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抗dna酶b用什麼儀器檢測

發布時間:2022-09-06 01:05:55

『壹』 ELISA檢測需要什麼儀器

在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。對於隔天再檢測的樣本,及時分裝後凍存在-20℃備用,有條件的,最好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。液體類標本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。3.尿液:用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。5.培養細胞檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。6.組織標本切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘冷凍備用。

『貳』 測定DNA含量用什麼方法

紫外分光光度計 OD260/280比值,如果濃度夠大的話可以適當稀釋,是OD260在0.1到1之間最好,OD260值為1時 雙鏈DNA一般為50ng/ul.單鏈DNA一般為40ng/ul,需要具體測的話還是用熒光定量DNA檢測試劑盒,用多功能酶標儀檢測,還有一種就是跑電泳,根據已知濃度條帶的亮度對比你提的DNA亮度,這個需要分析軟體,肉眼是無法正確比較的。

『叄』 做基因檢測用的儀器是什麼

不同的項目,檢查設備儀器不同,例如一代,二代,三代,還有飛行質譜等

『肆』 如何選擇酶標儀

2020年,新冠肺炎全球爆發,常規的核酸檢測判別是否感染新冠病毒,血清抗體檢測則可以揭示中國人群新冠病毒的感染情況,隨著疫情防控常態化,大規模血清檢測對於監控人群免疫情況十分必要。如此看來,作為酶聯免疫檢測的核心儀器,酶標儀的采購情況被業內看好。

酶標儀作為一個常用的儀器,其基本功能不外乎一個比色測定,與比色計所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟體功能等方面的差異,當然全自動酶免疫分析系統還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。那麼,實驗室在選購酶標儀的時候都要注意哪些關鍵信息呢?

濾光系統

酶標儀最簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標儀裡面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵並不能同時完成同一個檢測,本質上還只是把濾片和光柵放在了一起,並沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。光柵型濾光系統具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優點。當然,濾光片系統也有其顯著的優勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統,在化學發光檢測中光線的透過率高。目前,濾光片系統應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。

測定波長

一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有最大吸收,當pH值降為L 0時,最大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什麼情況下使用單或雙波長檢測。所謂的「單波長」就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而「雙波長」則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀最後列印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自於板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設空白孔。

測定的吸光度范圍

通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0~2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0~2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,並且能保持很好的精密度與線性。因此,對於酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。

光學系統

酶標儀的光學系統採用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和准確度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

檢測速度

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快,有利於提高檢測的精密度,即避免由於測定過程中,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非常快,通常在數秒鍾內。

震板功能

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振盪混勻,使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振盪幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑後,可不必振盪混勻,直接放人酶標儀上測定即可。

溫育功能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,溫育功能只是酶標儀的一個附加功能,是否具有並不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇,則可根據自己實驗室的條件及需要來決定。

軟體功能

軟體功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等數據的統計分析並報告結果的功能。軟體功能是中高檔酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬體方面區別不大,則軟體就成為判定酶標儀優劣的惟一指標。對於用戶來說,好的軟體功能,對實際工作會有較大的幫助。ELISA定性測定,酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定「灰區」(即指測定吸光度處於cut—off周圍的一定區域,此區域內結果應為「可疑」)的統計計算功能,不但方便了實驗室工作人員,而且在某些特定的情況下,有很高的實用價值。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟體功能中,最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用於微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。此外,酶標儀兼做酶標動力學、凝集反應測定所需的軟體是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由於此類軟體一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實驗室特殊需要,就不必強求這種軟體功能。

語言界面

通常進口的中高檔酶標儀人機對話多採用英文。這對於某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難,從而難以最大限度地發揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標儀採用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術人員的使用。綜上所述,盡管酶標儀的發展極為快速,種類繁多,功能也不斷加強,但其最根本的功用是不變的,即比色測定。大凡比色測定,其基本要求就是在一定吸光度范圍內要有好的測定準確性、線性和精密性。同樣的吸光度范圍,測定的准確性、線性和精密性越好則酶標儀亦越佳。而且,由於用於酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重復性,則測定速度也是一個較重要的性能指標。至於其他如震板、溫育及有關的軟體功能,則是選配功能,不影響酶標儀其他的使用性能。答案來自

