發病初期,可見α1或α2球蛋白增加;在慢性炎症或感染後期,可見γ球蛋白增加。
5.低γ球蛋白血症或無γ球蛋白血症:血清γ球蛋白極度下降或缺乏。空腹12小時取靜脈血。
㈨ 血清脂蛋白-α的檢查
用聚苯乙烯微量反應板為固相載體,以apo(a)單克隆抗體(McAb)包被,加入待測標本,使其中的apo(a)與圃相化的McAb結合,洗滌除去未結合的標本中其他蛋白質,再加入酶標記的apo(a)McAb,與結合到固相抗體上的apo(a)作用,洗滌除去未結合的酶標記物。加入酶的相應底物產生顏色反應,顯色程度決定於結合在固相載體上的apo(a)量。
McAb應用雜交瘤技術制備,以超速離心結合層析法純化的Lp(a)為抗原。所制備的McAb應與apoB及纖溶酶原(PMG)無交叉反應。混合數株識別apo(a)上不同抗原位點的McAb,用於建立血清Lp(a)雙抗體夾心ELISA法。 (1)包被緩沖液:0.02mol/L碳酸鹽緩沖液,pH9.5。
(2)包被抗體與酶抗體:用McAb混合液,以硫酸銨沉澱法制備抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以過碘酸鹽法交聯辣根過氧化物酶(RZ≥3)得酶標抗體,-20℃保存可穩定數月。
(3)稀釋/封閉液:pH7.4緩沖液含磷酸鹽0.01mol/L及氯化鈉0.15mol/L,臨用前取適量緩沖液,加入適量小牛血清及吐溫-20。
(4)底物溶液:0.1mol/L檸檬酸及0.2mol/LNa2HPO4緩沖液,pH5.0,臨用前每100ml緩沖液中加入鄰苯二胺0.1g及30%H2O20.1ml。
(5)終止液:2mol/LH2SO4。
(6)洗滌液:0.15mol/LNaCl,每升含吐溫-200.5ml。
(7)參考血清:目前尚無公認的定值血清,可暫用商品(如BM公司產品,1410962)。 (1)包被:聚苯乙烯板,96孔。抗apo(a)-IgG用包被液稀釋成10μg/ml濃度,每孔加150μg/ml,4℃過夜。
(2)洗板及封閉:包被後的小孔用洗滌液洗3次,每次5min。每孔中加入封閉液0.15ml,37℃放置30min後,再用洗滌液洗3次。
(3)稀釋:參考血清1∶200稀釋起,用稀釋液倍比稀釋8管,作標准曲線用。血清標本可稀釋成1∶100或1∶2000後復查。
(4)加樣:每孔中加入稀釋後的參考血清及標本各100μl,留空白孔只加稀釋液,37℃1h可用洗滌液洗3次。
(5)加酶標抗體(稀釋度因抗體效價而定,例如1∶20000):每孔100μl,37℃1h。
(6)顯色:每孔中加底物溶液100μl,室溫(25℃)避光放置15min。
(7)終止反應:每孔中加入終止液50μl。
(8)比色:在酶標比色計上以空白孔校零點比色,波長490nm,讀取各孔吸光度(A)。
