測定根系活力時用什麼儀器

『壹』 SSAM中TTC是怎麼算出來的

物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和活力水平直接影響地上部的營養狀況及產量水平.本實驗練習測定根系活力的方法,為植物營養研究提供依據.一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是標准氧化電位為80 mV的氧化還原色素,溶於水中成為無色溶液,但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲 （TTF）,如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比較穩定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC還原量能表示脫氫酶活性,並作為根系活力的指標.

二、實驗材料、試劑與儀器設備

（一）實驗材料

水培或砂培小麥、玉米等植物根系.

（二）試劑

1. 乙酸乙酯（分析純）.

2. 2.次硫酸鈉（Na2S2O4,分析純）,粉末.

3. 3.1％TTC溶液：准確稱取TTC 1.0 g,溶於少量水中,定容到100 mL.用時稀釋至需要的濃度.

4. 4.磷酸緩沖液（1/15 mol/L,pH7.0）.

5. 5.1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55 mL,邊攪拌邊加入盛有500 mL蒸餾水的燒杯中,冷卻後稀釋至1000 mL.

6. 6.0.4 mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72 g,溶於水中,定容至100 mL即成.

7. （三）儀器設備

8. 小燒杯3個,研缽1個,移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支,刻度試管6支,分光光度計,分析天平（感量0.1 mg）,電子頂載天平（感量0.1 g）,溫箱,試管架,勺,石英砂適量,濾紙.

9. 三、實驗步驟

10. 1.定性測定

11. （1）配製反應液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合.

12. （2）把根仔細洗凈,把地上部分從莖基部切除.將根放入三角瓶中,倒入反應液,以浸沒根為度,置37℃左右暗處放1～3 h,以觀察著色情況,新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色,表明該處有脫氫酶存在.

13. 2.定量測定

14. （1）TTC標准曲線的製作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大試管中,加9.8 mL乙酸乙酯,再加少許Na2S2O4粉末搖勻,則立即產生紅色的TTF.此溶液濃度為每毫升含有TTF 80 μg.分別取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度試管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列標准溶液,以乙酸乙酯作參比,在485 nm波長下測定吸光度,繪制標准曲線.

15. （2）稱取根尖樣品0.5 g,放入小燒杯中,加入0.4％ TTC溶液和磷酸緩沖液（pH7.0）各5 mL,使根充分浸沒在溶液內,在37℃下暗保溫1～2 h,此後立即加入1 mol/L硫酸2 mL,以停止反應.（與此同時做一空白實驗,先加硫酸,再加根樣品,37℃下暗保溫後不加硫酸,其溶液濃度、操作步驟同上）.

16. （3）把根取出,用濾紙吸干水分,放入研缽中,加乙酸乙酯3～4 mL,充分研磨,以提出TTF.把紅色提取液移入刻度試管,並用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2～3次,皆移入刻度試管,最後加乙酸乙酯使總量為10 mL,用分光光度計在波長485 nm下比色,以空白試驗作參比測出吸光度,查標准曲線,即可求出TTC還原量.

17. 四、結果計算

18. 根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g?h）]

19. 式中：C——四氮唑還原量,μg.

20. W——根重,g.

21. h——時間,h.
    

『貳』 TTC法測定根系活力為什麼要將材料置於黑暗處37度

植物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長和營養狀況及產量水平。根系活力是衡量根系功能的主要指標之一，所以研究植物根系生理時，一定要測定根系活力。

浸種溫度、浸種時間和TTC濃度對快速測定種子生活力起主要作用。TTC法測定短花針茅、大針茅、克氏針茅、貝加爾針茅種子4種針茅種子最佳染色技術條件是:短花針茅種子30℃ - 6 h- 0.3%- 40℃ -3 h。

大針茅種子30℃ - 3 h- 0.1%- 40℃ - 6 h,克氏針茅30℃ - 6h- 0.3%- 35℃ - 18 h和貝加爾針茅35℃ - 12 h- 0.3%- 30℃ - 18 h。

(2)測定根系活力時用什麼儀器擴展閱讀：

TTC法測定根系：

選用TTC法測定闊葉樹容器苗根系活力時,用乙酸乙酯研磨、甲醇浸泡提取TTF的2種測定根系活力的方法均可使用,但以採用有機溶劑甲醇浸泡法提取TTF為佳。根的生命活動力最旺盛的部位是根尖,主根的生命活動力較低。

