❶ 流式細胞儀的原理是什麼
最近一直在了解流式細胞術和流式分選的知識,看到這個問題想回答一下:
流式細胞儀是以流式細胞術為基礎,快速精確的對單個細胞的理化性質進行定量分析和分選。分析流程為:制備單細胞懸液,用特異性熒光染料標記的抗體進行染色,經染色後的待測細胞在一定氣體壓力下被壓入流動室,在鞘液的包裹下細胞呈單行排列,依次通過檢測區域,在激光束的照射下細胞會產生散射光和激發熒光。這兩種信號會同時被光電倍增管( PMT) 接收。接收後可轉換為電信號,通過模/數轉換器,將連續的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號,進行分析。
如上所述,流式細胞儀是由液流系統、光路系統以及檢測分析系統三部分組成,部分儀器還具有分選功能,能對粒子進行充電和偏轉從而實現細胞分選。
液流系統:通過產生壓力使含有目的細胞的樣本快速進入儀器,在封閉的樣品管中利用樣品和鞘液之間的壓力差是樣本聚集到光學分析系統;
光路系統:由不同的激光器發射出的激光照射到細胞表面產生光信號,而後經過不同的光路系統被接收。在流式照射室的分析點,激光照射到細胞表面發生散射和折射,並發射出散射光包括前向散射光(FSC)和側向散射光(SSC),同時細胞表面的熒光素被激發發射出熒光。前向散射光和側向散射光檢測器收集散射光轉變為電信號;熒光則被聚光器收集,不同顏色的熒光被雙色反光鏡轉向不同的光電倍增檢測器,將熒光信號也轉變成電信號。FSC和SSC是流式分析中兩個非常基本的參數。FSC的值能代表細胞的大小,細胞的體積越大則FSC就越大。SSC則代表細胞的顆粒度,細胞內細胞器和顆粒度越大則SSC越大。
檢測分析系統:熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原強度或細胞內物質的濃度,光信號轉換為可被計算機識別的電信號。計算機把所測量的各種信號進行處理分析。
流式細胞分選是在流式細胞術的基礎上進行的。在流動室的噴口上方配有一個超高頻的壓電晶體,產生的振動使噴出的液流形成均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷(對標有熒光素的細胞液滴帶以負電荷;未標記熒光素的細胞液滴帶以正電荷;而不含有細胞的液滴則不被帶電荷),當液滴流經偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,不帶電荷的液滴落入廢液容器,從而實現細胞的分離。
第一次回答希望能幫到你,如有理解不當的地方,歡迎指正!
❷ 美容院里用那什麼儀器來排除臉上的黑色素是不是化學原理
其實所謂的洗黑色素就是利用葯水起的化學反應。並不是真的把黑色素洗出來了,就是葯水裡面的成分和面部的污垢起的反應。
只有患有白癜風的人皮膚里才不會有黑色素,人體皮膚缺什麼都可以,是絕對不能缺黑色素的。

(2)細胞色素用什麼儀器檢測擴展閱讀
防止產生
一、注意勞動保護避免直接在陽光下暴曬,紫外線能促進黑色素細胞產生黑色素顆粒,使皮膚變黑,最好在暴曬部位塗 一些增白防曬霜。
二、注意飲食。平時要多飲水,多吃新鮮蔬菜、山楂、胡蘿卜,綉球菌,冬蟲夏草,靈芝等菌類食物,少吃食鹽,以減少黑色素的形成。
三、口服維生素C,它能將多巴醌還原為多巴,從而抑制黑色素的形成。
四、可口服中葯六味地黃丸,每次8丸,每日2—3次。
五、外用脫色或祛斑劑,可選用3% 雙氧水、5%白降汞軟膏或選用增白防皺霜、消斑增白霜、蛋白嫩膚霜、蛋白人參美容霜、特別增白粉蜜等。如長期使用可使黑皮膚有一定轉白作用。
六、禁用含有雌激素的軟膏或化妝品,因雌激素可促進黑色素形成,如塗用這些化妝品會使肌膚更黑,長期使用會導致皮膚病變。
❸ 流式細胞儀的原理和操作過程
原理:
流式細胞儀可同時進行多參數測量,信息主要來自特異性熒光信號及非熒光散射信號。測量是在測量區進行的,所謂測量區就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。液流中央的單個細胞通過測量區時,受到激光照射會向立體角為2π的整個空間散射光線,散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強度及其空間分布與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關,因為這些生物學參數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射,因此可利用不同的散射光信號對不經染色活細胞進行分析和分選。經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變,其散射光信號當然不同於活細胞。散射光不僅與作為散射中心的細胞的參數相關,還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。