『伍』 酶活性分析的常用方法

一、量氣法

在封閉的反應系統中如有氣體變化,通過測量變化後的氣體體積或壓力很容易計算出氣體變化量,這是量氣法的基本原理。曾在檢驗科廣泛應用的Van-slyke測二氧化碳結合力的方法就是量氣法的一個典型例子。Warburg進一步加以發展,設計出專用於測定酶活性的華勃呼吸儀。這種儀器特別適用於測定那些在反應中產生或消耗氣體的酶,例如氧化酶反應涉及到O2的消耗,脫羧酶會產生CO2。但也不僅限於這些酶,科學家採用與CO2氣體保持平衡過的重碳酸鹽體系,可用來測定各種產生H+的酶反應,如各種還原酶,可使NADH變為NAD和H+,而H+會促使反應體系中重碳酸鹽變為CO2氣體。

二、比色法與分光光度法

在20世紀上半個世紀華勃儀得到研究實驗室廣泛的應用,並在酶學上得到豐碩的成果。但此法操作煩瑣,技術要求高而且靈敏度低。臨床常規中很少使用。多使用簡單易行的比色法測酶活性。在上半個世紀建立了一些適用於常規工作的測酶活性濃度的方法,如測定澱粉酶的Somogyi法,鹼性磷酸酶的Bodansky法、King法等等。這些方法都是在酶和底物作用一段時間後停止酶反應,加入各種化學試劑與產物或基質反應呈色,用比色計在可見光處比色,同時將被測物質作標准管或標准曲線,比較後計算出在此段時間內產物生成量或底物消耗量,從而求得反應速率v。

比色法從50年代起逐步被分光光度法所取代。這是因為分光光度法有以下幾個顯著優點:一是測定范圍不只局限在可見光,還可擴展到紫外和紅外部分。這就為擴大測定酶范圍提供了可能性。二是提供了尋找一類不需停止酶反應就可直接測定產物生成量或底物消耗量方法的可能性。例某一酶催化下列反應A->B+C,A、B、C三種物質用分光光度法的吸收光譜如圖17-1所示。

圖17-1 A、B、C三種物質的吸收曲線

可以看到C在560nm處有一吸收峰,而A和B在此處無吸光度變化因此無需停止酶反應,只要在560nm處測定吸光度變化就很容易計算出C的變化速度,而且C物質比A、B二物質有更高的吸收峰,即靈敏度最高。

這類方法中最成功的是Warburg在50年代利用NAD(P)H和NAD(P)吸收光譜差異建立的測酶活性濃度方法。NAD(P)H在340nm處有一吸收峰,而NAD(P)在此波段卻毫無吸光性。因此建立了一類和原來比色法截然不同方法。不需停止酶反應,在340nm根據吸光度變化,就可觀察到酶反應變化全過程。

第三個優點是不需要如比色法那樣,作標准管或標准曲線,因為分光光度計使用近似單色光的光源,在此條件下,某一特定物質的吸光度為常數,即人們所熟悉的摩爾吸光度(molar absorbance)。根據此值從吸光度△A/△T不難計算出酶催化反應速度v。

分光光度計的這些簡便、准確等特點使它在近年來已逐步取代比色法而成為目前最流行的方法。其缺點是需要精確帶恆溫裝置的分光光度計,在經濟不發達地區尚難推廣。

分光光度法的技術多樣化。設計得當可用於各種酶的測定。表17-2是一些可用於分光光度法的氧化還原物質特性。

除了前述的NAD(P)H系統可用於脫氫酶測定外,可利用黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)來測定各種含這二個輔基的酶。它們的氧化型在450nm有一很強吸收峰,而還原型的吸光度很低,同樣細胞色素還原型在可見光有一個非常明顯和很窄的吸收峰,都使人們很容易用分光光度法研究這些酶的作用。上述物質主要用於氧化還原酶的測定。