取樣是應各個樹種的分化不完善的第2側根和第1側根,並切取0～ 1.0 cm的根尖切段作為試材為宜。故在進行容器苗的根系活力測定時,取樣時應不要把根弄斷,並將根上附著的泥土洗凈,並取分化不完善的第2側根和第2側根0～ 1.0 cm的根尖切段作試材。

『叄』 ttc法測根系活力中為什麼用乙酸乙酯

ttc的還原產物ttf（三苯基甲臢）是不溶於水的穩定紅色物質，在進行定量測定時，需要用到光吸收，而沉澱是不能用於光密度測定的。所以要使用可以溶解ttf的乙酸乙酯。

『肆』 TTC法測定根系活力，能不能把樣放在超低溫冰箱里保存，再測定，或者用別的保存方法。要准確答復，謝謝

不能放冰箱，。
Ttc主要是靠呼吸作用測定，放入冰箱會減弱呼吸作用，影響實驗結果。
望採納～

『伍』 為什麼要測定植物根系活力

因為根的生長情況和活力水平直接影響到植物個體的生長情況，營養狀況和產量水平，所以要測定根系活力。

植物的根和地上部的生長具有相關性，一方面二者相互依賴，根負責從土壤中吸收水分，礦物質，有機質以及合成少量的有機物，細胞分裂素等等供地上部所用，而地上部則提供給根生長所必需的糖類，維生素等。

根系發達，則地上部分生長良好。另一方面二者又相互制約，主要表現在對水分，營養等的爭奪上，並從根冠比的變化上反映出來。

(5)測定根系活力時用什麼儀器擴展閱讀：

據科學家研究，根冠中央細胞含有澱粉粒，這些澱粉粒可能起到「平衡石」的作用，在自然情況下，根垂直向下生長，「平衡石」沉積在根冠細胞的下部，水平放置後根冠中「平衡石」受重力影響改變了在細胞中的位置，向下沉積。

這種變化可能導致平衡石本身或通過它影響內質網而釋放鈣離子運向根的的近地一側，此處鈣離子量的增加又可能加強一種生長素(吲哚乙酸，即IAA)的向頂運輸，進入根尖伸長區的近地一側，使此處細胞生長速率明顯下降，而遠地部分的生長只受微小影響，從而使根向地彎麴生長。

這種方向性對植物來說是至關重要的，因為根只有向下生長，才能固定植物，才能充分吸收土壤中的水分和營養，而莖只有向上生長，才能使葉子得到光照，進行光合作用，製造自己需要的營養物質並放出氧氣。

『陸』 甲烯藍法和TTC法的區別

根系活力的測定
1、TTC法：http://www.bbioo.com/bio101/2005/5210.htm
原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標准氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶於水中成為無色溶液，但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比較穩定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，蘋果酸得到增強，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性並作為根系活力的指標。
2、甲烯藍法：
【原理】
根據沙比寧等的理論，植物對溶質的吸收具有表面吸附的特性，並假定被吸附物質在根系表面形成一層均勻的單分子層；當根系對溶質的吸附達到飽和後，根系的活躍部分能將吸附著的物質進一步轉移到細胞中去，並繼續產生吸附作用。在測定根系活力時常用甲烯藍作為吸附物質，其被吸附量可以根據吸附前後甲烯藍濃度的改變算出，甲烯藍濃度可用比色法測定。已知1mg甲烯藍形成單分子層時覆蓋的面積為1.1m2，據此可算出根系的總吸收面積。從吸附飽和後再吸附的甲烯藍的量，可算出根系的活躍吸收表面積，作為根系吸收活力的指標。
http://jpk.syau.e.cn/course/zwslx/content.asp?id=577