在流式細胞術測量中,常用的是兩種散射方向的散射光測量:①前向角(即0角)散射(FSC);②側向散射(SSC),又稱90角散射。這時所說的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說來,前向角散射光的強度與細胞的大小有關,對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大;對球形活細胞經實驗表明在小立體角范圍內基本上和截面積大小成線性關系;對於形狀復雜具有取向性的細胞則可能差異很大,尤其需要注意。側向散射光的測量主要用來獲取有關細胞內部精細結構的顆粒性質的有關信息。側向散射光雖然也與細胞的形狀和大小有關,但它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感,也能對細胞質內較大顆粒給出靈敏反映。
在實際使用中,儀器首先要對光散射信號進行測量。當光散射分析與熒光探針聯合使用時,可鑒別出樣品中被染色和未被染色細胞。光散射測量最有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。
熒光信號主要包括兩部分:①自發熒光,即不經熒光染色細胞內部的熒光分子經光照射後所發出的熒光;②特徵熒光,即由細胞經染色結合上的熒光染料受光照而發出的熒光,其熒光強度較弱,波長也與照射激光不同。自發熒光信號為雜訊信號,在多數情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在免疫細胞化學等測量中,對於結合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關鍵。一般說來,細胞成分中能夠產生的自發熒光的分子(例核黃素、細胞色素等)的含量越高,自發熒光越強;培養細胞中死細胞/活細胞比例越高,自發熒光越強;細胞樣品中所含亮細胞的比例越高,自發熒光越強。
減少自發熒光干擾、提高信噪比的主要措施是:①盡量選用較亮的熒光染料;②選用適宜的激光和濾片光學系統;③採用電子補償電路,將自發熒光的本底貢獻予以補償。
操作過程:
①打開電源,對系統進行預熱;
②打開氣體閾,調節壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統;
③在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統;
④利用校準標准樣品,調整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的 基礎上,0和90散射的熒光強度最強,並要求變異系數為最小;
⑤選定流速、測量細胞數、測量參數等,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品;同時選 擇計算機屏上數據的顯示方式,從而能直觀掌握測量進程;
⑥樣品測量完畢後,再用去離子水沖洗液流系統;
⑦因為實驗數據已存入計算機硬碟(有的機器還備有光碟系統,存貯量更大),因此可關閉 氣體、測量裝置,而單獨使用計算機進行數據處理;
⑧將所需結果列印出來。
❹ 黑色素沉積檢測儀器,輕巧自助使用型的,哪裡有賣急求!!!
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❺ 細胞色素氧化酶的檢測方法
採用比色法檢測線粒體樣品中的細胞色素氧化酶C在細胞呼吸鏈中能量傳遞的活性,測定氧化底物的消耗速度 呼吸鏈氧化酶的測定 (氧電極法)測定氧氣的消耗速率
❻ 什麼是電子顯微鏡檢測法
電子顯微鏡檢測法是利用電鏡直接觀察脫毒培養後的植物材料,確定其中是否存在病毒顆粒,以及它們的大小、形狀和結構。
這種方法對於檢測潛伏病毒非常有用,只是所需的設備昂貴,技術復雜,不易在一般苗圃中推廣。
在常規電鏡制樣過程中,病毒顆粒不能集中地沉積在有效的電鏡視野內,而容易造成電鏡觀察時疏漏,而應用血清學與電鏡相結合的免疫電鏡技術(IEM),利用了抗體、抗原的親和性與吸附性特點,在電鏡抽樣過程中,於銅網上先鋪展一層細胞色素a,稍後再添加一滴抗體,多餘液滴用濾紙吸掉,最後點上一滴抗原和染液,由於細胞色素a的作用,減少了樣品的表面張力,使其能形成均勻的塗層,再加上抗體、抗原的吸附作用,使病毒能較集中地沉積在有效視野內,從而便於電鏡下觀察,提高了電鏡觀察的靈敏性和檢測概率。
❼ 請教常用的細胞篩選的方法~~
應該是流式細胞儀了 這個東西很管用
以下是部分內容 其實去網路一搜就好了
流式細胞計是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特徵參量,並可以根據預選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來。多數流式細胞計是一種零解析度的儀器,它只能測量一個細胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標,而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說,它的細節 解析度為零。