科學家還設計出一系列人工合成酶的底物,用於其它酶的分光光度法測定。例如合成了很多對硝基酚的衍生物,用於各種水解酶的測定。鹼性磷酸酶底物磷酸對硝基酚就是一個成功例子。又如測芳香基硫酸酯酶,可使用人工合成的硫酸對硝基酚為底物,其分解產物的吸收峰由原來的278nm變為318nm,Webb成功地在330nm進行此酶監測

表17-2 一些氧化還原物質的特性

物質 波長(nm) 克分子吸光度
還原型 氧化型
NAD,NADP 340 6300 0
FMN 450 12200
FAD 450 11300
細胞色素C 550 29500 8300
亞甲藍(等消光點) 610 0 41000
二氫酚吲哚酚 600 0 21000
吩嗪甲酯硫酸 388 1500 22000
抗壞血酸 265 15100
連二亞硫酸鹽 314 8000 0
氰化鐵(亞鐵) 420 0 1020

分光光度法的上述原理還可以用於其它酶的測定,如烯醇化酶、延胡索酸水解酶的底物由於含不飽和鍵,在330nm處有很強吸收峰,而酶作用產物無此不飽和鍵。則不難在330nm處對這些酶進行直接測定。

此後在分光光度法的發展過程中又導入了酶偶聯技術。使得分光光度法幾乎能測定所有的酶。因此臨床實驗室工作者如不能很好掌握分光光度法的技術,不了解各種影響因素,要作好酶的測定是很困難的。

三、熒光法和同位素法

分光光度法有一個缺點,即靈敏度較低。有些標本中酶濃度很低時往往測不出來。此時可考慮改用熒光法,可將測定靈敏度提高2-3個數量級。如科學家合成了一系列甲基傘形酮的衍生物,可取代對硝基酚衍生物做為一些水解酶的底物,由於水解產物甲基傘形酮有強烈熒光,大大提高測定的靈敏度,就是分光光度法中最常用的NAD(P)H反應系統,也可改用熒光法,在340nm紫外線激發下NAD(P)H產生強烈的藍色熒光,而NAD(P)不被激發。此外,還可使用在熒光法基礎上發展起來的時間分辨熒光法,例如北京醫院就曾利用此種靈敏度極高方法測定很難用其它方法檢測的腦脊液中微量的烯醇化酶。熒光法不易掌握,對所用的試劑、容器和儀器都要求很高,否則易產生非特異熒光干擾測定,或者引起熒光的淬滅使測定不準,故此種方法多用於研究實驗室,少用於常規實驗室。為提高靈敏度,還可使用同位素標記的底物進行酶測定,例如,有人以C12標記的乙醯膽鹼為底物測定膽鹼酯酶,在酶作用後以離子交換法分離出含C14的乙酸。同位素方法由於對人體有害,操作麻煩,目前已很少使用。

四、其它方法

離子選擇電極法,旋光法等有時用於測定特定的酶,當酶反應牽涉到有酸鹼變化時,很容易用pH儀直接觀察酶反應過程中H+的變化。直接用pH儀測酶反應有兩個缺點:一是隨pH變化,會偏離酶作用的最適pH值,不可避免地引起酶反應速度變慢。其二是如測定的標本不是純酶時標本中其他蛋白及其它有緩衡能力的物質將會影響所測pH變化的程度。此時如改用電位滴定儀則更為適合。此儀器可在酶反應過程中不斷向反應體系中加入酸或鹼以維持反應體系pH的恆定,而加入的酸鹼量只與體系中H+變化量相關,和反應體系中緩衡能力無關。