『柒』 用ttc法測定根系活力的測定中保險粉的含量對實驗有何影響

物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和活力水平直接影響地上部的營養狀況及產量水平.本實驗練習測定根系活力的方法,為植物營養研究提供依據.一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標准氧化電位為80 mV的氧化還原色素,溶於水中成為無色溶液,但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲 （TTF）,如下式：
生成的三苯甲 （TTF）比較穩定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC還原量能表示脫氫酶活性,並作為根系活力的指標.
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
水培或砂培小麥、玉米等植物根系.
（二）試劑
1.乙酸乙酯（分析純）.
2.次硫酸鈉（Na2S2O4,分析純）,粉末.
3.1％TTC溶液：准確稱取TTC 1.0 g,溶於少量水中,定容到100 mL.用時稀釋至需要的濃度.
4.磷酸緩沖液（1/15 mol/L,pH7.0）.
5.1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55 mL,邊攪拌邊加入盛有500 mL蒸餾水的燒杯中,冷卻後稀釋至1000 mL.
6.0.4 mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72 g,溶於水中,定容至100 mL即成.
（三）儀器設備
小燒杯3個,研缽1個,移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支,刻度試管6支,分光光度計,分析天平（感量0.1 mg）,電子頂載天平（感量0.1 g）,溫箱,試管架,葯勺,石英砂適量,濾紙.
三、實驗步驟
1.定性測定
（1）配製反應液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合.
（2）把根仔細洗凈,把地上部分從莖基部切除.將根放入三角瓶中,倒入反應液,以浸沒根為度,置37℃左右暗處放1～3 h,以觀察著色情況,新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色,表明該處有脫氫酶存在.
2.定量測定
（1）TTC標准曲線的製作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大試管中,加9.8 mL乙酸乙酯,再加少許Na2S2O4粉末搖勻,則立即產生紅色的TTF.此溶液濃度為每毫升含有TTF 80 μg.分別取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度試管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列標准溶液,以乙酸乙酯作參比,在485 nm波長下測定吸光度,繪制標准曲線.
（2）稱取根尖樣品0.5 g,放入小燒杯中,加入0.4％ TTC溶液和磷酸緩沖液（pH7.0）各5 mL,使根充分浸沒在溶液內,在37℃下暗保溫1～2 h,此後立即加入1 mol/L硫酸2 mL,以停止反應.（與此同時做一空白實驗,先加硫酸,再加根樣品,37℃下暗保溫後不加硫酸,其溶液濃度、操作步驟同上）.
（3）把根取出,用濾紙吸干水分,放入研缽中,加乙酸乙酯3～4 mL,充分研磨,以提出TTF.把紅色提取液移入刻度試管,並用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2～3次,皆移入刻度試管,最後加乙酸乙酯使總量為10 mL,用分光光度計在波長485 nm下比色,以空白試驗作參比測出吸光度,查標准曲線,即可求出TTC還原量.
四、結果計算
根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g?h）]
式中：C——四氮唑還原量,μg.
W——根重,g.
h——時間,h.

『捌』 急呀 知道的給說一下 生化實驗！！！製作定 量分析測定標准曲線的原理和方法

植物生理生化實驗課程教學大綱

一、課程基本概況

1. 課程名稱：植物生理生化實驗

2. 課程名稱（英文）： Experiments of Plant physiology and Biochemistry

3. 課程編號：B16035

4. 課程總學時：60學時（均為實驗教學）

5. 課程學分：3學分

6. 課程分類：必修課

7. 開設學期：第3、4學期

8. 適用專業：園藝、農學、植物保護、植物生物技術等農科類本科專業。

9. 先行課：《物理學》、《化學》、《分析化學》、《植物生理生化》等。

二、課程性質、目的和任務

本課程是植物生理學的配套課程，是農科類各專業必修的專業基礎課，屬於以植物為對象各專業的工具課程之一。其先行課為物理學、化學、分析化學、植物學、生理生化。該課程主要介紹植物生理生化的實驗研究技術以及常用植物生理生化指標的分析方法及原理，為專業課的學習與科學研究工作提供技術支持與手段。

通過本課程的學習，要求學生掌握植物生理生化的一些基本實驗技術與原理，熟悉植物生理生化常規儀器的使用方法，能獨立設計並完成一般性實驗內容，操作規范，能夠完成以植物為材料的基本的科學研究工作。從而達到更好地利用植物、人為地影響和改造植物，使之更大限度的為人類服務的目的。。