流式細胞計可同時進行多參數測量,信息主要來自特異性熒光信號及非熒光散射信號。測量是在測量區進行的,所謂測量區就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。液流中央的單個細胞通過測量區時,受到激光照射會向立體角為2π的整個空間散射光線,散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強度及其空間分布與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關,因為這些生物學參數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射,因此可利用不同的散射光信號對不經染色活細胞進行分析和分選。經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變,其散射光信號當然不同於活細胞。散射光不僅與作為散射中心的細胞的參數相關,還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。
在流式細胞術測量中,常用的是兩種散射方向的散射光測量:①前向角(即0角)散射(FSC);②側向散射(SSC),又稱90角散射。這時所說的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說來,前向角散射光的強度與細胞的大小有關,對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大;對球形活細胞經實驗表明在小立體角范圍內基本上和截面積大小成線性關系;對於形狀復雜具有取向性的細胞則可能差異很大,尤其需要注意。側向散射光的測量主要用來獲取有關細胞內部精細結構的顆粒性質的有關信息。側向散射光雖然也與細胞的形狀和大小有關,但它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感,也能對細胞質內較大顆粒給出靈敏反映。
在實際使用中,儀器首先要對光散射信號進行測量。當光散射分析與熒光探針聯合使用時,可鑒別出樣品中被染色和未被染色細胞。光散射測量最有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。
熒光信號主要包括兩部分:①自發熒光,即不經熒光染色細胞內部的熒光分子經光照射後所發出的熒光;②特徵熒光,即由細胞經染色結合上的熒光染料受光照而發出的熒光,其熒光強度較弱,波長也與照射激光不同。自發熒光信號為雜訊信號,在多數情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在免疫細胞化學等測量中,對於結合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關鍵。一般說來,細胞成分中能夠產生的自發熒光的分子(例核黃素、細胞色素等)的含量越高,自發熒光越強;培養細胞中死細胞/活細胞比例越高,自發熒光越強;細胞樣品中所含亮細胞的比例越高,自發熒光越強。
減少自發熒光干擾、提高信噪比的主要措施是:①盡量選用較亮的熒光染料;②選用適宜的激光和濾片光學系統;③採用電子補償電路,將自發熒光的本底貢獻予以補償。
樣品分選原理
流式細胞計的分選功能是由細胞分選器來完成的。總的過程是:由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴,根據選定的某個參數由邏輯電路判明是否將被分選,而後由充電電路對選定細胞液滴充電,帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發生偏轉,落入收集器中;其它液體被當作廢液抽吸掉,某些類型的儀器也有採用捕獲管來進行分選的。
穩定的小液滴是由流動室上的壓電晶體在幾十KHz的電信號作用下發生振動而迫使液流均勻斷裂而形成的。一般液滴間距約距約數百μm。實驗經驗公式f=v/4.5d給出形成穩定水滴的振盪信號頻率。其中v是液流速度,d為噴孔直徑。由此可知使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度,可能會改變分選效果。使分選的含細胞液滴在靜電場中的偏轉是由充電電路和偏轉板共同完成的。充電電壓一般選+150V,或-150V;偏轉板間的電位差為數千伏。充電電路中的充電脈沖發生器是由邏輯電路控制的,因此從參數測定經邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時間,一般為數十ms。精確測定延遲時間是決定分選質量的關鍵,儀器多採用移位寄存器數字電路來產生延遲。可根據具體要求予以適當調整。
(50)數據處理原理:FCM的數據處理主要包括數據的顯示和分析,至於對儀器給出的結果如何解釋則隨所要解決的具體問題而定。