同樣如酶反應中有O2變化,可使用氧電極來監測酶反應過程,這可用來測定葡萄糖氧化酶活性,Chappell還成功地將此技術用於測線粒體的氧化能力。還曾有人嘗試用二氧化碳和氨電極測酶,由於這些電極反應時間較慢,不利於檢測酶反應速度。有些酶的反應物為光學異構體,則可根據旋光度變化來追蹤酶反應。某些反應物如羥基酸本身雖無旋光性,但與鉬結合後產生很高的旋光性。根據此特性建立了測定延胡索酸水合酶的方法。還有個別酶的測定使用了極譜法、高效液相色譜法等。總之,實驗室工作者完全可以根據實驗室現有儀器和技術,創造性地建立一些新的測活性濃度的方法。

『陸』 ELISA試劑盒都可以通過什麼儀器使用

1、ELISA試劑盒都可以通過酶標儀使用。

2、酶標儀即酶聯免疫檢測儀是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。

『柒』 抗DNA酶B是高怎麼辦

一般情況下抗
DNA酶
B高
多考慮風濕
腎病
系統性紅斑狼瘡
的可能
你有
關節疼痛
風濕的可能性要大
風濕是屬於風濕性
鏈球菌感染
所致
打青黴素是正確的建議你繼續治療
飲食上要
清淡飲食
忌食辛辣刺激性的食物

『捌』 怎麼使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶報告基因

以Promega公司雙熒光素酶檢測試劑盒為例:
1. 試劑准備
按照說明書配製PLB細胞裂解液、LAR II檢測液、Stop&Glo檢測液。

2.儀器准備
准備單管或微孔板發光檢測儀

3. 樣品准備
按照說明書使用PLB細胞裂解液裂解細胞,取20ul細胞裂解液

4. 檢測過程
a) 在1.5ml離心管中加入20ul細胞裂解液,然後加入100ul的LARII溶液,混合後放入發光檢測儀檢測第一次發光值;
b) 然後加入Stop&Glo檢測液,終止第一次發光,同時開始第二次發光,混合後放入發光檢測儀檢測第二次發光值。

『玖』 都有哪些驗血器材它們各用在什麼樣的驗血類型中

1.血細胞分析儀:血細胞分析(血常規)
2.半自動/全自動生化分析儀:生化檢驗(如:肝功能、腎功能、血糖血脂...)
3.電解質分析儀:電解質檢測:鉀、鈉、氯、鈣
4.血凝儀:血凝項目:PT、APTT、TT、FBI...
5.酶標儀:免疫定性/半定量檢測:乙肝兩對半、丙肝抗體、HIV抗體...
6.化學發光分析儀:免疫定量:T3、T4、TSH、激素、腫瘤標志物等...
7.放射免疫分析儀:同上,因為有放射性廢棄物,已逐漸被化學發光免疫分析儀取代。
8.血氣分析儀:血氣分析:氧分壓、二氧化碳分壓
9.血液椎板粘度儀:血流變:高、中、低全血/血漿粘度。
10.PH計:血液酸鹼度:大部分血氣分析儀也有此功能
11.血沉儀:用於血沉測定,比手工法多一項血沉方程系數
12.血糖儀:用於急診末梢血糖檢測
13.免疫比濁儀:用於免疫項目檢測:ASO、RF、CRP、IG(G、D、E、M、A)、C3、C4...
15.電泳儀、分光光度掃描儀:用於:血清蛋白電泳、血紅蛋白電泳、同功酶分析...
16.基因擴增儀、電泳儀、時間分辨熒光分析儀:分子生物學診斷:乙肝DNA檢測、親子鑒定等
17.原子吸收分光光度計:微量元素檢測
...
其他廠用儀器設備:
顯微鏡:血細胞分析
離心機: 分離血清
水浴箱:模擬人體37度環境
培養箱:血液細菌培養、細胞培養
...

『拾』 PCR儀是個什麼儀器

PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。

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