三、主要內容、重點及難點

實驗一 應用紙層析分離鑒定氨基酸

（一）目的要求：學習紙層析分離技術，掌握紙層析分離鑒定氨基酸的原理和方法。

（二）重點：紙層析分離鑒定氨基酸的原理、操作方法、結果分析。

（三）難點 點樣適量、分析確定層析結果。

實驗二 氨基酸含量的測定——茚三酮比色法

（一）目的要求：掌握茚三酮比色法測定氨基酸含量的原理和方法；學習分光光度計的使用；學習標准曲線的製作。

（二）重點：實驗原理和操作方法

（三）難點：樣品提取、標准曲線製作和使用。

實驗三 可溶性糖含量的測定——蒽酮法

（一）目的要求：掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法，了解可溶性糖含量這一生理指標的意義。練習分光光度計的使用和標准曲線的製作。

（二）重點：實驗原理和方法；蒽酮試劑的配製。

（三）難點：樣品提取及適度稀釋，標准曲線製作和使用。

實驗四 蛋白質含量的測定

（一）方法：考馬斯亮藍比色法；福林酚比色法

（二）目的要求：掌握測定蛋白質含量的原理和方法，了解蛋白含量測定的意義及使用方面。練習分光光度計的使用和標准曲線的製作。

（三）重點：了解實驗原理，正確運用方法。

（四）難點：樣品提取及適度稀釋，標准曲線製作和使用。

實驗五 酶的基本性質

（一）目的要求：通過實驗，進一步理解酶的重要性質和影響酶活性的條件。

（二）重點：酶的專一性，溫度、pH、激活劑、抑制劑對酶活性的影響，鑒定酶促反應速度快慢的依據和方法

（三）難點：鑒定酶促反應速度快慢的依據和方法。

實驗六 RNA的提制

（一）目的要求：掌握濃鹽法提制RNA的原理和方法，進一步理解RNA的理化性質。

（二）重點：理解實驗原理和各步操作的方法、意義和目的。

（三）難點：理解實驗原理和各步操作的方法、意義和目的。

實驗七 RNA含量的測定

（一）目的要求：掌握苔黑酚法測定RNA含量的原理和方法；學習RNA含量和純度的計算方法及計算原理；進一步練習分光光度計的使用和標准曲線法的應用。

（二）重點：掌握苔黑酚法測定RNA含量的原理和方法；學習RNA含量和純度的計算方法及計算原理。

（三）難點：正確稱量，掌握測定原理。

實驗八 澱粉酶活性的測定

（一）目的要求：了解α澱粉酶和β澱粉酶催化的產物和作用條件，掌握α澱粉酶活性、β澱粉酶活性和澱粉酶總活性的測定原理和方法；進一步理解酶的作用條件。

（二）重點：澱粉酶活性的測定原理和方法，進一步理解酶的作用條件。

（三）難點：通過控制實驗條件，准確測定不同澱粉酶的活性。

實驗九 電泳法分離酶或蛋白質

（一）方法：醋酸纖維薄膜電泳；聚丙烯醯胺凝膠電泳

（二）目的要求：掌握電泳的概念、原理以及電泳技術

（三）重點：電泳的原理和電泳技術

（四）難點：電泳技術的掌握

實驗十 穀物種子中賴氨酸含量測定

（一）方法：茚三酮溶液顯色法；染料結合（DBL）法；.三硝基苯磺酸（PDAB）法

（二）目的要求：掌握測定原理、方法及技術

（三）重點：原理及標准曲線製作

（四）難點：材料處理

實驗十一 植物組織水勢的測定

（一）方法：小液流法

（二）目的要求：學習並掌握小液流法植物組織水勢的測定方法，理解水分在細胞內外的轉移的條件和水勢的概念。

（三）重點：測定原理和方法

（四）難點：根據試材確定濃度系列；檢驗操作方法。

實驗十二 呼吸強度的測定

（一）方法：小籃子法；氧電極法。

（二）目的要求：掌握呼吸強度的測定原理和方法；學習滴定管的使用。

（三）重點：測定原理和方法。

（四）難點：滴定管的使用；滴定終點的把握。

實驗十三 葉綠素含量的測定

（一）方法：光電比色法

（二）目的要求：掌握分光光度法測定葉綠素含量的原理和方法；學習分光光度計的使用。

（三）重點：葉綠素的提取、含量計算。

（四）難點：葉綠素的提取、定容；按要求稀釋到適當濃度；正確地使用分光光度計。

實驗十四 光合色素的提取分離與理化性質