①數據顯示:FCM的數據顯示方式包括單參數直方圖、二維點圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。
直方圖是一維數據用昨最多的圖形顯示形式,既可用於定性分析,又可用於定量分析,形同一般X—Y平面描圖儀給出的曲線。根據選擇放大器類型不同,橫座標可以是線性標度或對數標度,用「道數」來表示,實質上是所測的熒光或散射光的強度。縱座標一般表示的是細胞的相對數。圖10-2給出的是直方圖形式。只能顯示一個參數與細胞之間的關系是它的局限性。
二維點圖能夠顯示兩個獨立參數與細胞相對數之間的關系。橫座標和縱座標分別為與細胞有關的兩個獨立參數,平面上每一個點表示同時具有相應座標植的細胞存在(圖10-3)。可以由二維點圖得到兩個一維直方圖,但是由於兼並現象存在,二維點圖的信息量要大於二個一維直方圖的信息量。所謂兼並就是說多個細胞具有相同的二維座標在圖上只表現為一個點,這樣對細胞點密集的地方就難於顯示它的精細結構。
圖10-2 直方圖 圖10-3 二維點圖
二維等高圖類似於地圖上的等高線表示法。它是為了克服二維點圖的不足而設置的顯示方法。等高圖上每一條連續曲線上具有相同的細胞相對或絕對數,即「等高」。曲線層次越高所代表的細胞數愈多。一般層次所表示的細胞數間隔是相等的,因此等高線越密集則表示變化率越大,等高線越疏則表示變化平衡。圖10-4給出了二維等高圖的樣式。
假三維圖是利用計算機技術對二維等高圖的一種視覺直觀的表現方法。它把原二維圖中的隱座標—細胞數同時顯現,但參數維圖可以通過旋轉、傾斜等操作,以便多方位的觀察「山峰」和「谷地」的結構和細節 ,這無疑是有助於對數據進行分析的。圖10-5為假三維圖的示意圖。
圖10-4 二維等高圖 圖10-5 假三維圖
列表模式其實只是多參數數據文件的一種計算機存貯方式,三個以上的參數數據顯示是用多個直方圖、二維圖和假三維圖來完成的。可用ListMode中的特殊技術,開窗或用游標調出相關部分再改變維數進行顯示。例如,「一調二」就是在一維圖上調出二維圖來;「二調一」就是從二維圖中調出一維圖來。圖10-6給出了從二維圖等高圖中調出相應窗口的直方圖的示意圖。
圖10-6 從二維圖設窗調出直方圖示意
上面簡要地介紹了幾種數據顯示形式,在實際應用中,可根據需要選擇匹配,以便了解和獲得盡可能多的有用信息。
②數據分析:數據分析的方法總的可分為參數方法和非參數方法兩大類。當被檢測的生物學系統能夠用某種數學模型技術時則多使用參數方法。數學模型可以是一個方程或方程組,方程的參數產生所需要的信息來自所測的數據。例如在測定老鼠精子的DNA含量時,可以獲取細胞頻數的尖銳波形分布。如果採用正態分布函數來描述這些數據,則參數即為面積、平均值和標准偏差。方程的數據擬合則通常使用最小二乘法。而非參數分析法對測量得到的分布形狀不需要做任何假設,即採用無設定參數分析法。分析程序可以很簡單,只需要直觀觀測頻數分布;也可能很復雜,要對兩個或多個直方圖逐道地進行比較。
逐點描圖(或用手工,或用描圖儀、計算機系統)是大家常用的數據分析的重要手段。我們常可以用來了解數據的特性、尋找那些不曾預料的特異徵兆、選擇統計分析的模型、顯示最終結果等。事實上,不經過先對數據進行直觀觀察分析就決不應該對這批數據進行數值分析。從這一點來看,非參數分析是參數分析的基礎。
逐道比較工作量較大,但用直觀法很容易發現明顯的差異,特別是對照組和測試組。考慮到FCM的可靠性,要注意到對每組測量,都要有對照組,對照組可以是空白對照組、陰性對照組、或零時刻對照組等,具體設置應根據整體實驗要求而定。對照組和測試組的逐道比較往往可以減少許多不必要的誤差和錯誤解釋。順便指出,進行比較時對曲線的總細胞數進行歸一化處理,甚至對兩條曲線逐道相減而得到「差結果曲線」往往是適宜的。
因為數據分析往往和結果解釋關系十分密切,也就是說和生物學背景相關,因此具體的分析法和原理將在後面結合實例再介紹。
❽ 各種染料對應的流式細胞儀的通道是什麼
1、通道是:利用Miltenyi或其他公司的磁珠對目的細胞做預純化或清洗可提高分揀效率。當然,僅僅利用一輪或多輪磁珠篩選而不用流式細胞儀,許多研究也能開展起來,但這不是本文討論的重點。Amnis 公司已將流式細胞儀射流與熒光顯微鏡和數字成像整合在一起。其結果是一系列單個細胞的圖像能夠顯示熒光團的分布,而非簡單的平均熒光指數(MFI)。
2、目前有33種不同的金屬可被同時檢測。該儀器被Time of Flight 稱為"Cytof" [1] 。考慮購買該儀器的研究人員應該確保他們有這一深度的細胞分析需要。此外,細胞在等離子體中會被汽化,所以用於研究的細胞不能恢復。蒸汽分揀儀硬體設備簡單,檢測點與收集裝置間距離較短,檢測樣品的激光數多。而流動細胞分揀系統通過比色皿提供層流和增強的樣品聚焦。
3、然而,流動細胞長度有限,而且激光光學裝置需要足夠空間避免不同通道間的串擾。對於敏感性來說,流動細胞系統明顯占優,但蒸汽系統沒有保持細胞清潔的問題,並且能提供額外的激光束。需要指出的是,有些激光束本身對細胞有毒害作用。