（一）目的要求：進一步理解光合色素的重要理化性質；學習鑒定理化性質的方法。

（二）重點：光合色素的種類；光合色素的化學與光學性質；紙層析分離鑒定光合色素的方法。

（三）難點：皂化反應；吸收光譜。

實驗十五 硝酸還原酶活力測定

（一）方法： 對-氨基苯磺酸法。

（二）目的要求：掌握測定硝酸還原酶活力的原理及方法，加深對硝酸還原酶在植物體內重要作用的認識；學習真空泵的使用；練習標准曲線的製作。

（三）重點：測定原理和方法；真空泵的使用；標准曲線的製作。

（四）難點：理解測定原理；製作出符合要求的標准曲線；理解各步操作的目的性。

實驗十六 種子生活力的測定

（一）方法（三種方法同時做）：紅墨水染色法；TTC染色法；BTB顯色法。

（二）目的要求：理解測定原理；學會用三種方法測定種子生活力。

（三）重點：三種方法的原理與操作；各步注意事項。

（四）難點：在實踐中能根據具體種子的特點選擇適用的測定方法；能正確判別種子的生活力。

實驗十七 超氧化物歧化酶（SOD）活性測定

（一）方法：NBT光化還原法。

（二）目的要求: 認識SOD的作用及測定SOD活性的意義，掌握SOD的測定原理和方法。

（三）重點：掌握測定原理和方法；理解照光的意義。

（四）難點：測定原理；具體使用中能根據酶活決定加入提取液的數量；各種試劑的作用；實驗條件的控制。

實驗十八 過氧化物酶（POD）活性的測定

（一）方法：聯苯胺氧化法；愈創木酚法。

（二）目的要求：認識過氧化物酶的作用，掌握過氧化物酶活性的測定原理和方法。

（三）重點：明了測定原理；掌握測定方法。

（四）難點：具體使用中能根據酶活決定加入提取液的數量及三濾乙酸的量；准確保溫。

實驗十九 丙二醛（POD）含量的測定

（一）方法：硫代巴比妥酸法。

（二）目的要求：認識丙二醛的來源、作用及測定意義，掌握測定原理和方法。

（三）重點：測定原理和方法

（四）難點：明了測定原理；掌握測定方法。

實驗二十 植物細胞差別透性的測定

（一）方法：電導率儀法。

（二）目的要求：了解逆境對細胞膜透性的影響，掌握電導儀法測定細胞膜透性的原理和方法；學習電導儀的使用。

（三）重點：明了測定原理；掌握測定方法；學會使用電導率儀。

（四）難點：正確控制實驗環節，正確使用電導率儀。

實驗二十一 光合強度的測定

（一）方法：改良半葉法；氧電極法；光合測定儀法。

（二）目的要求：學習不同方法測定光合強度的原理；進一步理解總光合強度和凈光合強度；掌握測定方法；要求能根據需要和條件獨立完成光合強度測定。

（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；實驗環節的條件控制。

（四）難點：正確使用儀器和測定方法。

實驗二十二 脯氨酸含量影響

（一）方法：酸性茚三酮法；磺基水楊酸法。

（二）目的要求：掌握脯氨酸的測定方法及原理；能根據需要獨立完成測定過程。

（三）重點：標准曲線的製作、植物材料的處理。

（四）難點：標准曲線的製作、植物材料的處理。

實驗二十三 植物根系活力的測定

（一）方法：TTC比色法；α-萘胺氧化法。

（二）目的要求：理解根系活力的內涵，掌握根系活力的測定原理和方法。

（三）重點：實驗原理和方法

（四）難點：操作方法

實驗二十四 維生素C含量的測定

（一）方法：滴定法；二苯胺萃取比色法；2，4二硝基苯肼比色法；熒光法。

（二）目的要求：掌握測定原理和方法；能根據需要和條件選擇適當的測定方法。

（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；實驗環節的條件控制。

（四）難點：正確掌握操作方法。

實驗二十五 綜合性實驗——植物組織中POD的提取分離純化與鑒定

（一）方法：採用分段鹽析法提取分離POD；用透析法脫鹽；用福林酚法測定蛋白質含量；愈創木酚法測定POD活性，計算比活力和回收率；用聚丙烯醯胺凝膠電泳分離鑒定POD同工酶。

（二）目的要求：掌握實驗的基本原理和方法；能設計實驗操作流程。

（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；各實驗環節的銜接。

（四）難點：實驗技術的綜合運用。

實驗二十六 設計性實驗——植物組織衰老過程中的生理變化

（一）方法和實驗流程：設計使植物組織衰老的處理方法；根據理論知識，設計在衰老的不同階段測定與衰老有關的生理指標；確定各生理指標的測定方法；寫出實驗設計方案；配製葯品；取材、測定；寫出實驗報告。

（二）目的要求：學習實驗設計方法，初步培養科學研究的基本能力。

（三）重點：實驗設計、相關儀器的使用、測定原理和方法；各實驗環節的銜接。

（四）難點：試驗設計、實驗技術的綜合運用。

四、學時分配表

教學時數分配

順 序
授 課 內 容
學時分配
小計

生化實驗部分

（第三學期與生化理論課教學平行開課）
實驗一
應用紙層析分離鑒定氨基酸
4
4

實驗二
氨基酸含量的測定——茚三酮比色法
3
3

實驗三
可溶性糖含量的測定——蒽酮法
3
3

實驗四
蛋白質含量的測定——福林酚法
3
3

實驗五
RNA的提制
4
4

實驗六
RNA含量的測定
3
3

實驗七
澱粉酶活性的測定
4
4

實驗八
聚丙烯醯胺凝膠電泳分離同工酶
6
6

綜合性實驗

（任選）
將蛋白質含量測定、酶活性測定、聚丙烯醯胺凝膠電泳三項實驗內容綜合起來，開設綜合性實驗植物組織POD的提取分離純化與鑒定。
18
18

備選實驗一
酶的基本性質
4
4

備選實驗二
穀物種子中賴氨酸含量測定
3
3

生理實驗部分

（第四學期與植物生理理論課教學平行開課）
實驗十一
植物細胞水勢測定
3
3

實驗十二
呼吸強度測定
3
3

實驗十三
光合色素含量測定
3
3

實驗十四
光合色素的提取分離與理化性質
3
3

實驗十五
硝酸還原酶活性測定
3
3

實驗十六
種子生活力快速測定
3
3

實驗十七
超氧化物岐化酶（SOD）活性測定
3
3

實驗十八
過氧化物酶（POD）活性測定
2
2

實驗十九
丙二醛（MDA）含量測定
3
3

實驗二十
細胞差別透性測定
4
4

備選實驗一
光合強度測定
4
4

備選實驗二
脯氨酸含量測定
3
3

備選實驗三
根系活力測定
3
3

備選實驗四
維生素C含量測定
3
3

設計性實驗（任選）
將光合色素含量測定、POD、SOD活性測定、MDA含量測定和細胞差別透性測定結合起來，開設設計性實驗植物組織衰老過程中的生理變化。
15
15

註：根據需要和實驗室條件從中選擇60學時實驗，生理、生化部分各30學時。

五、課程教學的基本要求和主要環節

（一）實驗教學的基本要求：

1．堅持精講多練的原則，講授、演示、指導與學生獨立設計獨立完成相結合，讓學生成為實驗課主體。

2．將能力培養做為實驗課的主要目標追求。一方面要求學生掌握實驗原理，能根據實驗原理適當調整實驗步驟；另一方面訓練學生能根據專業研究的需要，能獨立地從選擇實驗內容、確定實驗方法、試劑配製、實驗條件控制、儀器使用等環節完成實驗內容；

3．把培養學生動手能力做為實驗課重點之一，達到規范操作目的。

4．實驗內容可根據需要和實驗室條件在大綱范圍內選擇10～11項，並應根據需要和實驗室條件啟動備選實驗。

（二）教學主要環節

1．實驗教學：與相應理論課相伴進行。

2．考試及成績構成：本課程為考查課。成績由兩部分構成，一是實驗報告成績，占總成績的30%～50%；二是期末考試成績，占總成績的50%～70%。

六、本課程與其它課程的聯系與分工

本課程與物理學、化學、分析化學、植物學、生理生化理論課有重要聯系，與化學尤其是分析化學的聯系尤為重要。

化學課為本課程奠定試劑配製、實驗室基本操作方法與操作規范的基礎，本課程運用這些知識與技能基礎完成教學，並在教學中使之鞏固和強化；

植物學為以植物為材料試材准備和取捨提供基礎知識；

植物生理生化為本課程的學習提供必要的理論指導，本課程的學習加深對生理生化知識的理解，並使深奧的理論知識具有可操作性，甚至使之物質化。

七、建議教材與參考教材

建議教材：劉永軍主編《植物生理生化實驗》，中國農業科技出版社，2002年。

參考教材：

1．李合生主編. 植物生理生化實驗原理及技術.北京：高等教育出版社，2000.

2．李建武等主編. 生物化學實驗原理和方法. 北京：北京大學出版社，2000.

3．白寶璋等. 植物生理學測試技術. 中國科學技術出版社，1993

4．西北農業大學. 基礎生物化學實驗指導. 陝西科學技術出版社，1986

5．張志良主編. 植物生理學實驗指導（第二版）. 北京：中國農業出版社，2000.

6．鄒琦主編. 植物生理學實驗指導. 北京：高等教育出版社，1990.

7．朱廣廉等主編. 植物生理學實驗. 北京：北京大學出版社，1990 .

9．李秀錦主編. 實用生化實驗技術. 北京：中國農業出版社，1995.

10．劉福嶺編著. 食品物理與化學分析方法. 北京：輕工業出版社，1987.

11．張承圭等合編. 生物化學儀器分析與技術. 北京：高等教育出版社，1990.

12．何忠孝主編. 電泳. 北京：科技出版社，1999.

13．華東師范大學生物系植物生理教研組編. 植物生理學實驗指導，人民教育出版社，1980

14．.植物生理與分子生物學報

15．.植物生理學通訊

『玖』 TTC法測定根系活力的標准方程，在線等!~

物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和活力水平直接影響地上部的營養狀況及產量水平。本實驗練習測定根系活力的方法，為植物營養研究提供依據。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標准氧化電位為80 mV的氧化還原色素，溶於水中成為無色溶液，但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲 （TTF），如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比較穩定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛用作酶試驗的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，並作為根系活力的指標。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
水培或砂培小麥、玉米等植物根系。
（二）試劑
1. 乙酸乙酯（分析純）。
2. 次硫酸鈉（Na2S2O4，分析純），粉末。
3. 1％TTC溶液：准確稱取TTC 1.0 g，溶於少量水中，定容到100 mL。用時稀釋至需要的濃度。
4. 磷酸緩沖液（1/15 mol/L，pH7.0）。
5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55 mL，邊攪拌邊加入盛有500 mL蒸餾水的燒杯中，冷卻後稀釋至1000 mL。
6. 0.4 mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72 g，溶於水中，定容至100 mL即成。
（三）儀器設備
小燒杯3個，研缽1個，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度試管6支，分光光度計，分析天平（感量0.1 mg），電子頂載天平（感量0.1 g），溫箱，試管架，葯勺，石英砂適量，濾紙。
三、實驗步驟
1. 定性測定
（1）配製反應液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。
（2）把根仔細洗凈，把地上部分從莖基部切除。將根放入三角瓶中，倒入反應液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1～3 h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。
2. 定量測定
（1）TTC標准曲線的製作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大試管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少許Na2S2O4粉末搖勻，則立即產生紅色的TTF。此溶液濃度為每毫升含有TTF 80 µg。分別取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度試管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列標准溶液，以乙酸乙酯作參比，在485 nm波長下測定吸光度，繪制標准曲線。
（2）稱取根尖樣品0.5 g，放入小燒杯中，加入0.4％ TTC溶液和磷酸緩沖液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸沒在溶液內，在37℃下暗保溫1～2 h，此後立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反應。（與此同時做一空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，37℃下暗保溫後不加硫酸，其溶液濃度、操作步驟同上）。
（3）把根取出，用濾紙吸干水分，放入研缽中，加乙酸乙酯3～4 mL，充分研磨，以提出TTF。把紅色提取液移入刻度試管，並用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2～3次，皆移入刻度試管，最後加乙酸乙酯使總量為10 mL，用分光光度計在波長485 nm下比色，以空白試驗作參比測出吸光度，查標准曲線，即可求出TTC還原量。
四、結果計算
根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g•h）]

式中：C——四氮唑還原量，μg。
W——根重，g。
h——時間，h。